小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定

目的：建立成年小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的分离和培养方法，并对其表面标志进行鉴定，为其应用提供实验依据。方法：应用体外细胞培养技术将小鼠MSC自股骨、胫骨中分离、纯化和培养，倒置显微镜观察其生长过程，流式细胞仪检测MSC表面抗体的表达。结果：使用全骨髓贴壁分离方法分离、扩增的MSC贴壁后形态较均一，生长良好，细胞表达CD29，CD44，但CD34和CD45表达阴性。结论：可以用全骨髓贴壁法从小鼠骨髓分离培养出MSC，在体外进行有效扩增，为以小鼠为模型研究MSC在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域的运用提供实验基础。     

纤维胆道镜治疗胆道残余结石573例临床分析

目的探讨纤维胆道镜治疗胆道术后残余结石的方法及价值。方法回顾分析2003年1月-2012年12月应用纤维胆道镜治疗术后胆管残余结石573例患者的临床资料。结果 573例患者中536例取净结石,取净率93.5%。取石次数1～7次,平均为（2.36±1.45）次。治疗期间一过性发热23例（4.0%）,腹泻42例（7.3%）,并发胆道出血7例（1.2%）,胰腺炎3例（0.5%）,窦道穿孔5例（0.9%）,均经保守治疗痊愈。结论纤维胆道镜技术是治疗术后胆管残余结石的安全、有效方法,应作为常规技术推广普及。     

RNA干扰对肝癌细胞CDC20表达的影响

目的 观察RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞株Hepal-6中CDC20表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepal-6 CDC20 mRNA的小干扰RNA(siRNA),以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepal-6,转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测Hepal-6细胞CDC20 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 siRNA各组与正常对照组和阴性对照组比较,CDC20 mRNA的表达均受明显抑制,并呈剂量依赖性(在100、50、25 nmol/L浓度下,Mixed siRNA组与正常对照组mRNA表达比较:0.370±0.058比0.840±0.044,0.480±0.081比0.900±0.068,0.830±0.062比1.010±0.054,各组P＜0.01);CDC20蛋白质的表达亦均受抑制(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及Mixed组与N-Cont或Blank组蛋白质表达比较:0.482±0.035/0.402±0.003/0.479±0.026/0.446±0.017比0.826±0.03l或0.835±0.024,各组P均＜0.01).结论 CDC20 siRNA可显著抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中CDC20 mRNA和蛋白质的表达.     

结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系

目的探讨结肠癌组织中长链非编码RNA（lncRNA）肿瘤蛋白翻译调节因子1（TPT1）-反义RNA1（AS1）、微小RNA（miR）-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系。 方法选取2015年1月至2017年12月深圳大学附属第一医院收治的117例接受根治性或姑息性手术切除结肠癌患者,均行手术切除结肠癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平,分析lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平与结肠癌病理特征的关系,采用Pearson相关性检验分析结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平的相关性,Kaplan-Meier曲线绘制不同lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平结肠癌患者3年累积生存率,Cox回归分析结肠癌患者预后影响因素。 结果结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达水平明显高于癌旁组织（3.405±0.555 vs 1.766±0.096）,miR-30c-5p表达水平（0.306±0.146 vs 0.872±0.267）明显低于癌旁组织（P＜0.05）。结肠癌lncRNA TPT1-AS1表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期（3.651±0.579 vs 3.257±0.486）,浸润深度T₃~T₄明显高于T₁~T₂（3.523±0.601 vs 3.301±0.491）,有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移（3.614±0.585 vs 3.220±0.456）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-30c-5p表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显低于Ⅰ~Ⅱ期（0.251±0.126 vs 0.346±0.145）,浸润深度T₃~T₄明显低于T₁~T₂（0.270±0.119 vs 0.338±0.162）,有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移（0.255±0.125 vs 0.351±0.151）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平呈负相关（r=-0.572,P＜0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示,lncRNA TPT1-AS1高表达水平组3年累积生存率明显低于低表达水平组（59.32% vs 87.93%）,miR-30c-5p高表达水平组3年累积生存率明显高于低表达水平组（85.00% vs 61.40%）（P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期（HR=2.387,95%CI：1.004~5.671）、淋巴结转移（HR=2.667,95%CI：1.021~6.969）、lncRNA TPT1-AS1≥3.405（HR=2.023,95%CI：1.076~3.803）为结肠癌患者预后独立风险因素,miR-30c-5p≥0.306（HR=0.175,95%CI：0.012~0.423）为独立保护因素（P＜0.05）。 结论结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达显著上调,miR-30c-5p表达显著下调,两者与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关,为患者预后独立影响因素,可能成为结肠癌预后评估的标志物。     

同种骨髓间充质干细胞静脉输注对大鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞和IL-10、IL-2、TNF-a的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞静脉输注对大鼠免疫功能的影响.方法 实验组和对照组大鼠尾静脉分别注射骨髓间充质干细胞和生理盐水3次,观察大鼠一般情况,第10天处死,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群,ELISA法检测血清IL-10、IL-2、TNF-a含量.结果 两组大鼠一般情况无统计学差异;实验组大鼠血清CD4+计数降低,CD8+计数升高,CD4+/CD8+比值下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.05):实验组大鼠血清IL-10升高,IL-2降低,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);两组TNF-a无统计学差异.结论 骨髓间充质干细胞静脉输注能负性调节大鼠免疫功能.