SELEX实验中两种富集方法的比较

比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。     

Inhibition of T cells by direct contact with macrophages after murine amputation injury

Objective To determine whether mac-rophages post trauma have inhibitory effect onnormal T cells via direct cell to cell contact. Methods A murine amputation injurymodel was used,macrophages were harvest-ed from abdominal cavity and treated with mi-tomycin-C to abrogate the secretion of cyto-kines.Separation of T cells from splenocytesin normal mice was performed using nylon     

GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的 体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法 首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b／p50和pET22b／p65，并在大肠杆菌E．coli BL-21中诱导表达，后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果 经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白，GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论 证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用，这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。     

创面感染防治应注意的几个问题

感染是创伤后的常见并发症,创面/伤道则是伤口外源性与内源性感染的主要入侵途径。本文从七个方面对创面感染防治进行探讨:环境中微生物与伤口感染病原体并非呈一致性关系;污染伤口清创术前或术后进行常规微生物鉴定或培养没有必要;对批量伤员创面感染的处置应遵循"分级救治"与"时效救治"原则;针对创面的新型抗感染策略的临床转化需要加强;对批量伤员的创伤感染预防措施应制定统一的流程;在遵循"早期清创、延期缝合"原则时,需强调"动态监测"与"综合防治";需高度警惕并切实预防创伤后脓毒症发生。     

创伤患者外周血单核细胞自噬变化的研究

目的 研究创伤患者外周血单核细胞的自噬变化.方法 ①根据损伤严重度评分(injury severity score,ISS)或简明损伤定级标准(abbreviated injury scale,AIS)将创伤患者分为轻度创伤组、中度创伤组、严重创伤组,同时设立健康对照组,分别于创伤后24 h,3、5、10 d采集外周血,采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离创伤患者外周血单核细胞,应用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察细胞自噬现象.②将分离得到的单核细胞进行MDC染色并裂解,应用荧光分光光度计(激发光波长380 nm、发射光波长525 nm)测定荧光强度进行定量分析.③于创伤后24 h、3、5 d检测患者血糖水平,分析创伤后自噬与血糖的相关性.结果 与健康对照组相比,创伤患者外周血单核细胞自噬水平明显升高(P＜0.01),创伤后外周血单核细胞自噬水平与创伤程度成正比,与创伤后血糖呈正相关(轻度创伤组:r=0.962,中度创伤组:r=0.928,重度创伤组:r=0.973,P＜0.05).结论 创伤后通过调节单核细胞自噬水平,使机体免疫功能得到恢复,从而改善预后.     

黄芪多糖调节创伤小鼠白介素2及白介素2受体基因表达的实验研究

研究了黄芪多糖对创伤小鼠白介素２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２受体ｍＲＮＡ的调节作用。结果显示，ＡＰＳ体内应用可明显升高创伤小鼠脾淋巴细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ水平，促进ＩＬ－２的生成及ＩＬ－２Ｒ的表达，降低创伤小鼠血清，巨噬细胞、Ｔｓ细胞对ＩＬ－２ｍＮＲＡ，ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的抑制活性。     

p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

目的：获得NF－κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因，并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法：利用引物二聚体搭桥技术，扩增p65亚基DNA结合域基因片段，并将基克隆入酵母双杂交载体pG-BKT7 DNA-BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109，在SD／Trp选择培养基上培养，观察转化株的生长情况。按尿素／SDS法抽提酵母蛋白，用SDS－PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株β－半乳糖苷酶的活性。结果：获得p65 DNA结合域基因片段，并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达，对酵母细胞无毒性作用，无自身激活活性。结论：NF－κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因，用于肽库筛选，捕捉与之相互作用的多肽。     

负载脊髓匀浆蛋白的树突状细胞促进小鼠脊髓损伤功能恢复的作用研究

目的 研究负载脊髓匀浆蛋白的未成熟树突状细胞(hpDCs)对小鼠脊髓损伤的促修复作用.方法 通过局部或腹腔注射hpDCs,并设立对照,利用BBB功能评分及组织病理学方法,观察其对小鼠脊髓损伤神经功能恢复和局部病变范围、空洞大小、胶质瘢痕厚度等病理改变的影响.结果 注射后第84天,腹腔注射hpDCs组BBB评分为16.5,与对照组相比有显著统计学意义(P＜0.01).各组腹腔或局部注射效果无统计学意义(P＞0.05).同时hpDCs可延长Nestin表达时间,缩小损伤区范围、空洞面积、胶质瘢痕厚度.结论 腹腔或局部注射hpDCs均可改善局部环境并促进小鼠脊髓损伤神经功能恢复.