单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究

目的：构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)糖蛋白BDNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法：PCR扩增编码HSV-Ⅰ gB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp)，定向插入pcDNA3载体中，构建pcDNA3-gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALB／c小鼠注射免疫3次，观察小鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的变化，CFSE／PI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果：双酶切分析结果为目的基因(2．7kb)和线性质粒pcDNA3(5．4kb)；PCR扩增结果为特异产物(2．7kb)；测序结果与GenBank gB基因序列同源性达99．5％；CTL，活性增强；BALB／c小鼠脾CD4^ T细胞增加。结论：经鉴定证实了HSV-Ⅰ gB基因疫苗的构建；HSV-Ⅰ gB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答，应用于预防HSV-Ⅰ的感染具有良好的前景。     

流式细胞术检测细胞毒方法的建立

目的：建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法：用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞，再用碘化丙碇(PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为100：1—6．25：1，共孵育时间为1-6小时，流式细胞仪收集1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果：CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料，18小时后也能很好地区分效靶细胞；靶细胞的自然死亡率低于5％；杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4小时。结论：CFSE／PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点：避免放射性试剂的应用，敏感性增强，单细胞水平的分析。     

复用物品分散与集中管理的质量比较

随着医学技术的发展,临床使用的物品种类、数量也越来越多。医院复用物品的清洗消毒,既往大多是由使用科室自行处理,由于缺乏专业规范的清洗流程及设备,清洗消毒质量存在安全隐患,而呼吸机管道、湿化瓶、雾化器等消毒不彻底是引起外源性医院感染的原因之一[1]。现今观点认为,集中处置能够提高物品的清洗消毒效果,预防和减少外源性医院感染,保障患者安全。我院自2012年开始逐步实行物品在消毒供应中心（CSSD）集中清洗、消毒、包装、循环使用的管理模式。     

消毒供应室在等级医院评审中的质量管理与持续改进

等级医院评审标准条款遵循PDCA循环原理,通过质量管理计划的制订及组织实施的过程,实现医疗质量和安全的持续改进。从2012年10月份我院专门成立了三甲医院复审工作领导小组,专设等级医院复审工作办公室和专职人员进行资料归档及迎检工作,明确责任,制定了持续改进的实施计划,经过全院动员培训、措施实施、自我评审、自查整改等阶段,各项管理工作取得了明显的成效。1资料与方法按照等级医院的条款要求,制定实施计划、按     

单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B基因疫苗的构建及其诱导小鼠细胞免疫应答

目的:构建、制备单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B DNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答效果。方法:利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1 gB14～507氨基酸序列的一段基因。定向插入真核表达质粒pcDNA₃载体中，构建出重组真核表达质粒pcDNA₃-gBt，并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。于BALB/c鼠注射免疫3次，抗体分析CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群的变化，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)/碘化丙碇(PI)双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:PCR及测序鉴定结果显示，插入的克隆基因与GenBank中HSV-1F株gB基因序列一致，证实了HSV-1 gBt核酸疫苗的构建；pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD4⁺T细胞数较空质粒（pcDNA₃）对照组和生理盐水对照组增加，CTL活性也较对照组明显增强，但是pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD8⁺T细胞、CD4⁺/ CD8⁺T细胞比值与对照组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论:HSV-1 gBt核酸疫苗诱导较强的细胞免疫应答。     

鱼骨图在分析影响妇科器械返洗率因素中的应用

清洗就是去除器械上的污染物,妇科器械的专科特点：使用后附有黏性很大的分泌物、胎脂、胎膜、血凝块等污染物,其二,种类繁多、形状复杂、结构特殊,带有关节、齿槽、细孔、盲管、螺丝、螺纹及各种型号吸引管等.如果得不到彻底的清除,将阻断灭菌因子对微生物的杀灭作用,导致灭菌失败.据研究资料显示,器械因清洗不彻底,压力蒸汽灭菌合格率维持在70％～95％,残余血阳性率为35.9％,可见器械的清洗至关重要.     

不同预处理方法对妇科器械清洗效果的对比分析

目的：探讨不同预处理方法清洗妇科器械的效果。方法使用2h以上的非感染性妇科器械包（每包53件）21套,随机分为3组：碱清洗组、多酶清洗组和对照组;碱清洗组采用碱性清洗剂、多酶清洗组采用全效多酶清洗剂、对照组用常用水,3组在机洗＋酶清洗前分别预浸泡10 min;采用目测和残余血检测进行清洗效果比较。结果碱清洗组和多酶清洗组,目测合格率为96．22％和91．64％,两组差异无统计学意义,但与对照组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）;残余血测试：碱清洗组与多酶清洗组残余血测试结果均优于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;碱清洗组和多酶清洗组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论在机洗＋酶清洗前,使用碱清洗剂进行器械的预处理可以有效地去除蛋白质、油脂类等污染物,使妇科器械的清洗效果更好。     

消毒供应中心工作人员安全隐患分析及防范措施

目的 了解供应室工作人员安全隐患因素之间的关联性,采取有效的防护措施以减少安全隐患的发生率.方法 采用问卷调查方式,统计供应室工作人员职业安全防护知识的掌握情况,开展培训、讲座、建立管理规章、制定操作防护指南等干预措施,提高防护意识.结果 职业安全相关知识知晓率培训前为25.0％～52.9％,培训后93.3％～100.0％;职业暴露率培训前16.9％～55.8％,培训后0.7％～5.1％,培训前后差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供应室安全隐患普遍存在,广泛地推行标准预防,职业安全培训教育,规范操作流程,不失为减少工作人员职业安全隐患的有效手段.     

消毒供应室封闭回收箱清洗消毒方法的探讨

目的 分析评价供应室封闭回收箱清洗消毒的现状,探讨提高封闭回收箱清洗消毒质量的方法.方法 将供应室使用后的封闭回收箱分为观察组和对照组各30个,观察组采用多酶清洗液喷洒加消毒液擦拭法,对照组采用清水冲洗加消毒液擦拭法,清洗消毒后取回收箱3个部位进行采样并做细菌培养.结果 观察组回收箱清洗消毒后的合格率为96.67％,对照组为80.00％,两组回收箱内面、把手合格率差异有统计学意义(P＜0.05),回收箱外面合格率差异无统计学意义.结论 多酶清洗液喷洒加消毒液擦拭法能有效清除回收箱内的血液、体液等污渍,提高了消毒液擦拭的效果.     

供应室人员洗手依从性影响因素及干预措施

目的观察了解供应室人员洗手依从性的现状,分析供应室人员洗手依从性的影响因素,制定提高洗手依从性的措施。方法采用回顾分析的方法,对供应室回收人员、无菌发放人员、消毒员2010年4月洗手执行率进行隐蔽观察记录。结果观察3组10人洗手情况,回收人员在回收污染物品前后洗手依从率为63.80%,无菌发放人员在摆放和下送发放灭菌物品及一次性物品前后洗手依从率为59.44%,消毒员在装载和卸载灭菌物品时洗手依从率为45.41%,洗手执行率普遍较低,其中回收人员洗手执行率大于无菌发放人员,消毒员洗手依从性最低。结论针对供应室人员洗手依从性低,应采取有效的干预措施,以提高手卫生依从性。