高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物

目的 为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法。方法 利用SOURCEl5Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链。并测定回收率。结果 SOURCE15Q柱在紫外检测波长为260hm，流速为1ml／min，流动相为pH9．0时，以20mmol／L Tris-HCl缓冲液 2．0mol／LNaCl，线性浓度梯度洗脱的分离条件下，能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离；对24mer单链样品进行回收率测试，回收率为92．46％。结论 利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高，适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备。     

浅谈Paralemmin-1在细胞和组织中的表达

Paralemmin-1是一种磷蛋白,锚定在细胞质膜的表面,它在细胞质膜的表达以及某些程度上的翻译后修饰具有组织发育的特异性。本文讨论Paralemmin-1在细胞及组织中的表达情况,研究表明paralemmin-1在不同类型肿瘤细胞系和组织中的表达是不同的,因此可以作为肿瘤分子标记被研究开发,对提高肿瘤诊断水平和提供治疗靶标具有重要意义。     

HIV-p24核酸适配体的筛选

 摘 要：目的 利用SELEX技术筛选HIV-p24的核酸适配体,为艾滋病的诊断和治疗奠定基础。方法 以重组p24为筛选靶,用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选与HIV-p24结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定第12轮筛选到的寡核苷酸与HIV-p24的结合,再用Dot-blot法筛选出与HIV-p24结合的核酸适配体,并检测核酸适配体识别HIV-p24的特异性。结果 Dot-blot筛选到5条与HIV-p24有较强结合能力的核酸适配体,且均为不同的序列。特异性检测显示,18和26号配体只与HIV-p24特异性结合,与人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脱脂奶粉均无明显结合。结论 成功筛选到2条特异结合HIV-p24的核酸适配体,为其应用于艾滋病诊断和治疗提供了实验基础。     

细胞壁应激反应的RNA依赖性调控

目的:本文通过Rnt1p对细胞周期相关mRNAs的作用来探讨RNA的稳定性与细胞周期中细胞壁应激依赖调控之间的关系。方法:用定量RT-PCR分析Rnt1 mRNA的表达水平;用酵母细胞的免疫荧光标记检测Swi4p-和Hsl1p-GFP的融合蛋白;用扫描式分光光度计检测细胞的生长过程。结果:1)酵母细胞核Rnt1p直接裂解细胞周期调控相关基因的mRNAs;2)RNT1的缺失改变了Hsl1p水平和细胞的定位;3)HSL1的过表达引起RNT1缺失表型的部分复制;4)HSL1的缺失部分地抑制了rnt1△细胞表型的缺陷。在这些基因调控模型中细胞核mRNA的降解加强了细胞应激反应与细胞周期之间的连系。结论:细胞核mRNA的选择性降解不仅需要细胞壁的应激反应也需要细胞壁完整性检查点的调控,酵母细胞核Rnt1p的缺失增加了和形态发生检查点及细胞壁整体通路都相关的mRNAs表达,最终导致应激反应的减弱。     

探索肿瘤干细胞起源的进程

近年来,在肿瘤的瘤体研究中发现了与干细胞具有相似的生物学特性和传导调控途径及机制等的一类细胞群体,科学家们命名这种存在于肿瘤细胞群体中的特殊细胞为肿瘤干细胞(cancer stem cell),又称为肿瘤启始细胞(tumor initiating cell,T-Ic),并对其起源进行了一系列的探索试验,本文就其探索过程作一综述。     

甲状腺癌NIS和TSHR表达的矛盾性及非相关性

 目的研究钠/碘转运蛋白(sodium/iodide symporter, NIS)和促甲状腺激素受体（thyroid stimulating hormone receptor, TSHR）在甲状腺癌中的表达和相关性。方法收集正常甲状腺组织18例、 甲状腺癌23例,通过荧光定量分析和免疫组织化学SP法对NIS和TSHR的表达进行研究。结果甲状腺癌NIS 和TSHR mRNA的表达显著低于正常甲状腺组织（P<0.005),正常甲状腺组织NIS 和TSHR的表达呈显著正相 关（r=0.667, P=0.000）,而在甲状腺癌中无相关性（r=0.222,P=0.376）。免疫组织化学结果表明甲 状腺癌NIS阳性产物主要定位于细胞质,TSHR阳性产物定位于细胞质和细胞膜,甲状腺癌NIS及TSHR蛋白阳 性表达率显著高于正常组（P<0.05）;甲状腺癌NIS mRNA表达下降同时伴有细胞质NIS蛋白表达升高的有 17例(74%)。结论甲状腺癌NIS和TSHR表达具有非相关性以及在转录和翻译水平上具有矛盾性,NIS蛋白非 功能定位于细胞质,因而不能发挥正常的运输及聚碘功能,我们推测这可能是造成甲状腺癌患者放射性碘 治疗失败的重要原因。     

酶分子定向进化的最新研究进展及应用

酶分子定向进化又称为酶分子体外进化,属于蛋白质的非理性设计,是蛋白质工程的新策略,是在试管中模拟达尔文进化的过程,利用分子生物学手段在分子水平创造分子的多样性,结合灵敏的筛选技术,迅速得到理想的突变体。与传统的理性设计相比,它不需事先了解蛋白质的空间结构、活性位点、催化机制^[1]等因素,而是人为地创造特殊的进化条件,模拟自然进化机制（随机突变、基因重组和自然选择）,在体外改造酶基因,产生基因多样性,并结合定向筛选（或选择）技术,获得具有某些预期特征的改构酶^[2]。     

蛋白质组学在肿瘤患者血清标志物研究中的应用

近几年来随着蛋白质组学研究技术的提高,蛋白质组学被广泛应用于各种疾病研究中,特别是肿瘤标志物方面.肿瘤标志物的研究被广泛应用于无症状的早期患者的筛查,但目前仍有许多影响其临床应用的问题亟待解决,现就目前蛋白质组学在肿瘤标志物方面的应用进行简要综述.     

生物酶的定向进化及其应用

生物酶在现代合成工业中具有重要作用，主要表现在其高效的催化性能方面。近10年来，在实验室中运用各种基因工具模拟自然进化所设计的生物酶多数已应用于工业生产中，定向进化成为人们改造生物酶的重要工具之一。近年来的主要进展包括改造获得的具有新型功能的酶和一些新的更加有效的定向进化的方法。在蛋白质工程方面，定向进化与理性的设计加速了生物催化在制药业、化工业和食品工业中的应用。