反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义

目的研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法分别利用RTPCR和Western blot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF—1α的表达水平。结果常氧条件下，在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1α mRNA的表达，其表达水平无明显差异；对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测，同样发现常氧时即有HIF-1α的表达，但表达水平明显不同。结论常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达；在胃癌细胞系中，HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平；HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达，提示除缺氧刺激外，非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。     

fas基因与bcl-2反义RNA转导胃癌耐药细胞的药敏上调效应

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.     

转染Bcl-2反义核酸对胃癌细胞药物敏感性的影响

以手术根治为主的胃癌综合治疗，五年生存率只有３７－７％，对胃癌的化疗并未取得理想的效果［１］．Ｂｃｌ２基因的异常表达，不仅与胃癌的发生有关，其抗凋亡作用的发挥，势必影响化疗效果［２］；肿瘤细胞对化疗药物存在多药耐药现象，缘于多种机制，Ｂｃｌ２基因的异常表达可能与之有关［３］．我们通过ｐＤＯＲ载体将Ｂｃｌ２反义核酸转染胃癌细胞，观察转导细胞对化疗药物顺铂（ＤＤＰ）、５氟脲嘧啶（５ＦＵ）、长春新碱（ＶＣＲ）的敏感性调变，能否逆转耐药，为胃癌的治疗探索新的途径．１　材料和方法１．１　材料　人…     

以胶原水凝胶为支架构建肝细胞三维培养系统CSCD

背景:肝细胞体外培养时快速失去功能限制了肝细胞疗法的发展。目的:以胶原水凝胶为支架建立能够长时间有效维持肝细胞功能的肝细胞三维培养系统。方法:将SD大鼠肝细胞与预混肝细胞生长因子及DMEM的液态Ⅰ型胶原混合,形成肝细胞/胶原凝胶复合物,将该复合物接种至培养板,待形成胶冻状凝胶后再加培养液进行培养。通过光学显微镜、苏木精-伊红染色及透射电子显微镜对肝细胞的形态学特征及超微结构进行观察;并通过糖原染色、免疫荧光染色、实时定量PCR进一步对肝细胞特异表型及功能进行检测。收集培养上清,检测细胞白蛋白及尿素合成能力。结果与结论:①肝细胞/胶原水凝胶复合物形成后,可见肝细胞呈圆形分布于水凝胶中,培养14d后仍保持肝细胞形态并呈类似肝脏结构的肝索样聚集排列,超微结构观察显示肝细胞之间形成紧密连接。②培养14d后,糖原染色、白蛋白及肝细胞核因子4α免疫荧光染色呈阳性,证实肝细胞具有糖原及白蛋白合成能力并仍具有分化潜能。③三维培养中,肝细胞的白蛋白及尿素合成能力及分泌水平明显高于二维培养,且至少能够在较高水平维持15d。④培养7d后,Albumin、HNF-4α、Claudin-3、CYP1A1、CYP3A1以及G6P等肝细胞特异性基因的表达水平明显高于二维培养。以上结果证实,以胶原水凝胶为支架构建的三维培养系统使肝细胞在结构上更类似肝脏组织,并能在更长时间内有效的维持肝细胞合成代谢等各方面功能。     

中华医学会第二十二次全国消化系病学术会议纪要

2022亚太消化疾病周大会暨中华医学会第二十二次全国消化系病学术会议在全国消化专家和同道的精诚合作下, 立足国内、融入国际, 于2022年11月17至20日采用全线上形式召开。本次会议实际会期为1 d, 设立院士论坛, 主委论坛, 以及专题报告、专题发言和口头交流等学术专场, 共8个大会主旨报告、21个专题报告、25个专题发言、27个口头交流, 以更丰富的形式展现从基础研究到临床实践, 以及近年来国内外消化领域的新概念、新技术、新进展, 扩展了全国消化系病学术大会的深度和广度, 推动消化领域学术交流迈入新的时代。     

血管生物学在门静脉高压症治疗中的作用

门静脉高压症的发生与肝内外血管的显著改变有关,随着对血管生物学的深入研究,目前对与门静脉高压症有关的动态血管变化的机制有了更加深入的了解。综述了与门静脉高压症相关的血管生物学进展,如肝血管细胞以及它们的信号通路发生变化与肝内血管阻力增加有关,从而导致了门静脉高压症的发生,而肠系膜动脉血管舒张致使进入门静脉的血流量增加,加剧了门静脉高压。进一步深入了解它们的作用机制及靶向分子通路,将为治疗门静脉高压提供新的前景。     

MicroRNA-107通过负性调控抑癌基因DICER1促进胃癌的侵袭和转移

MicroRNA（miRNA）是小的非编码RNA分子,可负性涮控基凶的表达。以往的研究表明,miR-107在胃癌组织中的表达高于正常胃粘膜组织。但miR-107调控胃癌发生发展的作用和机制尚未见报道。本研究巾,我们发现miR-107在胃癌组织巾高表达并与胃癌的转移显著相关。