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1.
目的:获得NF-κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法:利用引物二聚体搭桥技术,扩增p65亚基DNA结合域基因片段,并将基克隆入酵母双杂交载体pG-BKT7 DNA-BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109,在SD/Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况。按尿素/SDS法抽提酵母蛋白,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株β-半乳糖苷酶的活性。结果:获得p65 DNA结合域基因片段,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达,对酵母细胞无毒性作用,无自身激活活性。结论:NF-κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因,用于肽库筛选,捕捉与之相互作用的多肽。  相似文献   
2.
目的 探讨He-Ne激光重复照射对培养增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的抑制作用。方法 以不同功率密度(10、50、100和150mW/cm^2)He-Ne激光照射培养增生性瘢痕成纤维细胞30min,1/d,连续照射3d,在3d重复照射后24h用^3H-脯氨酸掺入法和斑点杂交法分别检测成纤维细胞胶原合成和Ⅰ型前胶原基因表达。结果 培养增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成、Ⅰ型前胶原基因表达水平在10、50m  相似文献   
3.
目的:构建一个随机20个氨基酸的丝状噬菌体肽库。方法:扩增随机合成DNA模板,经限制性内切酶XhoⅠ+ SpeⅠ酶切后克隆进噬菌粒pTMB2,构建随机丝状噬菌体肽库并检验其库容及随机性。结果:完成丝状噬菌体随机肽库的构建,其库容为2.1×108,其氨基酸分布于理论频数无显著差异。结论:丝状噬菌体随机肽库被成功构建。  相似文献   
4.
大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛模型的制备   总被引:5,自引:1,他引:4  
目的 :为了深入研究SAH后CVS的发生机制及其治疗效果。方法 :42只大鼠随机分 :A组 :正常对照组 ;B组 :注射 0 9%氯化钠对照组 ;C组 :采用 0 1、0 2、0 3、0 4、0 5ml自体动脉血注入大鼠枕大池制作CVS模型。观察大鼠的存活、临床表现、血压、血气分析、rCBF测定及病理学检查等。结果 :B组大鼠均存活 ,临床表现典型及和病理学改变轻微 ,与A组差异不明显。C4 :大鼠均存活 ,但反应迟钝 ,自洁性差 ,血压短暂升高 ,rCBF下降明显 ,持续时间长 ;颅底出血 ,颅底动脉管壁破坏、层次结构消失 ,与B组差别显著。C1~ 3组大鼠死亡率高。C5组大鼠临床表现肌病理改变不明显。结论 :注射 0 2ml时 ,大鼠存活率高 ,临床表现典型 ,rCBF降低和病理改变明显 ,而且与慢性出血性脑血管痉挛相一致 ,是最理想的CVS模型。  相似文献   
5.
本实验利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以人单核淋巴细胞系U937细胞总RNA为模板,扩增出人TNFRI型受体胞外区约224个氨基酸残基的cDNA序列,将此片段为模板,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约180个氨基酸的DNA序列,将其克隆于载体PDM18-T进行序列测定,随后构建于新型酵母表达载体PGBKT7-DNA-BD,为进一步通过酵母双杂交获得拮抗TNFRI的具有生物学活性的多肽奠定了基础.  相似文献   
6.
人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的分离、克隆人基因组随机MARs片段,分析其序列特征,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础.方法用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核,分离人T细胞基因组随机MARs片段,并将其克隆进入PUC19质粒;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序,生物信息学分析其序列的特征.结果从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段,构建成MARs库,初步任意挑选58个克隆,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性,对其中1个克隆的序列分析表明,其序列AT含量较高,不仅含有AC-和ATAT基序,还包含有多个转录/复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列.结论分离获得的DNA片段具有MAR的特性,同一DNA序列中存在不同的元件组合,其参与基因表达调控的功能应该是复杂、多样的.  相似文献   
7.
一种稳定、易于操作的噬菌体随机肽库载体的构建   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定,高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽类载体,方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOM3序列进行点矩阵作图分析,切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性,原克隆位点63bp的填充序列增加到1435bp以便于酶切鉴定和电泳回收,结果:构建了命名为pTMB2的噬菌粒载体。结论:pTMB2的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。  相似文献   
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