miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响

目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P 0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P 0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。     

透明质酸受体精子的质量特性研究

目的:分析具有透明质酸受体精子的质量特征,寻找精子质量评估新指标。方法:用透明质酸包被载玻片检测活动精子-透明质酸结合率,分析其与精液常规、精子膜功能、精子受精功能和精子成熟障碍指标的关系。结果:头部具有透明质酸结合位点的精子,顶体完整性[(95.4±3.9)%]、线粒体膜高电位率[(97.8±2.1)%]明显高于原始活动精子[(68.8±6.2)%和(72.8±7.4)%,P均0.01];精子-透明质酸结合率与多项精液常规参数呈弱相关性(r=0.195~0.268,P均0.05),与诱发顶体反应率和精子正常形态率呈正相关(r=0.666、0.417,P均0.01),与精子核蛋白不成熟度、DNA碎片率和过量残留胞质率呈负相关(r=-0.266、-0.308、-0.218,P0.01、0.01、0.05)。结论:头部存在透明质酸受体的精子,其质膜结构、受精潜能、成熟度俱佳;用于检测精子透明质酸受体的精子-透明质酸结合试验,是独立的精子多重质量评价新指标。     

肝硬化并门静脉血栓的中医证型及危险因素分析

【目的】探讨影响肝硬化患者形成门静脉血栓（PVT）的危险因素和PVT患者的中医证型分布规律。【方法】回顾性分析深圳市中医院2017年1月1日至2022年3月31日收治的475例肝硬化患者的临床资料，根据是否并发PVT分为PVT组62例和非PVT组413例。采用t检验、秩和检验及χ2检验对2组患者的临床资料进行分析，并采用多因素Logistic回归模型分析肝硬化合并PVT的危险因素。【结果】（1）中医证型分布方面，PVT组中，气虚血瘀证所占比例最大，占29.03%(18/62)，其次为湿热瘀阻证，占27.42%(17/62)，其他依次为气滞血瘀证[16.13%(10/62)]、肝郁脾虚证[14.52%(9/62)]、肝肾两虚证[12.90%(8/62)]。非PVT组中，肝郁脾虚证所占比例最大，占29.06%(120/413)，其余证型所占比例大致相当，分别为气虚血瘀证[19.61%(81/413)]、肝肾两虚证[17.43%(72/413)]、气滞血瘀证[16.95%(70/413)]和湿热瘀阻证[16.95%(70/413)]。（2）单因素分析结果显示：PVT组与非PVT组在谷草转氨酶...     

《湿热病篇》对下焦湿热证的论治探讨

对《湿热病篇》下焦湿热证的论治做了较系统的分析,结合现代研究从湿热成因、湿热辨证施治、当代研究近况等几方面阐述,用于指导临床治疗下焦湿热证特别是肾脏湿热证有一定的积极意义。     

胰腺癌早期诊断及其筛查

胰腺癌为胰腺肿瘤中最常见的一种,病死率高。在我国,胰腺癌的发病率呈逐年上升趋势,上海调查显示胰腺癌发病率年平均增加2%左右［1］。早期胰腺癌手术治疗效果较好,切除率为90%以上,5年生存率可达37%,但由于其位置隐蔽和临床表现不典型,很难早期发现,且无一种有效的检查、筛选方法,所以对无黄疸、局限于胰腺实质内、无转移的早期胰腺癌漏诊较多,一般确诊时多已存在局部或全身广泛转移,不能手术切除。     

维生素D受体基因多态性与慢性乙型肝炎患者的关联研究

目的:探讨维生素D受体(VDR)FokⅠ基因多态性与慢性乙型肝炎患者临床表型的关联。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测VDR FokⅠ基因的多态性在44例慢性乙型肝炎重度患者、46例中度患者和40例非活动性HBsAg携带者中的分布,并进行基因型分析。结果:慢性乙型肝炎重度组、慢性乙型肝炎中度组VDR FokⅠ基因的基因型与对照组(非活动性HBsAg携带者)比较差异有统计学意义(P0.01);慢性乙型肝炎重度组、中度组与对照组VDR FokⅠ基因酶切位点的等位基因F/f分布存差异有统计学意义(P0.01)。Pearson列联系数=0.53,提示等位基因F/f分布与慢性乙型肝炎患者的不同临床表型存在相关性。慢性乙型肝炎重度组、中度组f等位基因分布频率高于对照组。结论:VDR FokⅠ基因的多态性与慢性乙型肝炎患者的不同临床表型存在一定的关系。     

调气和血汤治疗乙型肝炎肝硬化40例

对乙型肝炎肝硬化的治疗目前常用保肝、抗肝纤维化及对症支持疗法，但疗效不满意。笔者采用自拟调气和血汤治疗该病，取得一定临床效果，报告如下。     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

沉默肝癌衍生生长因子对大肠癌细胞增殖的抑制

目的:研究沉默肝癌衍生生长因子(hepatomaderived growth factor, HDGF)对人大肠癌lovo细胞增殖的影响.方法:将3 条HDGF的特异性小干扰RNA(HDGF-siRNA)通过脂质体介导瞬时转染入大肠癌lovo细胞, RT-PCR及Western blot 法分别检测HDGF mRNA和蛋白质表达受抑程度, 并筛选出1条沉默效率最高的siRNA用于后续试验; MTT法观察HDGF-siRNA对大肠癌细胞增殖生长的影响; Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及ERK通路蛋白在转染前后大肠癌lovo细胞中表达含量的变化.结果:HDGF-siRNA转染能有效抑制大肠癌lovo细胞中HDGF的表达; 与空白及阴性对照组相比, RNA干扰组大肠癌lovo细胞增殖率明显降低(t=4.432,4.263, 均P<0.01)、PCNA和p-ERK1/2蛋白均明显下调(t=14.89,11.92,均P<0.01).结论:HDGF-siRNA不仅有效阻断HDGF在大肠癌lovo细胞的表达, 而且明显抑制大肠癌lovo细胞的增殖, 其作用机制可能与下调PCNA, 抑制ERK1/2蛋白活化有关.     

蛋白激酶B抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌细胞凋亡及Caspase-9表达的影响

目的检测蛋白激酶B（PKB）抑制剂SH-6联合抗肿瘤药物奥沙利铂对诱导人大肠癌细胞凋亡过程的影响。方法采用非放射性PKB活性免疫沉淀检测试剂盒检测SH-6干预前后细胞中PKB活性。将大肠癌细胞系lovo细胞分为4组：空白对照组、SH-6组、奥沙利铂组、SH-6＋奥沙利铂组。按照上述分组用药物干预大肠癌lovo细胞24小时,分别采用DNA ladder法和Hochest33258法检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测caspase-9活性变化。结果（1）SH-6可有效抑制PKB的活性;（2）DNA ladder检测法显示,空白对照组未见梯形DNA裂解片段,而其他3组均出现明显的DNA梯形裂解带。Hochest法显示,空白对照组细胞的细胞核均质蓝染,而药物处理的3组均出现明显的细胞核致密浓染及核碎裂等细胞凋亡形态学改变;（3）Western blot结果提示奥沙利铂干预后,lovo细胞中Caspase-9的活性与未处理组比较,明显增强,加用SH-6处理后,大肠癌lovo细胞中Caspase-9的活性与未处理组比较明显增强,与单用奥沙利铂组比较有所增强。结论PKB抑制剂能促进大肠癌细胞发生凋亡,增强抗肿瘤化疗药物的疗效。