多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化

目的在前期的研究中，DAZAP2基因在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）患者中表达明显下调，可能为MM的负性基因．须进一步获得DAZAP2蛋白，制备抗体，从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能．方法将原核重组质粒pQE30－DAZAP2转化大肠杆菌，阳性菌株经1 mmol／LIPTG诱导表达目的蛋白，再经过纯化和透析结果IPTG诱导4hr时，得到大量重组目的蛋白，占可溶蛋白的20％左右，经过Ni—NTA层析柱纯化。获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0．97mg／m1．结论DAZAP2蛋白获得高效表达，并且建立快速简便的纯化方法，目的蛋白可以用于下一步的实验．     

基于激光解析/离子化飞行时间质谱技术的中药龟甲胶蛋白质组分析

目的对传统中药龟甲胶蛋白质、肽成分进行组蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐法获得龟甲胶蛋白质成分,美国Ciphergen Biosystems Inc.ProteinChip Biology System(PBSⅡ )及配套的NP10芯片、激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS,Surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flightmass spectro metry)技术,分析了龟甲胶1 500～13 000 Da区间蛋白质、肽分布及其分子量。结果龟甲胶蛋白质/肽质量1 500～3 000区间显示1个分子量峰;4 800～5 400显示3个分子量峰,其中相对分子量分别相差410.8、151.7;8 000～8 600区间显示1个分子量峰;10 000～13 000区间显示1个分子量峰。共获得6个肽分子量峰。结论通过分析,可以形成龟甲胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为龟甲胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证龟甲胶功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。     

鼻咽癌恶性转化基因的克隆及其生物物理性状的研究

利用小鼠JB6细胞和分子克隆技术，湖南医科大学肿瘤研究所成功地从中国人鼻咽癌细胞珠CNE中克隆出恶性转化基因Tx。Tx基因在DNA杂交水平与Ha－ras、Ki－ras、及N－ras瘤基因以及src、myb、jun、fos、raf、int－2等无同源，将该基因转染至受体细胞JB6C141中能引起细胞转化，从而     

以蛋白质芯片为中药蛋白质/肽相互作用载体分析中药地龙生干品和炮制品的生物学特征

背景:激光解析、离子化一飞行时间质谱技术为以蛋白质/肽为主要成分的中药蛋白质组学研究提供了重要的技术平台.目的:对传统中药地龙蛋白,肽成分进行蛋白质组分析.设计、时间及地点:对比实验,于2004-12/2005-10在中南大学生物科学与技术学院分子生物学实验中心完成.材料:生干地龙和炮制品(沙烫)地龙,均购于湖南长沙九芝集团芝林大药房,源产地湖南.方法:以蛋白质芯片为载体,激光解析、离子化-飞行时间质谱法获取两者所含蛋白质,肽成分信息.主要观察指标:两种地龙Mr 1500～13 000区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量.结果:共获得29个蛋白质,肽相对分子质量峰,其中生干品地龙17个有意义峰,炮制品地龙获取12个峰;多个相邻蛋白质峰之间质量相差一个氨基酸残基.并且生地龙与炮地龙有多组相对分子质量分别极为相近,推测可能为相同的肽段.结论:应用激光解析、离子化一飞行时间质谱技术可以形成生品地龙及炮地龙蛋白质,肽成分质量指纹图,可作为地龙数字化质控标准,并为进一步分离、纯化及验证中药地龙功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础.     

CT引导脑内植入携带人类酪氨酸羟化酶基因腺相关病毒载体治疗实验性帕金森病猴

目的 观察CT引导脑内注射入类酪氨酸羟化酶基因腺相关病毒载体(AAV—hTH)对神经细胞的转染能力，以及对帕金森病(PD)猴的治疗效应。方法 经右侧颈内动脉注射1-甲基4-苯基-1，2，3，6一四氢吡啶(MPTP)制作6只偏侧帕金森病恒河猴模型，经CT引导将AAV—hTH注入5只帕金森病猴右侧尾状核内，观测猴模型的行为学改变6个月以上，以高效液相色谱法(HLPC)测定转染后尾状核内多巴胺(DA)及其代谢产物含量，并以免疫组化检测法及逆转录-聚合酶链式反应(RT—PCR)方法检测酪氨酸羟化酶(TH)基因的表达情况。结果 CT引导定位穿刺有实时操作、定位精确、微创的优点。所有注射AAV—hTH的偏侧PD猴模型术后2周即有帕金森病症状改善，持续6个月以上，其中1只动物阿朴吗啡旋转实验示完全停止了帕金森病旋转现象，其余动物旋转次数较术前减少约42％～70％。实验侧与健侧尾状核区多巴胺及其代谢产物含量比值较未治疗模型增高。免疫组化染色见穿刺针道部位有大量TH阳性细胞；RT—PCR检测到实验侧尾状核区有TH-mRNA存在；而对照侧尾状核区、其他部位脑组织与心、肝、肾组织及未注射模型实验侧尾状核区均未见阳性发现。结论 CT引导立体定向穿刺PD猴尾状核注入AAV—hTH能使TH基因精确地在特定部位有效表达，提高尾状核区DA含量，改善模型猴症状，研究结果提示这是一种有效、安全的治疗PD非人类灵长类动物模型的方法。为临床基因治疗PD的研究提供了实验研究依据。     

白色念珠菌分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞作用机制的初步研究

目的：探讨白色念珠菌（ID16VI）分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞（ARH-77）的作用。方法：荧光染色观察对照组和实验组细胞形态变化；FCM检测凋亡细胞百分率。结果：荧光显微镜下观察到白色念珠菌分泌物处理组的凋亡细胞增多；FCM检测实验组凋亡细胞百分率上升。结论：白色念珠菌分泌物能促进ARH-77细胞凋亡。     

E2F对细胞周期的影响

细胞增殖是一种有序的、高度调节的过程，包括细胞外生长信号、细胞大小和DNA完整性。体细胞周期可以分为分裂间期和有丝分裂期：分裂间期(包括G1、G2和S阶段)，细胞生长并合成DNA；有丝分裂期，一个单细胞分裂成两个子细胞。在适当的外界刺激下，G0期(静止期)的细胞进入到G1早期，然而在没有外界生长刺激时，G1早期的细胞又可以     

分泌高滴度重组人糖皮质激素β受体正义和反义cDNA逆转录病毒细胞系的建立

目的：建立分泌重组人糖皮质激素β受体cDNA的逆转录病毒的细胞系。方法：脂质体介导含人糖皮质激素β受体正义和反义全长cDNA的重组逆病毒质粒分别转染包装细胞PA317，经G418筛选抗性克隆。结果：细胞培养上清液的RT-PCR联合序列分析表明G418抗性PA317细胞克隆能稳定合成并分泌相应的重组病毒颗粒；NIH3T3细胞测定的正、反义cDNA重组病毒滴度分别为2×105 CFU/ml和1.8×105 CFU/ml。结论：成功建立了能分别产生重组hGRβ正义和反义cDNA逆转录病毒的高滴度细胞系，为后续研究工作打下坚实基础。     

人参茎叶总皂苷对负重游泳小鼠抗疲劳作用及其机制

目的探讨人参茎叶总皂苷(GSLS)的抗疲劳作用及其机制。方法清洁级昆明种小鼠40只,雌雄各半,体质量(21±3)g,随机分为对照组(NC组)、GSLS 10mg/(kg.d)组(LD组)、GSLS 40mg/(kg.d)组(MD组)、GSLS 160mg/(kg.d)组(HD组),每组又分为7d和28d组。NC组给予生理盐水灌胃7d或28d,LD、MD、HD组给予相应剂量的GSLS连续灌胃7d或28d。测定各组小鼠力竭游泳时间、肌糖原、乳酸脱氢酶(LDH)、血尿素氮(BUN)等指标的变化。结果 GSLS灌胃28d后,MD、HD组小鼠体内肌糖原水平均有显著提高(F=6.62,q=6.565、5.102,P<0.01)。MD组运动后LDH活性明显提高(F=6.91,q=9.021,P<0.01),运动后血BUN的水平降低,加速体内BUN的清除(F=5.25,q=4.329,P<0.05)。结论 GSLS通过调节糖原储存、增加LDH活性、调整血尿素氮含量而产生抗疲劳作用,其中以40mg/(kg.d)为最佳用量,而160mg/(kg.d)灌胃28d可能存在一定毒性。