早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及 α 晶状体球蛋白 B 的表达与验证

目的：建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶 蛋白分子并进行验证。方法：制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用 双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白 分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果：成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实 验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶 上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋 白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组 学结果一致。结论：α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。     

DDR1基因在不同复发倾向肝癌患者中的表达水平差异及在肝癌临床预后中的价值

[目的]探讨DDR1基因在不同复发倾向肝癌患者中的表达水平差异及在肝癌临床预后中的价值.[方法]从本院肝癌标本库中选取2008年3月至2012年4月期间在本院进行肝癌根治性切除手术患者的肝癌标本23例作为研究材料,以无肝脏疾病的胆囊结石患者肝脏组织10人作为正常对照组.以免疫组化和Western blotting以及酶联免疫反应(ELISA)检测肝组织中DDR1的表达情况,根据表达情况分为DDR1阳性组(11例)和阴性组(12例).同时对术后患者进行为期2年的随访,根据复发情况分为早期复发组和非早期复发组,最后以不同组别的DDR1表达情况及不同表达情况的肝癌患者的生存率作对比分析.[结果]χ2检验结果表明早期复发肝癌组织和非早期复发肝癌组织DDR1阳性率差异显著(χ2=7.013,P<0.01)即DDR1在早期复发肝癌组织中表达量显著高于非早期复发肝癌组织,且与正常肝组织相比,二者DDR1阳性率均显著高于对照组,存在显著差异(P<0.05).t检验结果也表明DDR1蛋白在早期复发肝癌组织较非早期复发肝癌组织的表达量显著增高,两者之间具有统计学差异(t=2.786,P<0.05).肝癌组织中DDR1基因的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径和Edmonson分级无关而与患者早期复发倾向有着较为明显的相关性(t=16.186,P<0.01).DDR1在肝癌组织中的表达情况与术后患者的生存率并无明显的相关性.[结论]与非早期复发肝癌患者组织相比DDR1基因在早期复发的肝癌患者组织中的阳性率及表达量显著增高,因此可以将其表达情况作为判断肝癌患者术后预后的指标之一.     

ERK1/2磷酸化在鼻息肉组织中的表达及其意义

目的:研究磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在鼻息肉组织中的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学研究磷酸化的ERK1/2在鼻息肉组织和正常中鼻甲黏膜的表达及定位.进一步用免疫印迹对磷酸化ERK1/2在鼻息肉组织的表达进行半定量分析.结果:免疫组织化学发现,磷酸化ERK1/2在鼻息肉表达显著高于正常对照组,主要定位于增生的上皮细胞、炎症细胞、腺上皮细胞和内皮细胞,且以胞核阳性为主.免疫印迹结果显示鼻息肉中磷酸化ERK1/2的表达显著高于正常中鼻甲黏膜,为其4.2倍.结论:研究提示磷酸化ERK1/2可能在鼻息肉的发生发展过程中起重要作用.     

肺泡Ⅱ型细胞的研究进展

肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)是一种多功能细胞,能分化为肺泡Ⅰ型细胞(ATI),合成和分泌生长因子、细胞因子、炎症介质等生物活性物质;控制水钠转运;参与肺损伤修复、炎症反应及肺纤维化等病理过程.在维持肺生理状态和多种肺疾病中具有重要作用.     

二氧化硅对人肺泡Ⅱ型上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1和激活蛋白-1表达的影响

目的研究SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)及激活蛋白1(AP1)表达的影响,探讨SiO2致肺纤维化的发病机制。方法按SiO2(200μg/ml)与A549细胞共育时间的不同,实验分SiO2刺激0、4、8、16、24h组。利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Westernblot及免疫细胞化学SP法检测细胞PAI1mRNA和蛋白的表达;AP1(cjun/cfos)总蛋白及核蛋白表达的检测采用Westernblotting。结果SiO2刺激后,实验组PAI1mRNA及蛋白表达强度随时间延长依次增强,呈直线正相关(rmRNA=0.911,r蛋白=0.902,P<0.05),且实验组PAI1蛋白表达均高于对照组(0.36±0.03),其中24h组(0.73±0.01)表达最强;cjun和cfos核蛋白的表达亦明显高于对照组(0.52±0.02、0.15±0.01),cjun核蛋白的表达4h组(1.54±0.02)最强;cfos核蛋白表达8h组(0.36±0.01)最强;cjun和cfos核蛋白的表达均从孵育16h开始逐渐下降。AP1(cjun/cfos)总蛋白的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05);PAI1阳性信号定位于胞浆和胞核。结论SiO2能够诱导A549细胞PAI1的表达,呈现出明显的时间-效应关系,核转录因子AP1在SiO2刺激的早期被激活。     

转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞平滑肌肌动蛋白α表达的影响

在肺纤维化动物模型以及人类特发性肺纤维化(IPF)中,纤维化肺组织局部不仅转化生长因子β1(TGF β1)水平升高,而且还聚集了大量表达平滑肌肌动蛋白α(αSMA)的肌成纤维细胞。肌成纤维细胞与肺纤维化进展过程密切。本研究拟探讨外源性TGF β1对人胚肺成纤维细胞αSMA蛋白和mRNA表达水平的影响。材料与方法　材料:人胚肺成纤维细胞系(HLF 0 2 )由我校细胞中心构建[1] 。TGF β1为Peprotech公司产品,小鼠αSMA单克隆抗体购自Novocastra公司,RTKit为Promega产品,TrizolRNA提取试剂购自LifeTechnology公司,SPKit则由北京中山公…     

肺泡II型细胞的研究进展

肺泡II型细胞 (ATII)是一种多功能细胞 ,能分化为肺泡I型细胞 (ATI) ,合成和分泌生长因子、细胞因子、炎症介质等生物活性物质 ;控制水钠转运 ;参与肺损伤修复、炎症反应及肺纤维化等病理过程。在维持肺生理状态和多种肺疾病中具有重要作用。     

大鼠硅肺纤维化中NF-κB和MMP-9的表达

目的 研究核转录因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达在硅肺纤维化发生发展中的作用。方法 应用免疫组化SP法观察NF-κB和MMP-9在大鼠硅肺组织中的表达。结果 对照组支气管上皮细胞、肺巨噬细胞和肺间质细胞均可表达NF-κB和MMP-9，肺泡上皮细胞和血管内皮细胞未见表达。实验组的支气管上皮细胞、肺巨噬细胞、间质细胞和肺泡上皮细胞NF-κB、MMP-9表达均明显增加。在实验的每一个时间点，肺巨噬细胞、肺间质细胞中NF-κB和MMP-9的半定量表达基本同步，呈明显正相关。支气管上皮细胞NF-κB在1～28d均呈持续高水平表达，但MMP-9在14d后开始减少；肺泡上皮细胞NF-κB在114d呈较高水平表达，以后下降，而MMP-9仅于第3～7天时有阳性表达。结论 矽尘作用下肺内多种细胞NF-κB和MMP-9表达增加，并可能通过NF-κB介导调控MMP-9表达而影响硅肺的发生发展。     

舌下特异性免疫治疗儿童过敏性哮喘86例临床疗效观察

目的：研究粉尘螨滴剂舌下特异性免疫（SLIT）治疗儿童哮喘的有效性。方法：将确诊为变态反应性哮喘且粉尘螨变应原皮肤点刺试验呈阳性反应86例患儿随机分为SLIT组（n=45）和常规治疗对照组（n=41）。常规治疗组按照儿童哮喘规范化治疗方案治疗,SLIT组在常规规范化治疗的基础上,加用舌下含服粉尘螨滴剂,观察两组治疗后哮喘临床症状改善情况。并分别于治疗前、后抽取患儿静脉血,分离血清,采用ELISA法测定白细胞介素-4（IL-4）及7干扰素（IFN-γ）的血清含量。结果：经治疗24周后,SLIT组的症状评分降低值及临床有效率均明显高于常规治疗组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;SLIT组部分患儿出现红肿瘙痒等局部反应,均于次日自行消失。与治疗前相比,对照组治疗后IL-4及IFN-γ血清含量比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;而SLIT组经过SLIT治疗后,IL-4水平明显下降,IFN-γ水平明显上升,差异具有统计学意义（P〈0．05）;治疗后SLIT组较对照组IL-4水平下降,IFN—γ水平上升,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：粉尘螨滴剂舌下免疫能改善哮喘儿童的症状,纠正Th1／Th2的平衡,对儿童变态反应性哮喘具有良好的效果。