蕲蛇水提液对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的:研究蕲蛇水提液对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:制备完全弗氏佐剂诱导的Wistar大鼠AA模型并进行随机性分组,分为空白组、模型组、阳性组(塞来昔布给药组)、蕲蛇低剂量组、蕲蛇中剂量组、蕲蛇高剂量组,每组10只。连续给药20d,采用容积法测量关节肿胀程度,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的表达水平。结果:与模型组比较,不同剂量的蕲蛇水提液均能显著降低大鼠右后足跖肿胀度(P0.01),使炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著降低(P0.01),且对不同炎性细胞因子的抑制强度与阳性组相比有所不同。结论:蕲蛇提取液对AA大鼠关节炎症有一定的治疗作用,其治疗机制可能是通过口服免疫耐受机制产生免疫调节作用抑制炎性细胞因子实现的。     

基于LC-MS的系统性红斑狼疮小鼠的代谢组学研究

[目的]从代谢组学角度研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)模型小鼠MRL/1pr与昆明种对照小鼠C57BL/6J尿液中代谢物差异,寻找代谢标记物,以探讨SLE的发病机制.[方法]应用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用系统(HPLC-Q-TOF/MS),对SLE模型小鼠和对照组小鼠的尿液样本进行代谢图谱分析.应用Mass Hunter提取色谱峰信息,MPP(Mass Profiler Professional)软件筛选处理数据,数据模式识别方法采用有监督模式的偏最小二乘法(Partial Least Squares,PLS).[结果]SLE模型小鼠和对照组小鼠代谢特征存在明显差异.根据PLS分析的载荷图和VIP值,进一步筛选对数据分型具有显著影响的离子,鉴别得到9个代谢标记物.[结论]对照代谢路径发现,氨基酸代谢异常是造成组间代谢差异的主要原因,这为从代谢途径研究SLE小鼠发病机制提供了实验依据.     

基于HPLC-Q-TOF/MS的代谢组学方法用于解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮干预作用的研究

该文建立了基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(HPLC-Q-TOF/MS)的代谢组学方法,研究系统性红斑狼疮(SLE)小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后血清代谢物的变化,探讨SLE发病及药物作用机制。利用正交偏最小二乘法(orthogonal partial least squares, OPLS)对实验数据进行模式识别,发现对照组、SLE模型组、解毒祛瘀滋阴方治疗组和醋酸泼尼松治疗组的代谢图谱存在较明显的差异。根据OPLS载荷图,利用精确质量数结合二级质谱鉴定出traumatic acid,PAF,12(S)-HETE,15(S)-HETrE,Hepoxilin B3等12种差异代谢物。SLE小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后,有效调节PAF,12(S)-HETE等差异代谢物的相对含量接近于对照组水平。代谢通路分析表明,SLE发病会导致体内不饱和脂肪酸和氨基酸代谢通路显著变化,而解毒祛瘀滋阴方对SLE紊乱的不饱和脂肪酸代谢通路具有一定修复调节作用。     

蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白的提取和鉴定表征

该研究通过限制性胃蛋白酶酶解法提取蕲蛇中Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ),并采用离子交换色谱法对其进行纯化,所得蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳、紫外分光光度法、红外吸收光谱法和质谱法进行表征鉴定,结果显示,蕲蛇CⅡ相对分子质量约为130 kDa,其紫外吸收峰约为223 nm;红外图谱中在1 200~1 450 cm^-1具有特征吸收,表明蕲蛇CⅡ中有特征序列Gly-X-Y肽段,存在三股螺旋结构。通过对蕲蛇CⅡ与牛CⅡ进行蛋白质肽段质谱图分析对照后发现,两者具有相似肽段和CⅡ结构特征。以上鉴定表征结果证明采用酶解法提取蛋白为蕲蛇CⅡ,可为蕲蛇药材CⅡ的进一步药理研究提供实验基础。     

蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白对CIA大鼠的治疗作用

目的：研究蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）对胶原诱导性关节炎（collageninducedarthritis,CIA）模型大鼠的治疗作用,观察其治疗效果并探讨其作用机制。方法：90只Wistar大鼠除空白组外均采用牛CⅡ建立CIA模型并进行随机性分组,分为模型组、牛CⅡ组、蕲蛇水提液高、中、低剂量组、蕲蛇CⅡ高、中、低剂量组,每组10只。造模后第11d开始给药,期间采用容积法测量关节肿胀程度,连续给药20d后观察大鼠踝关节病理改变并采用流式细胞术检测大鼠外周血中CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群水平。结果：与模型组相比,蕲蛇高、中剂量组、蕲蛇CⅡ高、中剂量组和牛CⅡ组均能显著降低CIA大鼠右后足跖肿胀程度、CD4＋T细胞水平,改善大鼠踝关节病理形态,其中蕲蛇CⅡ中剂量组和牛CⅡ组还能显著降低CD4＋/CD8＋比值（P〈0.05）。结论：蕲蛇水提液及蕲蛇CⅡ提取物对CIA大鼠关节炎症均有一定的治疗作用,其治疗机理可能是通过主动免疫抑制降低机体亢进的免疫应答实现的。