转化生长因子-β1基因修饰未成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的 观察转化生长因子-β1 (TGF-β1)基因转染未成熟树突状细胞(imDC)对大鼠肝移植免疫耐受的诱导作用.方法 利用大鼠骨髓细胞诱导培养imDC,以脂质体介导的pIRES2-EGFP-hTGF-β1转染imDC,于移植前5d输注受体Lewis大鼠体内,移植后分别于3、7、10d抽血检测肝功能[总胆红素( TBIL)和谷丙转氨酶(ALT)]、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-12(IL-12)水平、肝组织苏木素-伊红(HE)染色急性排斥反应病理评分、原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测肝脏淋巴细胞的凋亡及观察各组大鼠肝移植后的生存时间.结果 TGF-β1组移植后肝功能(TBIL和ALT)优于各对照组(P＜0.05);TGF-β1组移植后3、7d血清IL-12浓度分别为71.03±10.70、80.88±14.23均低于各对照组(P＜0.05);TGF-β1组移植后7d出现交界性排斥反应,移植10 d后出现轻度排斥反应(P＜0.05);TGF-β1基因转染组移植后3、7、10d汇管区淋巴细胞凋亡指数分别为6.75±1.93、14.00±2.19、18.25±1.38,较各对照组均明显增高(P＜0.05);TGF-β1组大鼠移植后中位生存期为58 d,明显长于各对照组.结论 TGF-β1基因改造的imDC能诱导大鼠移植免疫耐受,在诱导器官移植耐受中有良好的应用前景.     

立体定向放疗对早期非小细胞肺癌患者肿瘤标记物及免疫功能的影响

目的 探讨立体定向放疗(SBRT)对早期非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤标记物及免疫功能的影响.方法 选择2018年10月至2020年10月福建医科大学孟超肝胆医院收治的120例早期NSCLC患者为研究对象,按随机数字表法将患者分为对照组和试验组,各60例.对照组行常规放疗,试验组行SBRT,比较两组临床疗效、肿瘤标...     

酵母双杂交法筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白相互作用的蛋白

目的:采用酵母双杂技术筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)相互作用的蛋白,以探讨TCTP的生物学功能。方法:采用PCR法扩增获得TCTP基因,并将其插入酵母双杂交诱饵载体中构建获得pDEST32-TCTP;检测pDEST32-TCTP在酵母菌中的表达和自激活情况,利用酵母双杂交系统筛选出带有靶蛋白基因的阳性克隆并测序鉴定;免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证人肝癌细胞Huh7中TCTP与细胞S期激酶相关蛋白-2(S-phase kinase-associated protein2,Skp2)的相互作用。结果:成功构建获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-TCTP,pDEST32-TCTP在酵母菌中可以表达,且在3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3AT)浓度为20mmol/L时无自激活作用。采用酵母双杂交系统共筛选获得6个可与TCTP相互作用蛋白的基因,包括Smad4、人热休克蛋白60(heat shock protein60,HSP60)、TAKl、Bcl-xl、卵泡抑素(follistatin,FS)和Skp2。其中Skp2与TCTP蛋白的相互作用在Co-IP中得到验证。结论:应用酵母双杂交系统可筛选获得一组与TCTP相互作用的蛋白,为进一步研究TCTP的生物学功能提供了可靠的实验依据。     

单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨

目的探讨单人建立稳定大鼠原位肝移植模型的手术难点及技巧。方法对200只成年雄性SD大鼠,采用改良的Kamada二袖套法,单人及双人裸眼下行大鼠原位肝移植各50对。结果单人与双人操作组供体手术时间、受体手术时间、无肝期分别为（27.22±1.03）min和（26.47±1.16）min、（50.58±3.10）min和（48.18±3.70）min、（11.60±0.11）min和（11.28±0.08）min。单人与双人操作组手术成功率、1周存活率、1个月存活率分别为90%和94%、88%和88%、84%和86%。结论改良的二袖套法,单人操作简便,成功率高,无需助手协助,可为大鼠原位肝移植实验提供稳定可靠的动物模型。     

肝细胞癌根治术后早期肺转移影响因素分析及预测的数学模型

目的 探讨肝细胞癌(HCC)根治术后早期肺转移影响因素及预测的数学模型.方法 对400例根治性切除术的肝细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、术前甲胎蛋白(AFP)、合并乙型肝炎病毒( HBV)感染、手术前肿瘤数目、合并肝硬化、肿瘤包膜、镜下脉管癌栓、病理分化分级进行单因素、多因素分析及数学建模.结果 术后1年肺转移发生率为8.0％ (32/400).有无肺转移组在肿瘤大小、术前AFP、镜下脉管癌栓方面比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后1年内肺转移的独立判断因素为肿瘤大小、镜下脉管癌栓,预测概率为1.14％～27.23％.结论 肿瘤大小、镜下脉管癌栓为术后早期肺转移的独立判断因素.     

人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共修饰树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的研究

目的 联合人凋亡相关因子配体(hFasL)及人转化生长因子-β1( hTGF-β1)基因共修饰大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞( imDC),提高imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力,以延长受鼠生存期.方法 行以DA大鼠为供体、近交系Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植140例,随机均分为7组:未给移植受鼠注射DC组(对照组)、mDC组、imDC组、空载体组、FasL组、TGF组及共转染组;分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC、hFasL修饰的imDC、hTGF-β1修饰的imDC、hFasL和hTGF-β1共修饰的imDC各2×106个,于肝移植术后3、7、10d各处死4只,观察外周血肝功能变化[丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)],肝脏病理改变,肝脏凋亡,外周血清细胞因子,并进行生存分析.结果 肝脏病理示术后7d,7组差异有统计学意义(P＜0.01),共转染组排斥反应均轻于TGF组和FasL组;10d时,7组差异有统计学意义(P＜0.01),共转染组排斥反应轻于TGF组和FasL组,TGF组轻于FasL组.肝功能示共转染组于7d时就已基本恢复正常,FasL组于7d时有所降低,但10 d时反而升高,ALT及TBIL的浓度均高于共转染组(P＜0.01,P＜0.05);TGF组到10 d时,肝功能已恢复正常,ALT及TBIL的浓度均低于FasL组(P＜0.01,P＜0.05),但与共转染组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).酶联免疫吸附试验(ELISA)检测示,术后7d共转染组和TGF组的血清白细胞介素(IL)-1、IL-10及IL-12与FasL组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);但共转染组和TGF组之间差异无统计学意义(P＞0.05).TUNEL显示FasL组的肝、脾及腹腔淋巴结中淋巴细胞凋亡指数与共转染组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),但多于TGF组,差异均有统计学意义(P＜0.05).FasL组中位生存期20 d与imDC组(23 d)差异无统计学意义(P＞0.05),而TGF组延长受鼠生存时间有限(48 d);只有共转染组出现长期存活的受鼠(＞90 d),均长于FasL组和TGF(P＜0.01,P=0.01).结论 imDC、hFasL或hTGF-β1单基因修饰imDC均未能诱导同种异体大鼠肝移植长期存活;hFasL 和hTGF-β1共转染的imDC诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受的能力显著增强,显著延长同种异体肝移植大鼠的生存期.     

肝脏移植受体手术与外科相关并发症防治

目的总结防治肝移植受体手术后外科相关并发症的方法与经验。方法回顾性分析2000年1月-2006年12月32例行肝移植患者临床资料,其中肝豆状核变性3例,慢性重症肝炎3例,晚期肝硬化12例（其中淤胆性肝硬化2例）,原发性肝癌合并肝硬化12例,肝门部胆管癌合并肝硬化2例。结果所有手术均获成功,术中平均出血量3 600（1 000-10 000）ml,手术时间平均5.2（4-9）h。围手术期死亡3例,分别死于术后出血、急性肾衰和移植肝无功能。术后腹腔出血4例,胆漏4例,胆管狭窄2例,无血管并发症。结论肝移植受体手术创伤大,术中应仔细操作,严密止血,高质量完成各种管道的重建,可大大减少各种外科相关并发症。     

肝尾状叶嗜铬细胞瘤手术切除一例

患者,女,24岁,以多汗,阵发性头痛,怕热4年为主诉入院.4年前无明显诱因出现怕热,多汗,头痛且易疲劳.入院查体:T 37.7℃,P 100次/min,R 20次/min,BP 152/110mm Hg,神志清楚,营养中等,自主体位,查体合作.多汗,双上肢体手指末端见青紫花纹,余查体未发现异常.     

肝移植围手术期中医药应用前景的思考

肝移植已成为治疗终末期肝病的常规手段,已取得令人瞩目的成就,多数肝移植中心5a存活率可达80%,个别肝移植中心更高.但肝移植仍然是高风险手术,围手术期正确处理仍是移植获得成功的关键.中医药已在其他各种危重患者的治疗中显示了较好的作用.由于肝移植在我国广泛开展时间不长,直至1977年上海瑞金医院首先开展临床肝移植,至1993年全国共18个单位施行了55例原位肝移植手术,患者大多数于术后近期死亡.     

肝移植围手术期中医药应用的初步研究

目的探讨中医药在促进移植肝缺血再灌注损伤的恢复、术后动脉血栓的防治、免疫调节、肠道功能的恢复等方面的作用。方法结合既往中医药研究的成果,对17例肝移植患者中的12例围手术期进行中西医结合治疗,另5例作为对照组,观察中医药在促进肠道功能的恢复、移植肝缺血再灌注损伤肝功酶谱的恢复、术后排斥反应的发生及免疫抑制剂的用量、术后动脉血栓的发生等方面的作用。结果2组患者恢复顺利,均无排斥反应,无血管并发症。中药组术后肠功能恢复时间明显短于对照组(P<0.001),肝功酶谱谷丙转氨酶和谷草转氨酶恢复快(P均<0.001),围手术期FK506的用量少(P<0.001)。结论中药在促进肝移植术后肝脏功能恢复、调节免疫、减少免疫抑制剂的用量等方面均有一定的作用,但这些结果仅仅是初步的,还有待进一步深入研究证实。