尾部悬吊与30月龄大鼠比目鱼肌的形态学特征比较

目的 观察尾部悬吊和30月龄大鼠比目鱼肌发生萎缩过程的异同点.方法 SD雄性大鼠42只,随机分为7组,即尾部悬吊5 d、7 d、14 d组,相应的同步对照和30月鼠龄组,在各时间点制备比目鱼肌横截面冰冻切片标本,用抗MHC Ⅱ单克隆抗体进行免疫组织化学染色,计算比目鱼肌Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积并计数各型肌纤维数目.结果 与同步对照组相比,悬吊组大鼠比目鱼肌的湿重,相对湿重,Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积,经体重归一化的肌纤维横截面积均显著降低,Ⅱ型肌纤维比例显著增加,而Ⅰ型肌纤维比例减少.与14 d对照组相比,30月龄组大鼠比目鱼肌湿重和Ⅰ、Ⅱ型肌纤维横截面积均明显增大,但其相对湿重和经体重归一化的肌纤维横截面积却显著降低,与悬吊14 d组无显著差异.30月龄组大鼠比目鱼肌中Ⅰ、Ⅱ型肌纤维比例与各对照组相比亦无显著差异.结论 30月龄大鼠比目鱼肌萎缩以首先出现相对湿重与归一化肌纤维横截面积降低为特征,且发生较慢,而尾部悬吊大鼠比目鱼肌则在较短时间内发生全面萎缩.     

尾悬吊大鼠比目鱼肌肌钙蛋白I异构体的转化与睾丸萎缩

目的　确定大鼠比目鱼肌肌钙蛋白 I(Tn I)发生转化的时间 ,并分析其与比目鱼肌萎缩时间过程间的相关关系 ;分析睾酮水平降低与抗重力肌萎缩速度之间的关系 .方法　将雄性大鼠分为 8组 ,悬吊时间分别为 3,4,5 ,7,14,2 1,2 8与 42 d.测量雄性悬吊大鼠睾丸和比目鱼肌的湿重并计算相对重量 (湿重 /体重 ) ,同时采用 Western blot对悬吊大鼠比目鱼肌 Tn I的表达水平进行观测 .将雌性大鼠分为 3组 ,悬吊时间分别为 3,4,与 5 d,测量其比目鱼肌的湿重并计算其相对重量 .结果　雄性悬吊大鼠的比目鱼肌湿重和相对重量在第 4天显著降低 ,14d萎缩程度…     

尾悬吊大鼠比目鱼肌肌钙蛋白I异构体的转化与睾丸萎缩

目的 确定大鼠比目鱼肌肌钙Ⅰ（TnI)发生转化的时间。并分析其与比目鱼肌萎缩时间过程间的相关关系;分析睾酮水平降低与抗重力肌萎缩速度之间的关系。方法 将雄性大鼠分为8组,悬吊时间分别为3、4、5、7、14、21、28与42d。测量雄性悬吊大鼠睾丸和比目鱼肌的湿重并计算相对重量（湿重/体重）;同时采用Western blot对悬吊大鼠比目鱼肌TnI的表达水平进行观测,将雌性大鼠分为3组,悬吊时间分别为3、4与5d,测量其比目鱼肌的湿重并计算其相对重量,结果 雄性悬吊大鼠的比目鱼肌湿重和相对重量在第4天显著降低。14d萎缩程度最明显,悬吊大鼠睾丸的湿重在第5天出现显著萎缩,相对重量在第4天发生了显著萎缩,雌性悬吊大鼠比目鱼肌的湿重与相对重量4d时没有明显变化。在第5天才显著降低。比目鱼肌TnI在悬吊14d出现由ssTnI向fsTnI的转化。结论 雄性悬吊大鼠抗重力肌（比目鱼肌）发生由ssTnI向fsTnI转化的时间为14d,这与抗重力肌发生显著萎缩的时间（4d)并不一致;提示 TnI可能不是引起模拟失重后抗重力肌萎缩的随重力的降低而发生敏感变化的蛋白,同时,雌性大鼠抗重力肌发生显著萎缩的时间是5d,提示睾酮的降低可能加速了模拟失重抗重力肌的萎缩速度。     

硝苯地平对去负荷比目鱼肌肌球蛋白重链(MHC)异构体转化的影响

目的观测L型钙离子通道抑制剂硝苯地平对尾部悬吊大鼠比目鱼肌重量,以及肌球蛋白重链(MHC)表达水平的影响。方法经饮水每天给予大鼠10mg／kg体重的硝苯地平1与2周。称量比目鱼肌(SOL)与趾长伸肌(EDL)的湿重,用低温SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳观测MHC异构体蛋白表达,并用RT—PCR方法观测MHCmRNA的表达。结果与正常对照组相比,给予硝苯地平处理1与2周的同步对照组大鼠SOL的相对重量未见明显改变;而尾部悬吊1周与2周大鼠SOL的相对重量则分别降低了39．5％和51．7％。经硝苯地平处理的1与2周悬吊大鼠的SOL相对重量较其对照组分别降低了36．6％与52．0％,但与同步悬吊组相比,无明显差异。各组EDL相对重量均未见明显改变。正常对照组与经硝苯地平处理的对照组可检测到MHCⅠ、Ⅱa mRNA与蛋白的表达,悬吊组与经硝苯地平处理的悬吊组可检测到MHCⅠ、Ⅱa、Ⅱb与Ⅱx mRNA以及MHCⅠ与Ⅱa蛋白的表达。在对照组与悬吊组,硝苯地平对Ⅱ型MHC mRNA表达均产生抑制作用,并降低MHC Ⅱa蛋白表达。结论硝苯地平不能防止去负荷引起的SOL萎缩,但在转录水平抑制萎缩SOL的MHC异构体由慢型向快型转化。     

肌球蛋白重链II_xmRNA表达可能为大鼠比目鱼肌废用的分子标志

目的建立大鼠跟腱切断模型 ,观测并比较跟腱切断与尾部悬吊大鼠比目鱼肌重量与肌球蛋白重链 (MHC)异构体mRNA表达的变化 ,为探讨骨骼肌废用性萎缩的机理提供实验线索。方法选取雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 6组 ,每组 5只。直接切断跟腱 ,称量肌腱切断后第 1、3、7、1 4、2 1、2 8天比目鱼肌 (SOL)、腓肠肌内外侧头 (MG ,LG)与跖肌 (PL)的湿重。用RT PCR法观测SOLMHC异构体mR NA的表达。结果跟腱切断后第 3天 ,SOL出现明显萎缩 ,在第 7与 1 4天萎缩达最低点 ,从第 2 1天开始 ,萎缩的SOL重量有所恢复。MG、LG与PL重量的变化趋势与SOL基本一致。在正常SOL中 ,仅有MHCI与IIa mRNA表达。从跟腱切断的第 3天开始直至第 2 8天 ,SOL中出现MHCIIx mRNA的表达 ,但无MHCIIb 的表达。结论跟腱切断引起的SOL萎缩在出现时间与程度上 ,与尾部悬吊相似。两种模型均可引起SOL中MHCIIx mRNA表达 ,推测MHCIIx 可能为骨骼肌废用的分子标志     

萎缩比目鱼肌钾离子通道改变对高频强直收缩疲劳性的作用

目的探讨萎缩比目鱼肌高频强直收缩疲劳性增加涉及细胞膜离子通道的可能机理。方法建立小鼠尾部悬吊模型模拟失重状态,用离体骨骼肌肌条灌流方法,分别观测在10mmol／L钾离子和60mmol／L钠离子灌流液灌流下,小鼠比目鱼肌高频强直收缩功能的变化。结果在生理溶液灌流下,悬吊1周组小鼠比目鱼肌高频强直收缩的最大张力（P0）与其同步对照组相比,仅有降低趋势;但是,高频强直收缩第33秒收缩张力与最大张力之比（P33／P0）却明显降低。尾部悬吊1周组小鼠比目鱼肌高频强直收缩后恢复时间短于正常对照组。与生理溶液灌流相比,高钾灌流的悬吊1周组与对照组比目鱼肌的P0均明显降低,两组P33／P0也显著降低,即疲劳性增加;低钠灌流的对照组比目鱼肌的P33／P0也显著性降低,但悬吊组增高。在高钾灌流条件下,对照组比目鱼肌等长收缩的阈刺激电压无明显改变,而悬吊1周组则明显降低;在低钠灌流条件下,对照组和悬吊1周组比目鱼肌等长收缩阈刺激电压均显著增高。结论萎缩比目鱼肌纤维膜上K^＋通道的改变,可能是引起其高频强直收缩疲劳性增加的主要因素。     

内皮素-1促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨内皮素（ET－1）在去甲肾上腺素（NE）诱导的心肌细胞凋亡中的作用。方法 采用无血清培养新生大鼠心肌细胞模型，以免疫组化鉴定心肌细胞；以Hoechst33258与PI双重荧光染色观察ET－1与NE单独或联合作用时心肌细胞凋亡率的变化。结果 ①实验培养的新生大鼠心肌细胞的纯度达90％；②NE呈剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡；ET－1对心肌细胞凋亡率无明显影响；ET-1NE联合作用可显著增加心肌细胞的凋亡率。结论 内皮素－1可能促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

悬吊大鼠后肢骨骼肌等长收缩功能变化的动态特征

目的观测模拟失重1、2和4周大鼠比目鱼肌与趾长伸肌收缩性能的变化,并分析萎缩比目鱼肌收缩性能变化的可能机制.方法采用离体骨骼肌肌条灌流技术,观测比目鱼肌与趾长伸肌的等长收缩功能.结果悬吊1周大鼠比目鱼肌即出现萎缩,悬吊2周与4周进一步萎缩,在各时间点两组的差别均具有显著性或非常显著性意义.比目鱼肌等长收缩的最大张力在悬吊第1周仅呈降低趋势[对照组(1.76±0.18)g/mm2,悬吊组(1.46±0.26)g/mm2,P＞0.05],第2周的降低具有显著性意义[(1.25±0.09)g/mm2,P＜0.05],第4周则进一步降低[(0.90±0.06)g/mm2,P＜0.01].悬吊1周组大鼠趾长伸肌的最大张力未改变,2周与4周组的降低具有非常显著性意义(P＜0.01).悬吊1、2和4周组大鼠比目鱼肌等长收缩达到最大张力一半的时间与同步对照组相比,两组间的差别均无显著性意义(P＞0.05),但是,悬吊1与2周组达到最大张力的时间与从张力峰值到舒张75%的时间缩短(P＜0.05),悬吊4周组则进一步缩短(P＜0.01).与同步对照组相比,悬吊组趾长伸肌的时间参数均未发生改变(P＞0.05).结论由于比目鱼肌最大张力的降低与其萎缩在发生时间上不同步,而等长收缩的时间参数却较早发生改变,提示模拟失重萎缩比目鱼肌中调节性收缩蛋白可能较早发生改变,进而影响收缩性能.     

肌球蛋白重链Ⅱx mRNA表达可能为大鼠比目鱼肌废用的分子标志

目的：建立大鼠跟腱切断模型，观测并比较跟腱切断与尾部悬吊大鼠比目鱼肌重量与肌球蛋白重链（MHC）异构体mRNA表达的变化，为探讨骨骼肌废用性萎缩的机理提供实验线索。方法：选取雄性SD大鼠30只，随机分为6组，每组5只，直接切断跟腱，称量肌腱切断后第1，3，7，14，21，28天比目鱼肌（SOL），腓肠肌内外侧头（MG，LG）与跖肌（PL）的湿重，用RT－PCR法观测SOL MHC异构体mRNA的表达，结果：跟腱切断后第3天，SOL出现明显萎缩，在第7与14天萎缩达最低点，从第21天开始，萎缩的SOL重量有所恢复，MG，LG与PL重量的变化趋势与SOL基本一致。在正常SOL中，仅有MHC1 MHC Ⅱb的表达。结论：跟腱切断引起的SOL萎缩在出现时间与程度上，与尾部悬吊相似，两种模型均可引起SOL中MHC，Ⅱx mRNA表达，推测MHCⅡx可能为骨骼肌废用的分子标志。