甲状腺乳头状癌中原癌基因c-fos的低表达

甲状腺乳头状癌是临床常见的肿瘤 ,约占各种甲状腺癌的 80 %。目前认为 ,原癌基因在肿瘤形成过程中起着重要作用 ,其中ｃ ｆｏｓ是核蛋白癌基因 ,它的激活是基因表达最早的变化之一。因此 ,它与细胞癌变之间的关系就更加受到人们的关注。因样品中细胞数量的不同会影响检测结果 ,我们在国内首次引入细胞管家基因 β ａｃｔｉｎ作为多重扩增的内参照物 ,达到资料比较的标准化 ,用于研究ｃ ｆｏｓ在甲状腺乳头状癌中的表达。一、材料与方法1 材料 :(1)乳头状癌组 :14例经病理学检验确诊为甲状腺乳头状癌的组织标本。 (2 )正常对照组 :包括 3例…     

一个新型检测人甲状腺过氧化物酶抗体ELISA技术的临床应用

目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAb)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Graves病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次),桥本氏病(HT)142例,单纯甲状腺肿34例,亚急性甲状腺炎23例,结节性甲状腺肿19例,腺瘤10例。结果:确立本法阳性切限为A405值P95为0.74,测定各类甲状腺疾病患者hTPOAbA405值结果以中位数(M)表示,HT为1.19,阳性率87.32%;Graves’病治疗前是0.51,阳性率26.56%,治疗后为0.62,阳性率30.67%;亚急性甲状腺炎为0.48,阳性率为17.39%;单纯甲状腺肿为0.58,阳性率为0;结节性甲状腺肿为0.69,阳性率21.05%;腺瘤为0.68,阳性率20%。HT患者血清hTPOAb阳性率明显高于其他各组(P<0.01)。结论:以重组hTPO为抗原建立的ELISA法特异、稳定、简便,可以常规应用于临床,并可作为HT的特异性诊断手段。     

人ICAM-1膜外Ⅰ-Ⅲ功能区基因在原核系统中表达,人血清sICAM-1 RIA建立和临床应用

人细胞间粘附分子-1（intracellular adhesion molecule—1,ICAM—1）是一种细胞表面单链跨膜糖蛋白,参与抗原识别、补体结合、细胞粘附功能。其膜外区脱落人血称为可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM—1）,在甲状腺滤泡上皮细胞的异常表达与Graves’disease（GD）的发病相关,其血清水平对判断GD的疗效、停药和复发具有重要意义,目前国内尚无重组sICAM—l和sICAM-1 RIA建立的报道,国外仅有sICAM—1酶免试剂盒,但价格较高．不易推广。     

人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在大肠杆菌的表达及临床测定应用

目的 表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶（hTPO）片段，并将表达产物用于临床测试。方法 将hTPO抗原决定簇基因连入pGEX-4T-3，然后转入E.coli BL21，异丙基β－D－硫代半乳糖苷诱导表达。表达产物谷胱甘肽巯基转移酶（GST）－hTPO经亲和层析纯化，并鉴定免疫学活性。以GST－hTPO为抗原建立检测血清TPO抗体（Ab）的ELISA方法。用此方法检测一批自身免疫性甲状腺疾病（AITD）患者血清TPOAb，用病理学方法观察同批患者甲状腺组织吕HLA－DR抗原、树突状细胞及淋巴细胞浸润程度。结果 成功地表达了hTPO抗原决定簇基因，纯化产物GST－hTPO纯度高，有良好的免疫学活性，以此抗原建立的ELISA方法有良好的重复性，CV在5．93％－7．59%之间。ELISA方法与RIA方法比较，检测结果显著相关（n=37,r=0.613,P＜0．001）。血清TROAb水平及HLA－DR抗原、树估状细胞分布随甲状腺组织淋巴细胞浸润程度加重呈逐渐增多趋势。结论 原核表达产物GST－hTPO可用于建立TPOAb常规检测方法；AITD患者血清TPOAb水平与甲状腺组织损伤有密切关系。     

共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19/CCL21的第4代anti-CD19CAR-T细胞的开发与应用

目的 初步探讨共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的anti-CD19 CAR-T细胞的功能特性及其在体外对人CD19+急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的杀伤效果,旨在优化CAR-T果。方法 通过亚克隆技术获得重组慢病毒质粒,慢病毒包装,转导原代T细胞获得2种第4代anti-CD19CAR-T细胞,分别命名为7×19 CAR-T细胞、7×21 CAR-T细胞。借助流式细胞仪和相关试剂盒检测了细胞CAR分子的转导效率、CAR-T细胞的趋化能力、增殖及凋亡情况等;钙黄绿素释放法检测CAR-T细胞的杀伤作用;共培养法检测CAR-T细胞因子的释放情况;2种第4代anti-CD19 CAR-T细胞组皆于原代T细胞、常规anti-CD19 CAR-T细胞作比较。结果 7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞的功能特性皆有显著提高,主要表现在细胞增殖速度加快、细胞凋亡速率明显变慢、炎症因子IFN-γ、肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量皆有所增加;且体外杀伤实验表明阳性率约40%的7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞对CD19+肿瘤细胞Raji的杀伤效率高于阳性率约50%anti-CD19 CAR-T细胞(P0.01);结论 实验数据显示共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的第4代anti-CD19 CAR-T细胞即7×19 CAR-T和7×21 CAR-T细胞相比第3代anti-CD19 CAR-T细胞和T细胞在趋化能力、细胞增殖、细胞凋亡、体外杀瘤效果以及细胞炎症因子的释放能力等方面皆有显著改善,初步证明了7×19 CAR-T细胞和7×21 CAR-T细胞的各项功能有所优化,对CD19+人急性淋巴细胞白血病治疗效果得到改善,为开发靶向CD19的新型CAR-T细胞提供了新思路,这种模式也为其它类型CAR-T细胞的开发开创了典范。     

Graves‘病和Hashimot病患者可溶性细胞间粘附分子—1的研究

目的研究单纯甲状腺肿、Graves'病和Hashimot病患者血清sICAM-1的含量.方法用本室研制的sICAM-1RIA,检测本市400例正常人以及1020例患有单纯性甲肿、Graves'病或者Hashimoto病患者血清sICAM-1含量,进行比较分析.结果正常人检测结果(x±s)为168.43±36.23μg/L.单纯性甲肿组与正常组无显著性差别(P＞0.05),两种自身免疫性甲状腺疾病(Graves'病和Hashimoto)均明显高于正常组和单纯性甲肿组(P＜0.05).3种治疗均可降低Graves'病患者sICAM-1含量(P＜0.05).Graves'病停药复发组sICAM-1含量明显高于药物治疗后甲状腺功能恢复正常的Graves'病组(P＜0.05).结论sICAM-1 RIA可用于临床检测自身免疫性甲状腺疾病;血清sICAM-1含量可作为自身免疫性甲状腺疾病诊断的一个参考指标,并在临床评价Graves'病的疗效、停药和复发等方面具有重要意义.     

MALAT1通过竞争miR-124上调SMYD3并促进乳腺癌细胞增殖与迁移

为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响，采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后，然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况；实时定量PCR(Real time PCR)、免疫蛋白印迹(Western blot)等方法检测si-MALAT1对miRNA-124、SMYD3及其下游基因mRNA及蛋白质水平的影响。结果显示:siRNA靶向敲低MALAT1后可降低乳腺癌细胞的迁移和增殖速度，同时抑制SMYD3及其下游靶基因N-cadherin、MYL9、MMP9、CYR61等的转录表达，并上调miR-124。miR-124的过表达可降低SMYD3在乳腺癌细胞中的表达，且MALAT1的敲低可以缓解miR-124抑制剂对SMYD3蛋白质水平表达的促进作用。此外，转染外源质粒使SMYD3过表达可激活MALAT1转录，反之siRNA干扰SMYD3后则会下调MALAT1。研究结果表明:lncRNA MALAT1可以作为miR-124的ceRNA调控SMYD3，同时SMYD3可反馈性激活MALAT1的转录，这一相互调控作用将影响到乳腺癌细胞的增殖与迁移能力。     

地方性甲状腺肿大患者血清抗半乳糖基抗体滴度升高

抗半乳糖基抗体(ａｎｔｉＧａｌ)是一种多克隆抗体,可与哺乳动物体内碳水化合物的α半乳糖基抗原决定簇发生特异性反应。ＡｎｔｉＧａｌ在体外培养的猪甲状腺细胞和Ｇｒａｖｅｓ病甲状腺细胞中可模拟促甲状腺素(ＴＳＨ)的刺激作用,刺激ｃＡＭＰ合成、125Ｉ摄取和细胞增殖,而在正常甲状腺细胞无此作用。在散发性和地方性甲状腺肿大(地甲肿)中,ａｎｔｉＧａｌ作为免疫激活剂,可能在调节甲状腺细胞的增生和功能方面起着继发性作用,对此目前尚有争议。本研究检测了巴西地方性碘缺乏地区甲状腺肿患者血清ａｎｔｉＧａｌ滴度。对象与方法　在巴西…     

以肌动蛋白为标准化参数在甲状腺乳头状癌中c-fOs表达的研究

目的 :引入细胞管家基因 (β-actin)作为多重扩增的内参照物以达到资料比较的标准化 ,用于研究c -fos在甲状腺乳头状癌中的表达。方法 :14例甲状腺乳头状癌组织标本 ;21例正常对照包括3例乳头状癌病变旁正常甲状腺组织和18例腺瘤病变旁正常甲状腺组织。采用Trizol法提取总RNA ,逆转录 -聚合酶链反应法 (RT -PCR)获取cDNA ,多重聚合酶链反应 (MultiplePCR)法同时扩增371bp的c -fos和227bp的β-actin。扩增产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳 ,用UVP凝胶成像分析系统的GelBase/GelBiot -Pro分析软件获取各标本c-fos和β-actin的密度值 ,计算两者的比值。结果 :正常对照和乳头状癌组c -fos/β-actin比值分别为 (x±s) :0.6845±0.0753和0.5938±0.0969 ,两组存在着显著差异(t=2.954,P<0.01) ;经自身配对t检验 ,3例患者的癌变组织明显低于与此癌病变旁的正常组织(t=9.205 ,P<0.05)。结论 :c -fos在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于正常对照。     

人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在E.coli细胞中的表达

目的：探索在E.coli BL21中表达hTPO抗原决定簇片段（AA568－AA874）。方法：将hTPO抗原决定族基因（1702－2622,编号相对于起始密码子）连接到表达型载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒。然后转化E.coli BL21,IPTG诱导表达。表达产物采用亲和层析方法纯化,SDS－PAGE法测定其分子质量,ELISA法鉴定免疫学活性,考马斯亮蓝染色法定量。结果：成功地表达了hTPO抗原决定簇基因。纯化的GST－hTPO融合蛋白分子质量为61.4ku,hTPO片段分子质量为37.6ku。以此作为抗原按ELISA法分别与TPOAb阳性血清或阴性血清反应,结果表明,GST－hTPO及hTPO片段均与TOPAb特异性结合。纯化的GST－hTPO产量为10mg/L培养基;hTPO片段产量为1.2mg/L培养基。结论：利用基因工程技术可获得高纯度的GST－hTPO融合蛋白及hTPO片段,产物具有良好的免疫学活性。