不同比例甘草炮制吴茱萸毒性剂量下对小鼠肝脏氧化应激及自噬影响的比较

目的 通过比较吴茱萸生品及不同比例甘草炮制品在毒性剂量对小鼠肝脏氧化应激和自噬的影响,探讨甘草炮制吴茱萸的原理及科学内涵。方法 70只小鼠随机分为空白组、吴茱萸生品组、无甘草炮制品组及甘草炮制品组（吴茱萸与甘草质量比分别为100∶3、100∶6、100∶12、100∶24）,依次按30 g·kg^-1灌胃给予纯净水、吴茱萸生品及相应炮制品水煎液。利用紫外-可见分光光度法测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平;苏木素-伊红（HE）染色法评价肝组织病理形态变化;荧光法检测肝组织中活性氧（ROS）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、谷胱甘肽巯基转移酶1（GSTA1）,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）和p62的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、磷酸化核糖体p70 S6蛋白激酶（p-p70S6K）、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达水平。结果 与空白组比较,吴茱萸生品组给药7 d后小鼠体质量的增加开始减缓,差异逐渐增大,肝体指数显著升高（P<0.01）;病理形态学观察显示肝小叶结构紊乱,局部肝窦狭窄或消失,存在炎性细胞浸润,局部出血等现象,血清中ALT、AST及肝组织中ROS水平均显著升高（P<0.01）,肝组织中Keap1、HO-1、NQO1、GSTA1、p62 mRNA及p-mTOR、p-p70S6K、p62蛋白表达显著下降（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著上升（P<0.01）。与生品组比较,所有炮制品组小鼠体质量升高,肝体指数、血清中ALT和AST、肝组织中ROS水平均有所下降,其中仅甘草炮制品组（100∶6）的肝小叶结构完整,肝窦大小趋近于空白组;各炮制品组肝组织中Keap1、HO-1、NQO1、GSTA1和p62 mRNA的表达整体呈上升趋势,其中仅甘草炮制品组（100∶6）各指标均有明显上升（P<0.05,P<0.01）;各炮制品组p-mTOR、p-p70S6K、p62蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均有所回调,其中甘草炮制品组（100∶6）p-mTOR、p-p70S6K的蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,以及甘草炮制品组（100∶24）p62蛋白表达回调幅度最大,除p-mTOR外差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 吴茱萸造成肝损伤与其能够诱发氧化应激,进而产生病理性自噬,造成肝细胞损伤密切相关,不同比例甘草炮制后可相应减弱该作用,尤以100∶6比例甘草炮制效果最优。     

动脉硬化性脑梗塞发病机理的研究述略

动脉硬化性脑梗塞全名为动脉粥样硬化血栓形成性脑梗塞(atherothrombotic brain infarction ABI)，系指供应脑部的动脉血管壁病变，通过查阅文献，对ABI发病机理进行探讨。明确脂质代谢及血液流变学异常与动脉硬化性脑梗塞的关系，其中HDL是AS的保护因子而LDL则是AS的危险因子。了解到ABI发病与多种基因相关，其中bHLA-A30基因为易感基因。中医认为，ABI是痰瘀互结的病理产物，应从气虚、气滞、血瘀、痰浊的角度来认识，相当于“中风”病证，对ABI的治疗以复方为多见，其基本治疗思路都是扶正祛邪、益气活血化痰等。分子生物学技术的不断发展及人类基因组计划的完成，将从遗传和基因的角度探讨ABI的发病机理，尤其是生物芯片等技术的出现，将对ABI的诊断及治疗，相应药物的筛选与开发提供保证。     

小鼠气血双虚模型的复制

目的：复制小鼠气血双虚动物模型。方法：采用失血法和环磷酰胺并用法复制气血双虚动物模型，通过观察小鼠的一般体征、外周血血象、胸腺及脾脏组织形态改变来观察模型的复制情况，并用当归补血口服液进行反证。结果：与空白对照组小鼠比较，模型组小鼠外周血象显著降低，胸腺脾脏均发生严重萎缩、皮质明显变薄、脾小结明显缩小、淋巴细胞数明显减少，当归补血口服液可明显对抗上述变化。结论：失血法和环磷酰胺并用法可成功复制出气血双虚动物模型。     

炒制对闽产栀子饮片中栀子苷含量影响

目的:研究炒制对闽产栀子中栀子苷含量的影响。方法:采用高效液相色谱法。Phenomenex C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm);流动相:乙腈-水(15∶85);检测波长:238nm;流速为1.0ml·min-1。结果:用HPLC法测得闽产栀子、炒栀子、焦栀子中栀子苷的含量随着炮制程度的加重依次递减。结论:栀子中栀子苷平均含量为7.13%,炒栀子栀子苷平均含量为6.95%,焦栀子栀子苷平均含量为5.67%。     

巴戟天不同炮制品对大鼠肝药酶CYP3A的影响

目的通过研究巴戟天不同炮制品对大鼠CYP3A的影响,探索巴戟天盐制和甘草汁制的机理。方法将110只大鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥0.1 g/kg剂量组和生/制/盐巴戟天2.0、1.0、0.5 g/kg剂量组,予相应剂量药液灌胃给药7 d。采用体外温孵法、Western blot和荧光定量PCR技术分析CYP3A酶活性、蛋白和mRNA表达。结果与空白对照组比较,除生巴戟天2.0 g/kg组外,其余各给药组的6β-羟基睾酮生成速率均明显增加(P<0.05);在蛋白和mRNA表达上,仅有制巴戟天1.0 g/kg组CYP3A蛋白的表达、盐巴戟天1.0 g/kg组CYP3A1 mRNA的表达和生巴戟天1.0 g/kg组CYP3A2 mRNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各给药组CYP3A蛋白和mRNA表达均明显升高(P<0.05)。与生巴戟天对应剂量组比较,制巴戟天2.0 g/kg组、盐巴戟天1.0和2.0 g/kg组的6β-羟基睾酮生成速率均明显增加(P<0.05),制巴戟天1.0 g/kg和盐巴戟天2.0 g/kg组CYP3A蛋白的表达、制巴戟天2.0 g/kg和盐巴戟天1.0 g/kg组CYP3A1 mRNA的表达、制巴戟天1.0 g/kg组CYP3A2 mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论巴戟天对CYP3A有诱导作用,用甘草汁和盐炮制后诱导作用增强。     

建泽泻与川泽泻饮片的对比研究

目的对建泽泻与川泽泻进行对比研究。方法传统方法测量泽泻饮片的直径、败片率、碎屑率;采用现代方法测定其水分、总灰分、浸出物;采用HPLC法检测23-乙酰泽泻醇B含量及特征指纹峰。结果通过外观性状及内在质量可以看出建泽泻与川泽泻区别明显。结论建议建泽泻与川泽泻应分别收录。     

中药砂仁化学成分与质量标准研究概况

对中药砂仁的化学成分进行分析,包括挥发性成分以及砂仁的质量标准的概况进行综合分析,为科学全面制定砂仁药材的质量标准提供充分的依据.     

八宝丹通过抑制NLRP3/Caspase-1通路减轻对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

目的：研究八宝丹(BBD)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3/胱天蛋白酶-1(NLRP3/Caspase-1)通路蛋白的影响。方法：将C57BL/6小鼠随机分组,BBD(75、150、300 mg·kg^-1)灌胃给药3 d,2次/d,于末次给药后2 h,腹腔注射APAP(400 mg·kg^-1),14 h后摘眼球取血,随后脱颈椎处死取材。苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织细胞形态学变化;生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6) mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-18(IL-18)的...     

巴戟天经不同比例甘草炮制后对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和HPG轴改善作用的比较

目的 通过比较巴戟天生品及不同比例甘草炮制品对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）的改善作用，以及对大鼠组织中Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路蛋白表达的调节作用，分析不同比例甘草炮制（甘草与巴戟天质量比分别为0∶100、3∶100、6∶100、12∶100、24∶100，以下分别简称无甘草炮制品和100∶3、100∶6、100∶12、100∶24炮制品）对巴戟天补肾助阳功效的影响，阐释制巴戟天的炮制内涵。方法 巴戟天炮制品按2020年版《中华人民共和国药典》收载的制巴戟天方法进行制备。采用腺嘌呤灌胃给药复制肾阳虚大鼠模型，利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E₂）、睾酮（T）水平，分光光度法测定尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）水平，苏木素-伊红（HE）染色法评价组织病理形态变化，免疫组织化学法分析E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Wnt2b、β-catenin、Smad1和Smad4蛋白的表达。结果 100∶6、100∶12炮制品对体态的改善较好，100∶12炮制品降低血清中BUN、SCr、FSH和LH水平及调整E₂/T比值的作用最优，100∶6、100∶12炮制品调节E-cadherin、α-SMA、Wnt2b、β-catenin、Smad1和Smad4蛋白表达的作用较佳。结论 巴戟天经100∶6、100∶12比例甘草炮制后对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和HPG轴有较好的改善作用，这与其能更好地调节大鼠肾脏和睾丸组织中Wnt/β-catenin通路及睾丸组织中TGF-β₁/Smads通路密切相关。     

乌头汤加半夏不同炮制品对大鼠CYP3A的影响

目的:以乌头汤为载体,研究加入半夏不同炮制品后对大鼠细胞色素P450酶系(CYP)3A1/2的影响,为阐述"十八反"中半夏反乌头的反性内涵提供实验依据。方法:CYP3A酶活性采用体外温孵法和体内探针法进行检测,酶蛋白和mRNA表达采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)和荧光定量聚合酶链式反应技术进行检测。结果:与乌头汤加生半夏组相比,乌头汤加法半夏各剂量组6β-羟基睾酮(6β-OH-Tes)生成速率未发生显著性变化,CYP3A蛋白表达显著增加(P0.01,P0.05),CYP3A1 mRNA的表达仅在0.60 g·kg~(-1)剂量组显著降低(P0.01);乌头汤加姜半夏在1.20 g·kg~(-1)剂量组时6β-OH-Tes生成速率极显著降低(P0.01),CYP3A蛋白表达仅在0.60 g·kg~(-1)剂量组明显增加(P0.05),CYP3A1 mRNA的表达在0.60,1.20 g·kg~(-1)剂量组有显著降低(P0.01);在体内探针法试验中乌头汤加法/姜半夏组6'-羟基丁螺环酮(6'-OHBP)和丁螺环酮(BP)的药时曲线下面积(AUC0-t)比值(6'-OH-BP/BP),1-(2-嘧啶基)哌嗪(1-PP)与BP的AUC0-t比值(1-PP/BP)均未发生明显变化。结论:不同半夏炮制品增强乌头汤对CYP3A的抑制作用的程度不同,这将会导致乌头汤中的双酯型生物碱类成分(如乌头碱)代谢减慢,从而引起药理作用的增强或毒性的增加。