用蛋白质芯片技术筛选非小细胞肺癌患者血清中标志蛋白

目的 探讨用蛋白质芯片技术检测血清非小细胞肺癌（NSCLC）标志蛋白筛查肺癌患者的可行性。方法 用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS）技术检测123例肺癌患者和40名正常人血清蛋白质质谱。用数字表法随机抽取94份标本（53例NSCLC，21例小细胞肺癌和20名正常人）作为训练组进行系统训练，将筛选出来的相对分子质量为11493、6429、8245、5336及2536的5个蛋白峰作为一个标志物组合模式，建立分类树模型（即系统训练过程）；用69份未知血清标本（49例NSCLC，20名正常人）作为盲筛组验证该模型。结果 系统显示，在训练组该模式检测NCLC的敏感性和特异性分别为95．9％（71／74）、90．0％（18／20），盲筛组分别为83．7％（41／49）及80．0％（16／20）。结论 蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术能较准确的区分NSCLC患者与健康对照者，该技术为NSCLC的筛查提供了新的有效工具。     

肝癌细胞系SMMC7721蛋白质组学初步分析

目的　分析肝癌细胞系SMMC772 1的蛋白质表达 ,筛选肝细胞癌的差异蛋白。方法　应用表面增强激光解吸离子化蛋白质芯片技术检测肝细胞癌细胞系SMMC772 1及正常肝细胞L0 2的蛋白质谱。用PBSII C型蛋白质芯片阅读机读取数据并进行分析。结果　与L0 2细胞相比 ,有 15个蛋白质在SMMC772 1细胞中出现明显的变化 ,其中 6个蛋白在肝癌细胞中高表达 ,9个蛋白低表达 ,L0 2细胞中去磷酸化蛋白 17175Da表达较多 ,而在SMMC772 1细胞中磷酸化蛋白172 5 5Da表达较多。结论　SMMC772 1细胞与正常肝细胞L0 2 4蛋白表达差异对指导肝癌诊断和治疗具有重要意义。研究蛋白质的磷酸化 /去磷酸化有助于了解肝癌发生过程和分子机制。     

肝门部胆管癌细胞系FRH 0201与正常肝细胞系L02蛋白质组学差异分析

目的：分析肝门部胆管癌细胞系FRH0201与正常肝细胞系L02的蛋白质表达差异,筛选肝门部胆管癌的潜在分子标志物。方法：应用表面增强激光解吸离子化（surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI）蛋白质芯片技术检测肝门部胆管癌及正常肝细胞系的蛋白质谱。用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,采用Proteinchip软件分析数据。结果：IMAC3、WCX2两种蛋白芯片共捕获144个蛋白峰,发现16个差异蛋白。与正常肝细胞系L02蛋白谱相比,4个蛋白在肝门部胆管癌细胞系FRH0201中高表达,12个蛋白在肝门部胆管癌细胞系FRH0201中低表达。结论：肝门部胆管癌与正常肝细胞存在差异蛋白表达,这些差异蛋白有可能成为潜在的肝门部胆管癌标志物,对其进行研究有助于了解肝门部胆管癌的发病机制。     

肝内胆管癌细胞系ICC-9810与肝细胞系L02蛋白质组学的差异分析

目的:分析肝内胆管癌细胞系ICC-9810与正常肝细胞系L02的蛋白质表达差异,筛选肝内胆管癌的潜在分子标志物.方法:应用表面增强激光解吸离子化(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)蛋白质芯片技术检测肝内胆管癌及正常肝细胞系的蛋白质谱.用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,采用Proteinchip Software 3.0.2软件分析数据.结果:IMAC3、WCX2两种蛋白芯片共捕获376个蛋白峰,发现27个差异蛋白.与正常肝细胞系L02蛋白谱相比,9个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-981O中高表达,18个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-9810中低表达.其中3767、7999、10555、12163、22066和26794 Da6个差异蛋白可被WCX2和IMAC3芯片共同捕获.结论:肝内胆管癌与正常肝细胞存在差异蛋白表达,这些差异蛋白为寻找肝肿瘤标志物,了解肝内胆管癌的发病机制提供了重要线索.     

多西环素作用前后小鼠胸腺上皮细胞蛋白质表达谱的变化

目的:探讨多西环素(doxycycline,Dox)作用前后小鼠胸腺上皮MTEC1细胞系蛋白质表达谱的差异,为阐明多西环素对胸腺细胞作用的机制奠定基础.方法:利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-...     

MCF-7细胞瞬时基因表达转染模式的建立

目的　建立一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时基因表达细胞转染模式。　方法　选择人乳腺癌细胞 系MCF 7,采用Polyethylenimine(PEI)作为转染剂,对细胞密度、载体DNA量、PEI氮与DNA磷的比率(PEI N∶DNA P) 以及PEI DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间等对转染效率的影响进行了比较分析。　结果　转染时的24 孔板每孔接种的细胞以2×105为宜,PEI N∶DNA P的最优比率不是固定的,它与转染时DNA的量有关,每孔转染1 μgDNA时其最优PEI N∶DNA P比率为33∶1左右,而每孔转染4μgDNA时其最优PEI N∶DNA P比率为9∶1左右。 另外,PEI DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间至少需要3h,最佳时间为5～7h。　结论　利用转染剂PEI, 控制合适的细胞密度、DNA质量、PEI N∶DNA P比率和无血清培养的时间,可成为一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时 基因表达的细胞转染模式。     

CKIp15INK4B相关新基因p15rs对HeLa细胞增殖影响的初探

目的　探讨新克隆的CKIp15 INK4B 相关基因p15rs对细胞增殖的作用。　方法　克隆p15rs编码区cDNA ,通过基因转染技术将其导入HeLa细胞 ,检测细胞的生长曲线 ,细胞周期和集落形成能力。　结果　构建了p15rs高表达的细胞模型HPS2 1,发现p15rs高表达可使HeLa细胞增殖被显著抑制 ,细胞生长速率下降 ,倍增时间延长 ,G1 期细胞增加 ,S期细胞减少 ,集落形成能力下降。　结论　新基因p15rs具有抑制癌细胞增殖和对细胞周期进程进行负调节的作用。     

肺癌血清标志蛋白乳酸脱氢酶B链的鉴定及其临床意义

目的筛选与肺癌转移相关的标志分子。方法利用单向变性凝胶电泳（SDS-PAGE）和基质解吸附时间飞行质谱（MALDI-TOF-MS）对具有不同转移能力的肺鳞癌株NCI-H226及其脑转移亚系H226Br的培养基上清进行分析，鉴定出12种标志蛋白，其中乳酸脱氢酶B链（L-lactate dehydrogenase B，LDHB）表达水平明显升高。利用酶联免疫吸附技术（ELISA）对105例肺癌、30例喉癌、41例肺炎和肺结核患者及65名健康人血清中LDHB的表达进行分析。结果与肺炎和肺结核患者[A值为0．187（0～0．609），P〈0．01]及健康对照组[A值为0．159（0～0．524），P〈0．01]相比，肺癌患者LDHB水平[A值为0．485（0～1．415）]明显升高，且随病程发展呈现出递增的趋势。在操作特异性曲线（receiver operating characteristic，ROC）临界值取为0．260时，敏感性为81％，特异性为70％，总体精确性为76％。结论分泌蛋白质组学可以成为一种寻找与癌症发生和发展相关的新标志蛋白的有效方法。     

非小细胞肺癌血清标志蛋白HSP90α的鉴定及其临床意义

目的 证明HSP90α是否可以作为肺癌诊断的血清标志蛋白.方法 利用SDS-PAGE和基质辅助解吸附时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS),对具有不同转移能力的肺腺癌细胞系CL1-0(低转移)和CL1-5(高转移)的培养基上清进行分析,并对已鉴定的候选标志蛋白通过免疫印迹方法进行确定.此外,利用酶联免疫吸附技术(ELISA)对141例肺癌、37例良性肺病患者、及46例健康人血清对候选蛋白进行了进一步的分析.结果 HSP90α在CL1-5的培养基中高表达,进一步发现HSP90α在非小细胞肺癌的血清中特异性升高.当ROC曲线(receiver operating characteristic,ROC)临界值取为0.535时,HSP90α能区分肺癌以及良性肺病患者和健康人,其敏感性为0.817,特异性为0.919,总体精确性为80.14%.结论HSP90α有望成为区分肺癌、良性肺病患者和健康人以及肺癌分期诊断的血清标志蛋白.     

蛋白质芯片技术在视网膜母细胞瘤患者早期诊断中的运用(英文)

目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(retinoblatoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM10两种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,两组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746,7014,117133049,7084,7299,5888,2544,12575,5489,9658,95759929,10161,8955,1886,10617,6209,2411,7374和6614低表达有5个,分别为:8382,7923,7972,8590和66576,统计学检验P<0.01。其中以m/z7014峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有个,质/荷比(m/z)分别为5888,6097和7798;低表达蛋白峰为m/z8590。统计学检验P<0.01。当选择m/z779峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。