适配子在肿瘤研究中的应用进展

在20世纪90年代初,美国的 Tuerk等［1-2］在实验室中发明了一种叫做指数富集配基的系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）技术,由此技术筛选出来的寡核苷酸命名为适配子（aptamers）。适配子可以和抗体媲美,甚至优于抗体。具有以下特点［3］：（1）可以保持蛋白的天然结构属性,性能稳定,可以常温运输、长期保存;（2）筛选适配子过程简单,周期短（一般2个月左右）;（3）相对分子质量比抗体分子小,具有快速的血浆清除率、高组织穿透力、免疫原性低、变性可逆（数分钟内可以再生,因此可以反复使用）;（4）可在适配子中插入基因组或化学合成修饰（镜像异构适配子、糖基化、连接在大分子载体等方法）实现多层面调控,可直接用于生物检测、诊断及肿瘤靶向治疗。现结合肿瘤方面阐述细胞 SELEX（Cell-SELEX）及其适配子在肿瘤研究中的应用及意义。     

紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的: 观察紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠血糖、血脂及胰岛素水平的影响。 方法: 注射链脲佐菌素(STZ,40 mg·kg^-1, ip)加高糖高脂饲料喂养建立2型糖尿病大鼠模型,大鼠分为正常组、模型组、低中高剂量紫茉莉根醇提物(1,2,4 g·kg^-1)和罗格列酮组(4 mg·kg^-1),连续给药8周。给药后每2周测1次空腹血糖(FBG),试剂盒检测糖化血红蛋白(HbAlC)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝糖原及肌糖原含量,放射免疫法测血清胰岛素(FINS)。 结果: 给药8周后,糖尿病模型组大鼠FBG, HbAlC, TC, TG, FINS显著升高,胰岛素敏感指数(ISI)、肝糖原、肌糖原水平均显著下降(P<0.01);与糖尿病模型组相比,紫茉莉根醇提物中、高剂量组大鼠FBG, HbAlC, TC, TG, FINS水平下降,ISI, 肝糖原及肌糖原水平均上升,均有显著差异(P<0.01)。 结论: 紫茉莉根醇提物对实验性2型糖尿病大鼠具降糖调脂作用。     

针对U87-EGFRvⅢ细胞的适配子对胶质瘤荷瘤鼠的抑瘤作用

目的观察应用细胞一配体指数富集的系统进化技术（cellsystematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment,CelbSELEX）筛选出的针对稳定过表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（epidermalgrowthfactorreceptorvari—antⅢ,EGFRvⅢ）的U87-EGFRvⅢ细胞的适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的抑瘤作用。方法选用4～6周的雄性裸鼠28只随机分为4组,分别为空白对照组、转染试剂对照组、DNA原库GN对照组、适配子U2治疗组,每组7只。皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型,通过invivojet_PEI^TM转染试剂的作用将筛选得到的适配子U2和原库GN分别进行瘤内注射。给药结束1周后,对肿瘤的重量和体积大小进行统计学分析。结果在形体上U2治疗组肿瘤大小明显小于其他组,试剂组与原库GN组均没有明显的差异,统计学分析U2治疗组与其它组的肿瘤重量和体积均有差异（P〈0．05）。结论筛选得到的适配子对通过皮下种植U87一EGFRvUI细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型中的肿瘤生长有一定的抑制作用,为适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的应用提供了一定的技术理论基础。     

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和AnnexinV-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况.结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P＜ 0.05);明显增加细胞凋亡率(P＜0.05).同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P＜0.05).结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础.     

FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物对鼻咽癌的体内靶向治疗研究

目的探讨叶酸(folic acid,FA)分子靶向载顺铂(cisplatin,CDDP)羧甲基-β-环糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM-β-CD)纳米药物(FA-CM-β-CD-CDDP)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的体内靶向治疗效应。方法荷叶酸受体(folate receptor,FR)表达阳性的HNE-1瘤和FR表达阴性的CNE-2瘤的同一裸鼠经尾静脉给予FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物(按CDDP 10mg·kg-1给药)1.5h后,采用原子吸收光谱法检测2种瘤块组织内的CDDP浓度,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内靶向能力。将20只荷HNE-1瘤裸鼠按随机数字表法分为4组(每组5只),均经尾静脉注射给药0.2mL:对照组注射生理盐水,载体组注射FA-CM-β-CD溶液,CDDP组注射浓度为3mg·kg-1的CDDP溶液,纳米药物组注射FA-CM-β-CD-CDDP溶液(含CDDP浓度3mg·kg-1),给药后21d测量各组HNE-1瘤块体积和质量,并采用免疫组化检测瘤块增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内肿瘤抑制效应。结果 HNE-1肿瘤组织内CDDP含量明显高于CNE-2肿瘤组织(P<0.05)。纳米药物组的HNE-1瘤块体积和质量抑瘤率分别为43.36%、41.67%,较载体组(7.91%、5.56%)和CDDP组(24.51%、22.22%)均明显增加;且HNE-1瘤块PCNA阳性细胞指数为47.75%,表达较对照组(90.83%)、载体组(89.62%)和CDDP组(68.43%)均明显降低。结论构建的FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物能够靶向抑制FR阳性的NPC瘤块生长。