灌流肾脏的生理功能动态变化

利用灌流方法能够使离体肾脏功能在72小时内得到可靠的控制，同时在长期灌流存活过程中检测流量以及灌流液成分来研究肾脏功能的动态变化较为方便，更可贵的是肾脏为双侧器官，因此灌流肾脏是逐步研究生命信息传递和控制动态过程的合适模型。本文研究灌流维持120小时过程中肾脏功能的变化发现，其动态过程具有阶段性变化的特点，肾小管上皮细胞结构变化在灌流过程中表现突出，这是影响细胞损伤阶段肾脏功能变化的重要因素。     

TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

受体酪氨酸激酶c-kit及其配体SCF在正常肝及肝癌组织中的共表达

目的：观察受体酪氨酸激酶c-kit及其配体干细胞因子（stem cell factor，SCF）在人正常肝、肝硬化、癌旁肝及肝癌组织中的共表达。方法：用免疫组化／免疫荧光染色方法和组织芯片检测受体酪氨酸激酶c-kit及其配体在166例肝癌和配对癌旁肝、16例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异及其共表达状况。结果：免疫组化检测c-kit在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的阳性率分别为47．59％，95．78％，93．75％和100％，其中强阳性（≥＋＋）率分别为27．71％，77．71％，87．53％和100％，c-kit蛋白在肝癌组织中明显低表达；而SCF在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的阳性率分别为68．07％，100％，100％和100％，其中强阳性（≥＋＋）率分别为35．54％，94．58％，93．75％和100％，SCF在肝癌组织中也呈现低表达；但SCF在各种组织中的表达均高于c-kit。免疫荧光检测受体酪氨酸激酶c-kit及其配体SCF在各种组织中均有不同程度的共表达，且均定位于肝癌细胞和肝细胞的细胞质中，其中在肝癌、癌旁肝、硬化肝和正常肝组织中的共表达率分别为51．20％，100％，100％和100％，而肝癌组织的强阳性共表达（≥＋＋）率仅为25．30％，其他组织均高于95％。结论：与正常肝、硬化肝、癌旁肝组织相比，肝癌组织中c-kit和SCF均呈低表达，但SCF在相应组织中的表达稍高于c-kit；正常肝、硬化肝、癌旁肝组织中c-kit／SCF共表达远高于肝癌组织。     

缺氧诱导因子-1和凋亡信号调节激酶1在肝癌细胞SMMC-7721缺氧时化疗耐药形成中的作用

目的 研究不同氧气条件下肝癌细胞HIF-1和ASK1表达水平在化疗过程中的变化.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞生长情况和药物中效浓度(IC50).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测HIF-1α和ASK1表达水平,比较氧气、化疗药物、HIF-1抑制等因素对他们表达的影响.结果 化疗对肝癌细胞常氧时抑制效果较缺氧时更明显,常氧和缺氧IC50存在明显差异.缺氧时两者表达水平均升高,HIF-1α在IC50缺氧组中翻译水平最高,ASK1在IC50常氧组中翻译表达最多.结论 HIF-1α可能在缺氧时通过对ASK1蛋白水平的抑制实现肝癌细胞化疗耐药形成.     

离体猫肾人工生命维持系统的建立

目的：建立离体猫肾人工生命维持系统，研究离体肾低温灌流中肾脏功能和超微结构的动态变化。 方法： 将家猫肾脏离体冲洗后接到人工生命维持系统上进行连续灌流，定时取样，观察灌注流量动态变化，并在对应时间取肾脏样品进行病理观察。 结果： 人工生命维持系统成功实现离体猫肾连续低温灌流120 h，肾脏灌注流量在低温灌流过程中表现出动态变化；肾脏组织结构在灌流约72 h左右发生较显著变化：肾小囊结构无明显改变，肾小管空泡变性增加，部分管腔刷状缘受损。 结论： 该离体猫肾人工生命维持系统的建立有助于离体肾脏体外生存机理研究；近曲小管上皮细胞损伤和破坏可能是导致灌流肾功能平稳变化出现转折的主要原因。     

ATP-binding cassette家族和肿瘤干细胞的多药耐药

肿瘤细胞的多药耐药是临床化疗失败的常见原因，通常表现为肿瘤细胞对一系列作用机制各异的抗癌药物失去敏感性。对肿瘤细胞多药耐药的研究已经发现ATP—binding cassette转运蛋白家族外排药物和细胞耐药机制之间存在直接关系，有些正在开发中的针对耐药蛋白的药物已经显示了应用的前景。肿瘤干细胞是肿瘤中存在的极小的一群具有类似干细胞性质的肿瘤细胞，是肿瘤发生发展的内在动力。最近的研究发现肿瘤干细胞表面也表达ATP—binding cassette家族多药耐药蛋白，揭示了肿瘤的起源和耐药现象的联系。     

低温存活猫肾亚细胞Ca2+浓度变化的X-射线微区分析

随着肾离体低温保存时间的延长，细胞内钙离子沉积而导致细胞损伤，影响肾脏整体功能的保存情况以及移植后肾脏的存活率，本地家猫肾脏离体后冲洗至灰白，然后置于改良Collins II保存液中低温存活，保存0，24，48，72h以后，应用Ca^2 细胞化学探针（Calcium cytochemical probe)及X－射线微区分析技术（X－ray microanalysis of microsections)检测肾小管上皮细胞亚细胞水平的钙离子浓度变化，肾脏经过不同时间体外存活以后，细胞核和内质网中钙离子浓度没有明显的变化，而线粒体和细胞溶质中钙离子浓度显著地呈现出线性升高，结果表明，随着肾脏保存时间延长，细胞溶质钙离子浓度升高源于细胞内储存的钙离子释放，正常生理条件下在细胞信息传递中充当“钙库”的线粒体和内质网在低温导致的细胞溶质内钙离子浓度上升中不表现出钙源特性。     

多参数可调经颅微电流刺激仪的研制和基于脑电的效果评测

经颅微电流刺激已被广泛用于改善和治疗焦虑、抑郁和失眠等不适应症。研制一种波形、脉宽、重复频率和强度等多参数可调的经颅微电流刺激仪。在设备开发中,为避免个体头部阻抗差异导致的刺激电流强度变化,利用恒流模块实现相同强度的脑部刺激电流。为评估刺激效果,招募20个志愿者进行实际测试。通过脑电频谱分析和双因素重复方差分析方法,对不同刺激波形在刺激前后的脑电α频段频谱含量进行评估。评估结果表明,α频段频谱含量在刺激参数和刺激前后两个因素的交互作用显著 (P<0.01),4种波形（方波、三角波、锯齿波、正弦波）均能在不同程度上有效提升α频段频谱含量,且正弦波刺激能显著提高EEGα频段的频谱含量（功率谱占比提高20%以上）,由此证明设备的有效性。     

纳秒脉冲消融联合顺铂对人宫颈癌细胞Hela生长的影响及机制

目的:通过研究纳秒脉冲消融与顺铂对人宫颈癌细胞Hela的体外作用,探讨低剂量纳秒脉冲电场联合低浓度顺铂之间的相互作用及机制。方法:采用CCK8法检测纳秒脉冲消融、顺铂对细胞增殖的影响,选取低于半抑制率(IC_(50))的低剂量(6个、12个)脉冲电场和低浓度(1μg/ml、2μg/ml)顺铂,CCK8法检测两者联合后的抑制率,计算联合作用指数(IC值),取IC值最低时的脉冲次数和顺铂浓度,将实验分为对照组、单纯脉冲电场组、单纯顺铂组和脉冲电场联合顺铂组,Annexin V/PI双染细胞后流式细胞仪检测凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:纳秒脉冲消融与顺铂均抑制细胞生长,低剂量脉冲电场和低浓度顺铂的联合作用指数均0.9,表明两者有协同作用,脉冲电场联合顺铂组的凋亡率最高(P0.05),且该组Bax蛋白表达最高,Bcl-2蛋白表达最低(P0.05)。结论:低剂量脉冲电场联合低浓度顺铂具有协同作用,其中12个脉冲联合2μg/ml顺铂对肿瘤细胞抑制最显著,其机制可能与Bax高表达,促进细胞凋亡有关。     

离体肾脏灌流液成分研究

离体肾脏在人工环境下灌流有不同的研究目的和内容，传统的研究方向是为了异体移植，我们以离体肾脏为材料，研究肾脏的生命过程中内在信息与控制机理，这是二十一世纪生命科学研究方向之一，上述不同研究的共同之处是如何延长体外灌注存活时间。理论上的关键是理解、缓解和控制肾脏活性降解的过程。在这一程度上可以通过灌流液成分配制，正确模拟体内环境状态，以保持最佳的人工生命维持外环境来实现，我们的实验采用了仿生股动脉连续灌注方法对离体的肾脏进行体外灌流研究，并且对灌流液中维持胶体渗透压的各个成分进行了研究，结果发现对于长期肾脏灌流而言，右旋糖酐和甘露醇在中长期肾脏灌注中完全可以替代羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch,HES)和葡萄糖酸盐（glconate)，对防止细胞水肿和组织间隙水肿起到较好的作用。