百日咳杆菌毒素S1亚单位突变体的研究进展

百日咳杆菌毒素(PT)是目前无细胞百日咳疫苗中的主要保护性成分,其中PT的S1亚单位又是其主要的功能性亚基,具有免疫保护活性和多种毒性。在对多个S1突变体的生物学及免疫学研究后发现,其中的一个S1的双位点突变体(PTX-9K/129G)在保持有良好的免疫原性和免疫保护作用的基础上,大大降低了PT的毒性,有望成为理想的百日咳疫苗候补抗原。     

重组表达幽门螺杆菌致病岛CagL蛋白及其中和抗体初步研究

目的 重组表达幽门螺杆菌(Helicobacterpriori,Hp)cagL基因,并制备兔抗多克隆抗体及阻断Hp黏附宿主细胞实验.方法 用PCR方法 扩增出cagL基因片段,将目的 基因构建至表达载体pET22b中并诱导表达.采用亲和层析法纯化蛋白,以纯化蛋白为抗原免疫家兔,制备兔抗CagL多克隆抗体血清,并用多克隆抗体血清进行阻断坳黏附宿主细胞实验及细胞因子IL-8活性分析.结果 成功构建表达纯化了CagL重组蛋白,制备CagL蛋白兔抗多克隆血清,并初步验证了多克隆抗体血清在体外和Hp黏附作用的关系.与对照菌相比,重组菌CagL在25 X 103.附近均出现新的蛋白表达条带,且诱导6 h时表达量最高.UVP扫描分析目的 蛋白占菌体总蛋白的35%～40%.SDS-PAGE显示重组蛋白CagL主要以包涵体形式存在于超声沉淀中.ELISA结果显示兔抗CagL多克隆抗体的滴度为1:16 000 EU.Giemsa染色后显微镜观察可见坳菌与HeLa细胞呈典型的聚集性黏附,抗体中和后Hp与HeLa细胞未见黏附,加入DH5α的HeLa细胞也未见细菌黏附.结论 多克隆抗体血清对Hp黏附定植有一定阻断作用,并且可以减少Hp促进细胞分泌IL-8的能力.     

免疫学方法治疗烟草依赖的现状

动物实验显示,疫苗和尼古丁特异性抗体可以显著减轻尼古丁的行为效应,而后者与烟草依赖密切相关,这为免疫学方法治疗烟草依赖提供了依据.迄今为止,尼古丁疫苗的Ⅰ期临床试验结果证实,疫苗可以诱生相应的抗体,抗体水平呈剂量依赖性升高,而且不会引起严重的不良反应.这表明免疫学方法治疗烟草依赖有着很大的前景.本文主要就以上研究内容和相关进展进行简要综述.     

生物技术实验课教学质量的探索与思考

生物技术是一门交叉学科,同时也是一门实践性很强的课程,是连接基础理论与实验操作乃至科学研究的桥梁.生物技术专业的学生大多数要走上基础和运用研究的道路,在专业课学习过程中打牢理论基础,加深对科学研究的认识、培养过硬的实验技能和分析解决问题的能力,对今后的学习和工作不无裨益.实验教学在生物技术教学过程中占有重要地位,而随着生物技术专业的不断发展,对实验教学的教学理念、教学方法和质量监控都提出了新的要求.通过实验课的教学,不仅要加强学生对理论知识的理解和消化,提高学生动手操作能力,更要培养学生运用理论知识解决实际问题和独立思考的能力,培养学生勇于探索和创新的精神.通过近几年的生物技术本科专业实验教学实践,作者对上好生物技术实验课的认识积累了几点经验.     

生物技术制药科研式实验教学的实践与体会

生物技术制药是当今世界科学发展中极为重要、极为活跃的领域。随着该产业的迅猛发展,对生物技术制药人才的需求也日益增加。鉴于此,第三军医大学从2007年开始在药学和生物技术本科专业开设了《生物技术制药》这门课程。该课程是一门新兴的交叉学科,目前国内开设本课程的院校较少,可借鉴的经验不多。教学实践过程中,本校通过充分利用国家免疫生物制品工程技术研究中心的平台优势,在该课程的实验教学中推广科研式的教学模式,取得了良好的效果,现将如何提高该课程实验教学质量的措施和体会总结如下。     

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗, 在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白, 经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗, 经皮下注射免疫新西兰兔, 心脏采血分离血清, 用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体, 同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次, 间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d, 通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型, 感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗, 通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异, 以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果 KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05), 免疫组生存率显著高于对照组[70% (7/10)vs 10% (1/10), P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及...     

严重创伤患者凝血纤溶特点分析

目的 探讨严重创伤患者凝血纤溶功能障碍,寻求反映创伤患者凝血纤溶功能障碍的敏感指标.方法 选取54例严重创伤患者,分别在手术前及手术后第1天和第5天测定其血浆凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、凝血酶原裂解片段(F1 2)、D-二聚体、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)5项指标水平,并与正常对照组(50例)进行比较.结果 手术前患者组与对照组相比F1 2、TAT、D-二聚体差异均有统计学意义(P<0.05);手术后第1天这3项指标均达3次结果 峰值(P<0.01),手术后第4天3项指标均稍有下降,但差异无统计学意义;3次测定结果 中,APTT、PT结果 与正常对照组差异均无统计学意义.结论 严重创伤患者F1 2、TAT、D-二聚体升高,提示患者处于高凝状态,并有继发性纤溶亢进,在反映严重创伤患者凝血纤溶功能障碍中,这些分子指标优于常规凝血象检查.     

重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因多态性研究

目的了解中国重庆地区汉族人群人类白细胞抗原HLA-DRB1基因多态性及其分布特点。方法应用自行建立的聚合酶链式反应-测序为基础的分型方法(PCR-SBT)对190例重庆地区汉族人群进行HLA-DRB1基因分型和多态性分析。结果共检测出13种HLA-DRB1等位基因,20种等位基因型。其中,HLA-DRB1*09:01(29.1%)等位基因频率最高,其次为HLA-DRB1*04:05(12.2%)、HLA-DRB1*08:03(9.3%),基因频率最低的是HLA-DRB1*12:01、HLA-DRB1*12:02、HLA-DRB1*14:05和HLA-DRB1*15:02,各占1.26%。此外,检出的20种HLA-DRB1等位基因型在男女性别间无显著差异。结论成功建立并优化了HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法;重庆地区汉族人群HLA-DRB1等位基因呈现多态性,为群体遗传和疾病关联的研究提供了可靠的遗传学数据。     

幽门螺杆菌黏附素A抗原H-2~d(I-A)限制性免疫优势Th表位的筛选与鉴定

目的鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)黏附素A抗原(HpaA)H-2d限制性免疫优势Th表位,为H.pylori表位疫苗的研究提供候选表位。方法采用体外扩增的HpaA抗原特异性T细胞和步移重叠合成肽筛选鉴定HpaA抗原的免疫优势Th表位,再利用抗体阻断实验对其H-2d限制性进行分析。结果 18mer氨基酸肽段筛选发现肽段H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237能够激发HpaA特异性CD4+T细胞产生γ-干扰素。其中H154-171激发的应答最强。13mer氨基酸短肽鉴定结果显示:仅H158-170能刺激产生强于18mer氨基酸短肽H154-171的应答反应。同时,抗体阻断试验结果表明:抗H-2d(I-A)抗体能有效阻断该表位激发的应答。结论 H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237是HpaA的小鼠H-2d限制性Th表位,其中H154-171为免疫优势表位肽,该表位的核心氨基酸序列为H158-170,并存在H-2d(I-A)限制性。该研究将为H.pylori表位疫苗研究提供了可能的候选分子。