人白介素- 4对牛血管内皮细胞保护作用的研究

目的:研究人白介素-4(hIL-4)对经TNF-α活化的牛主动脉内皮细胞(BAEC)的保护作用。方法:用不同浓度的hIL-4与BAEC共孵育2h后,再与4μg/L的TNF-α共孵育6h或18h。应用细胞ELISA方法,检测BAEC表面的E选择素和ICAM-1的表达;用MTT比色法测定hIL-4对BAEC活性的影响。结果:在一定浓度内用hIL-4预处理BAEC后,能明显抑制TNF-α诱导活化BAEC上的E选择素与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性。用MTT比色法测定BAEC活性的实验表明,各实验组BAEC的活性与对照组无明显差异性。结论:hIL-4能明显抑制TNF-α诱导活化的BAEC表达E选择素与ICAM-1;hIL-4对BAEC的正常功能具有一定的保护作用。     

人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的: 采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮单核活化多肽2（endothelail monocyteactivating polypeptide Ⅱ, EMAPⅡ）,并探讨重组EMAPⅡ的抗肿瘤生物学活性。方法: 采用pMAL p2x表达系统和BL21菌株克隆表达人EMAPⅡ147312, 对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAPⅡ介导人脐静脉内皮细胞ECV304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTT法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAPⅡ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAPⅡ产物，每克菌体（湿重）可获得约500 μg的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAPⅡ在体外培养条件下可使ECV304细胞产生TF因子；并可增强ECV304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加\[(16.6±2.5)％vs（25.6±2.3）%,P<0.01\];在一定的质量浓度(1 μg/ml)下，EMAPⅡ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAPⅡ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。     

本科生导师工作之体会

为了建立新型师生关系，提升高校人才培养质量，第二军医大学于2006年开始在本科教育中实行导师制。为了使寻师制收到更好的效果，结合作者担任本科生导师的实践，探讨了导师制的实行方法与体会。     

肿瘤坏死因子突变体60的纯化及变性,复性的初步研究

ＴＮＦα突变体６０（ＴＮＦ６０）蛋白在大肠杆菌中高效表达，菌体超声破碎后，以低浓度尿素反复洗涤包函体，经Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶过滤层析初步纯化，对重组蛋白浓度，氧化还原剂等复性参数进行优化和选择，复性后组分以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５脱盐，经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５凝胶过滤再次纯化。获得了纯度〉９７％，具有增强ｒｈＴＮＦα细胞毒活性的ＴＮＦ６０蛋白，为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

目的:分析原核重组表达的人可溶性TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡,并观察凋亡作用与FHIT基因突变的关系.方法:观察人可溶性TRAIL对28株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用,RT-PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况.结果:1～100 mg/L的重组人可溶性T RAIL蛋白即可诱导19株细胞(包括人肿瘤细胞株)如1990(胰腺导管癌)、MCF-7(乳腺癌)、A5 4 9(肺癌)、U251(星形胶质瘤)、HepG-2(肝细胞癌)、M85(胃癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hep-2( 喉癌)、AT-29(结肠癌)、3AO(卵巢癌)和B16-MB(黑色素瘤),髓性恶性细胞如Jurkat、K56 2、U937、6T-CEM,鼠源性S180(肉瘤)、Ehrlich(腹水瘤)和Lewis(肺癌),以及人内皮细胞株ECV304等发生凋亡;而其他9株细胞,如SK-N-SH(人神经母细胞瘤)、8898(人胰腺导管癌)、HeLa(人宫颈癌)、SMMU7721(人肝癌)、HL60(人白血病)、COS-7(猴肾)、人成纤维细胞、L929(鼠成纤维细胞)、Wish(人羊膜细胞)等需大于100 mg/L的TRAIL才能使其凋亡;观察到上述部分对TRAIL敏感的人源细胞的FHIT基因有缺失突变,而不敏感的人源细胞FHIT 基因完整.结论:原核表达的人可溶性TRAIL具有明显诱导多种肿瘤细胞凋亡的活性,其机制可能与FHIT基因的缺失有关.     

生物技术专业考核方式的改革初探

笔者所在学校作为国家生命科学与技术人才培养基地之一,如何对医学生物技术专业课程考核模式进行改革,对高素质生命科学与生物技术人才的培养十分重要。笔者在教学实践中,对本专业课程考核方式进行了改革,将传统的单一理论考试方式改革为含理论、实验技能和论文(综述)答辩等3部分内容组成的考核模式。     

天然内毒素制剂中S－和R－类脂A的理化特性

天然马流产杆菌内毒素（脂多糖）经有机溶剂萃取后分离为光滑型（Ｓ）－和粗糙型（Ｒ）－亚组分，并制备了相应的类脂Ａ。由Ｓ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｓ－ＬｉＰＡ）表现出极高的水溶性，而由Ｒ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｒ－ＬｉｐＡ）的溶解度较差。化学分析表明Ｒ－ＬｉｐＡ属于完全脂酰化的分子，其结构与天然Ｒ－突变株产生的类脂Ａ完全相同，而Ｓ－ＬｉｐＡ属低度脂酰化（６０％）的分子，并在其分子上发现有游离氨基存在。本研究对从分子水平上了解类脂Ａ结构与功能的关系具有重要的意义。     

Bax、Bcl-2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的研究胰腺癌组织及细胞中Bax/Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达,探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系.方法应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白,RT-PCR检测其中FHIT mRNA的表达.结果 38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例(45%),Bcl-2蛋白阳性表达22例(58%),FHIT mRNA异常表达为21例(56%).转染有外源性FHIT的1990细胞(1990 pFHIT)Bax表达阳性率有升高,Bcl-2/Bax比值下降.结论 Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程.FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关.     

Isolation and purification of CWF－Ⅰ derived from Serratia marcescens and its antitumor activities in vitro

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣＷＦ－ⅠｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＳｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓａｎｄｉｔｓａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｖｉｔｒｏ￥ＪｉａｏＢｉｎｇｈｕａ（焦炳华）；ＺｈａｏＨｕ（赵虎）；ＹｕＷｅ...     

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究.