SO2对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及与MST1/LATS1的关系

目的 探讨外源性气体信号分子二氧化硫（SO₂）在2型糖尿病（T2DM）大鼠心肌纤维化中的作用,并观察其对促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠被随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+SO₂组、SO₂组,其中糖尿病组和糖尿病+SO₂组使用链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射复制糖尿病大鼠模型,当血糖 ≥ 16.7 mmol/L时表示糖尿病模型复制成功,随后以高糖高脂饲料进行喂养。对照组和SO₂组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠溶液,之后糖尿病+ SO₂组和SO₂组以外源性SO₂供体腹腔内注射持续4周。对大鼠心肌组织进行Masson染色,观察心肌胶原纤维形成情况;透射电镜观察心肌超微结构;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;Western blotting检测心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、MST1、LATS1、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达。结果 糖尿病组Masson染色阳性面积较对照组大（P <0.05）,糖尿病 + SO₂组较糖尿病组小（P <0.05）,对照组与SO₂组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。糖尿病组心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量较对照组高（P <0.05）,糖尿病 + SO₂组较糖尿病组低（P <0.05）,对照组与SO₂组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。糖尿病组心肌组织细胞凋亡率较对照组高（P <0.05）,糖尿病 + SO₂组较糖尿病组低（P <0.05）,对照组与SO₂组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。糖尿病 + SO₂组心肌组织Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、MST1和LATS1蛋白相对表达量较糖尿病组低（P <0.05）,对照组与SO₂组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 SO₂调节了2型糖尿病大鼠心肌组织中促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白的表达,并与心肌纤维化的改善呈相关性。     

SO2对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨二氧化硫（SO₂）对链脲佐菌素（STZ）和高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病（T2DM）大鼠心肌纤维化的改善作用及对细胞凋亡和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad同源物2/3（Smad2/3）通路的影响,阐明SO₂改善糖尿病心肌纤维化可能的分子机制。 方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、T2DM组、T2DM+SO₂组和SO₂组。除对照组和SO₂组外,T2DM组和T2DM+SO₂组大鼠采用腹腔注射STZ（35 mg·kg^－1）和高糖高脂饮食建立T2DM大鼠模型,T2DM+SO₂组和SO₂组大鼠腹腔注射外源性SO₂供体［亚硫酸钠（Na₂SO₃）/亚硫酸氢钠（NaHSO₃）,85 mg·kg^－1·d^－1］,共8周,采用Masson染色观察各组大鼠心肌组织纤维化病理形态表现,并计算各组大鼠心肌胶原容积分数,采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中相关蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,T2DM组大鼠心肌组织形态结构紊乱,心肌胶原纤维形成明显增加,心肌胶原容积分数明显升高（P<0.01）,心肌组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与T2DM组比较,T2DM+SO₂组大鼠心肌组织形态结构有所改善,心肌胶原纤维形成明显减少,心肌胶原容积分数明显降低（P<0.01）,心肌组织中α-SMA、Col Ⅲ、Bax、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,SO₂组大鼠上述各项指标差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 SO₂可通过抑制促凋亡相关蛋白和TGF-β1/Smad2/3通路蛋白表达,缓解T2DM大鼠心肌纤维化。     

小叶榕叶对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO和TNF-α的影响

目的 采用体外炎症模型观察小叶榕叶水提物及其不同极性萃取部位对炎症介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法 采用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞,建立体外炎症模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测小叶榕叶水提物及其不同萃取部位对RAW264.7巨噬细胞的毒性作用;Griess法检测培养液中NO含量;采用酶联免疫试验(ELISA)法检测培养液中TNF-α的含量。结果 LPS刺激RAW264.7巨噬细胞后,培养液中NO和TNF-α含量显著增加(P < 0.01);小叶榕叶水提物及其不同萃取部位对NO和TNF-α的释放有不同程度的抑制作用,其中水提物高、中、低浓度组对NO的抑制率分别为17.0 %,30.0 %,33.0 %;乙酸乙酯部位中、低浓度组对NO的抑制率分别为40.0 %、27.0 %;水相部分低浓度组对NO的抑制率为37.0 %;水提物中浓度组和乙酸乙酯部位高浓度组对TNF-α的抑制率分别为58.0 %,43.5 %,与LPS组比较,差异均有统计学意义(P < 0.01)。结论 小叶榕叶可能通过抑制NO和TNF-α释放而发挥抗炎作用,其中乙酸乙酯部位、水相部分是小叶榕叶的主要抗炎活性成分。     

通心络胶囊改善压力超负荷大鼠心肌肥厚和缝隙连接蛋白Cx43重构的研究

目的 探索通心络胶囊对压力超负荷大鼠心肌肥厚和QT离散度以及缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。 方法 随机均分45只雄性SD大鼠成3组:对照组(control,C),模型组(model,M),治疗组(treatment,T),腹主动脉缩窄手术建立压力超负荷大鼠模型,予通心络胶囊[1.5 g/(kg·d)]干预12周后,以多普勒超声心动图检测,同时测定大鼠QT离散度,大鼠处死后取左室心肌组织行HE染色,以免疫组化方法检测Cx43的表达及分布,RT-PCR法检测Cx43 mRNA的表达。 结果 M组大鼠心脏多普勒结果与C组比较显示IVSs、VPWs、LIVSd和LVPWd均有增加(均P<0.01);而T组和M组比较,以上检测参数则得以改善。与C组相比,M组QT离散度明显延长(P<0.01),与M组相比,T组QT离散度明显缩短(P<0.01)。同时HE染色显示:与C组相比,M组心肌细胞肥大明显(P<0.01),呈无序排列,T组与M组比较,心肌肥大及排列均较其改善(均P<0.01)。RT-PCR及免疫组化检测结果均显示:与C组相比,M组Cx43 mRNA和蛋白的表达均有明显下调(均P<0.05),而T组与M组相比,Cx43 mRNA和蛋白的表达有所上调(均P<0.05)。 结论 通心络胶囊在改善压力超负荷大鼠心肌肥厚的同时也缩短QT离散度及上调Cx43的表达。      

不同采收期小叶榕叶HPLC指纹图谱研究

目的研究不同采收期小叶榕叶的HPLC指纹图谱,为鉴定小叶榕药材提供依据,为确定其最佳采收期提供参考。方法以对羟基苯甲酸仲丁酯作为参照峰将指纹图谱分为高极性和低极性2部分进行表达。PurospherSTAR C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),Guard色谱柱:XB-C18(Welch Materials,5μm),流动相为0.2%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长270 nm(高极性部位)和290 nm(低极性部位)。利用HPLC法测定不同采收期的12个样品的色谱图谱。结果小叶榕叶中所含成分的各色谱峰均得到了有效分离,在测定的12批药材中,共有55个色谱峰,其中图谱显示有44个峰为12批样品所共有,确定为特征指纹峰,对其中10个共有指纹峰进行了标记;初步发现最佳采收期为秋冬季节。结论该法建立的HPLC指纹图谱具有可靠性,可为进一步研究制定小叶榕叶的质量标准提供依据。     

小叶榕叶抗炎成分分析及活性评价

目的对小叶榕叶抗炎有效部位的化学成分进行分离鉴定和活性筛选。方法采用硅胶柱层析对小叶榕叶水提液进行分离纯化,利用IR、1H-NMR、13C-NMR对其结构进行鉴定。Griess法分析各化合物和巨噬细胞RAW264.7共同培养液中NO量;采用ELISA法检测培养液中TNF-α表达。结果得到10个化合物分别是苯甲酸(1)、对羟基苯丙酸(2)、3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(3)、对羟基苯乙酸(4)、水杨酸(5)、3,5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮(6)、邻羟基苯丙酸(7)、十五烷酸(8)、2-羟基-3-甲基丁酸(9)、对羟基苯甲酸仲丁酯(10)。分离到的化合物2、4、5、7、9、10系首次从该植物中得到。化合物1、2、3、4、5、10对NO因子的释放抑制作用显著。而化合物1、3、4、5、6、7对TNF-α因子表达抑制较为明显。结论药效试验发现小叶榕叶发挥抗炎药效的作用可能是多成分、多指标协同作用的结果。     

麝香保心丸对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大及其 Cx43蛋白表达的影响

目的：观察在麝香保心丸(Shexiang Baoxin Pills,SBP)的影响下异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)诱导的心肌 细胞体积、样态及缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的变化。方法：采用随机法将H9C2心肌细胞分为假手术 组(sham组)、Iso组、Iso+SBP组,培养72 h后,在倒置相差显微镜下测定H9C2细胞表面积;采用聚氰基丙烯酸正丁酯 (bicinchoninic acid,BCA)蛋白检测法测定细胞蛋白浓度;采用MTT比色法测定心肌细胞存活率;采用Western印迹检 测Cx43蛋白的表达。结果：倒置相差显微镜下观察发现：与sham组比较,Iso组心肌细胞表面积和细胞蛋白浓度均增 加(均P<0.05);而与Iso组相比,Iso+SBP组心肌细胞表面积减少,细胞蛋白浓度降低(均P<0.05);Western印迹显示：与 sham组相比,Iso组H9C2细胞Cx43蛋白的表达水平明显下调(P<0.05);与Iso组相比,Iso+SBP组Cx43的表达水平明显上 调(P<0.05)。结论：麝香保心丸可改善Iso诱导的心肌细胞肥大,并能使Cx43蛋白表达下调。     

硫化氢下调Yes相关蛋白1和含PDZ结合基序的转录共激活因子抑制大鼠心肌梗死心肌细胞凋亡及改善心肌纤维化的机制研究

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 43只SD大鼠按随机数字表法分为4组:对照组12只、心梗组13只、硫化氢组6只和心梗+硫化氢组12只。采用异丙肾上腺素腹腔注射法(50 mg/kg, 1次/d, 共2 d)建立急性心梗大鼠模型, 末次给药后48 h记录心电图及肌钙蛋白变化确定造模情况。造模成功后, 心梗组和心梗+硫化氢组大鼠每日腹腔注射硫氢化钠(56 μmol/kg, 1次/d, 持续6周)。6周后比较各组大鼠心脏彩色超声观察心功能变化情况, Masson染色观察各组大鼠心肌胶原容积分数, TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率, 酶联免疫吸附(Western blot)法检测Yes相关蛋白1(YAP1)、含有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)、哺乳动物STE20样激酶2(MST2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、基质金属蛋白酶3(MMP3)/基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)比值、B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)等蛋白在各组大鼠心肌组织的表达变化情况。结果与对照组比较, 心...