在扫描电镜下观察培养不同时间的人鼻咽癌细胞株(CNE)表面特殊结构变化过程

在常规培养瓶中附贴小块盖玻片,使CNE细胞株在玻片上生长。培养6、24小时和2、3、4天后,各取出附在玻片的瘤细胞进行扫描电镜观察。检查结果,泡状突起和微绒毛是瘤细胞表面结构变化的主要特征。培养后一天,瘤细胞表面出现大量分布均匀的泡状突起,第二天开始分布于细胞周边,第三天后则几乎完全消失。而在培养第一天时,细胞边缘仅有少量微绒毛存在;到第二天时,微绒毛在细胞表面呈稀疏排列;第三天后,可见瘤细胞表面布满致密的微绒毛。此外,培养一天时,在细胞表面还查见叶状伪足和折叠皱纹状结构,后者于第二天消失。丝状伪足在不同培养时间内均可查见,但多分布于细胞一侧,也有的沿细胞周边分布。丝状伪足可见有2级分叉,其末端呈吸盘样结构。本实验表明,CNE细胞株的表面结构不是恒定不变的,而是具有明显的易变性,并可因培养时间的长短,而发生不同的改变。     

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究

目的：探讨高迁移率蛋白B1（HMGB1）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响及 TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路介导的分子机制。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs ,采用不同浓度 HMGB1（0．1～1000．0 ng ／mL）处理,分为对照组（未经任何处理）、HMGB1组、HMGB1＋ TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）干预组,观察各组细胞活性及 HMGB1对 VSMCs 迁移的影响;实时定量 RT‐PCR与 Western blot 分别检测TLR4、Akt、p‐Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达;ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1（0．1～1000．0 ng／mL）呈剂量依赖性促进VSMCs迁移（P＜ 0．05）;经细胞活性测定,HMGB1在使用的浓度范围内对 VSMCs未造成细胞毒性作用（P＜ 0．05）;HMGB1（100 ng／mL）处理的 VSMCs细胞组 PI3K 活性及 Akt磷酸化水平明显增加（P＜ 0．05）;经 TLR4 siRNA 转染发现, HMGB1引起的VSMCs迁移明显减弱（P＜0．05）,同样在PI3k抑制剂干预组,PI3K／Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs迁移也被明显抑制（P＜0．05）。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路参与了此过程,提示以TLR4依赖的PI3K／Akt途径为靶点,可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。     

PCSK9抑制剂Alirocumab降低LDL-C的研究新进展

Alirocumab为一种抗PCSK9单克隆抗体,可通过抑制PCSK9,阻止LDL-R的降解,从而降低血液中LDL-C水平。在刚刚结束的2014美国心脏协会年会(AHA2014)期间公布了多项有关PCSK9抑制剂Alirocumab在降低LDL-C中的临床研究(Ⅲ期临床试验)。现结合相关临床研究结果,对Alirocumab在降低LDL-C中的作用做一介绍。     

miRNA在缺血性心脏病中的研究进展

<正>缺血性心脏病(IHD)是人类健康的主要杀手,已成为世界第一位的死亡原因〔1〕。当IHD发生发展时,外周血中心肌肌钙蛋白(c Tn)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等心肌损伤标志物就会大量升高,特别是c Tn对IHD的早期诊断和治疗提供了依据。但c Tn一般在IHD患者具有典型胸痛症状3.5 h后才会有明显的升高,由于这种相对"延迟"的释放,当被检测出时,心肌     

小鼠腹水型肝癌(Hca)的生长规律及一般生物学特性的观察

小鼠腹水型肝癌(Hca)在昆明种小鼠腹腔内接种含10~6个活瘤细胞的0.1毫升的腹水稀释液,可获100%的成活率,无自行消退。腹水瘤细胞的增长可分为三个时期,即增长期(第1—3天)、高峰期(第4—8天)和递减期(第9天以后)。瘤细胞形态呈圆形,分大、中、小三类,核分裂在接种后前8天较为活跃。宿主寿命为11—28天,平均寿命22.3天,中间存活时间20.5天。在腹水瘤生长过程中见大量小淋巴细胞,吞噬细胞和多形核白细胞,以及淋巴细胞与巨噬细胞包围瘤细胞的现象,这是机体的免疫反应。本瘤株对抗癌药物环磷酰胺的作用较为敏感,其平均腹水量的抑制率为84.4%;延长宿主寿命的中间存活时间为133.3%。瘤细胞形态发生明显变化,出现“晖圆细胞”,“多核瘤巨细胞”及核分裂像大大减少等现象。     

亚硝胺诱发大鼠食管癌的一些特性以及癌变的病理学及组织发生学的观察

自从Druckrey等用亚硝胺类化合物诱发多种动物的食管癌和Plessis与Burrel等证实南非特兰斯开食管癌高发地区的浆果及食物中亚硝胺的存在以后,食管癌的发生与亚硝胺的关系受到重视。为了食管癌的病因学与发病学的研究以及癌变理论的探讨,我们在用亚硝胺诱发大鼠食管癌的过程中,观察了其特性,并对癌变的组织发生学加以探讨。     

二亚硝基哌嗪(DNP)诱发大鼠鼻咽癌的癌变过程中病理学与组织发生学的观察

本实验用DNP诱发Wistar大鼠鼻咽癌,平均发癌率为85％。我们将大鼠鼻咽上皮癌变过程中出现的各种病变分为4级14种组织学类型。根据各类病变在实验不同时期出现的比例和在鼻咽各部位的分布,发现单纯增生和不典型增生、单纯化生与不典型化生等病变与实验性鼻咽癌的发生有密切关系,特别是鳞状上皮化生与鼻咽癌的关系密切。我们观察到癌变过程中一些过渡性或伴随性病变,如内翻型丘状增生、外突型丘状增生、乳头状瘤和“棘层松解”等,在以往的实验性鼻咽癌文献中还未见有描述。     

腺苷预适应对再灌注诱导心肌细胞凋亡的影响

背景:缺血再灌注损伤除导致心肌细胞坏死,还可诱发细胞凋亡,而细胞凋亡可能是梗死早期心肌细胞死亡的主要方式,也可能是心肌梗死面积扩大的原因之一.目的:观察腺苷预适应在缺血再灌注的抗心肌细胞凋亡效应,探讨凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax在其中的作用.设计:随机对照的动物实验.单位:三峡大学第一临床医学院湖北省宜昌市中心人民医院心内科.材料:选用健康雄性家兔36只,清洁级,体质量2.5～3.0 kg,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.按随机数字表法将实验动物分为3组:对照组、腺苷预适应组和腺苷A1受体拮抗剂组,每组12只.方法:实验于2005-10/2006-10在三峡大学中心实验室完成.制备离体家兔心肌缺血再灌注模型.将动物麻醉后,肝素抗凝,行Langendorff逆行灌注.对照组:缺血40 min,再灌注60 min;灌注结束后将其中6只家兔用于确定心肌梗死范围,另外6只用作心肌细胞凋亡、基因表达和心肌组织超微病理的分析.腺苷预适应组:在缺血前30 min给予腺苷10 μmol/L持续灌流,其余同对照组.腺苷A1受体拮抗剂组:缺血前45 min给予腺苷A1受体阻滞剂10 mmol/L.灌流15 min后,与腺苷预适应组采取相同措施.主要观察指标:①观察缺血再灌注过程中3组动物的心率和血压.②用氯化三苯基四氮唑确定心肌梗死范围.③采用末端标记法和DNA琼脂糖凝胶电泳检测心肌细胞凋亡指数.④原位免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:纳入的36只家兔全部进入结果分析.①心率和血压比较:在缺血再灌注过程中,心率和血压均持续下降,差异有显著性意义(P＜0.01).组间比较,差异无显著性意义(P＞0.05).②心肌梗死范围比较:对照组、腺苷预适应组和腺苷A1受体拮抗剂组缺血心肌范围比较,差异无显著性意义(P＞0.05).腺苷预适应组梗死范围小于对照组,差异有显著性意义(P＜0.01),提示腺苷预适应可缩小家兔心肌梗死范围.腺苷A1受体拮抗剂组家兔心肌梗死范围大于腺苷预适应组,小于对照组,差异均有显著性意义(P＜0.01),提示腺苷A1受体阻断剂可部分抑制腺苷的保护作用.③心肌细胞凋亡情况比较:在非缺血心肌组织未见凋亡细胞,梗死组织和梗死边缘缺血组织中可见凋亡细胞.对照组和腺苷A1受体拮抗剂组凋亡细胞多于腺苷预适应组;细胞凋亡指数高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.01).④凋亡相关蛋白表达情况比较:腺苷预适应组Bax的吸光度值低于对照组,差异有显著性意义(P＜0.01);腺苷A1受体拮抗剂组Bax吸光度值低于对照组,高于腺苷预适应组,差异均有显著性意义(P＜0.01).对照组Bcl-2/Bax 比值低于腺苷预适应组,差异有显著性意义(P＜0.01).腺苷A1受体拮抗剂组Bcl-2/Bax比值高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.01);低于腺苷预适应组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:外源性腺苷可以抑制再灌注诱导的心肌细胞凋亡,且部分由腺苷A1受体介导;凋亡相关蛋白Bax表达下调在外源性腺苷的抗凋亡中扮演重要角色.     

大鼠CREB结合蛋白RNA干扰重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建大鼠CREB结合蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP表达的沉默效应。方法设计合成4条CBP基因的siRNA序列,将筛选确定的CBP RNAi有效靶序列与pFU-GW-iRNA载体连接产生CBP shRNA慢病毒表达载体,转化、PCR筛选阳性克隆及测序鉴定。脂质体2000将CBP shRNA慢病毒载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,完成慢病毒颗粒包装及滴度测定。包装产生的重组慢病毒感染大鼠VSMCs,实时定量RT-PCR检测CBP mRNA的表达,并与未转染及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞进行比较。结果 PCR扩增和测序结果证实,成功构建大鼠CBP shRNA慢病毒载体。经包装产生的慢病毒滴度为2×10~9 TU/ml,与未转染慢病毒及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞比较,CBP shRNA慢病毒转染可使VSMCs的CBP mRNA分别下降88.5%和92.7%。结论成功构建CBP基因RNAi慢病毒表达载体,对VSMCs的CBP表达具有良好沉默作用,为后期基因治疗血管增殖性疾病奠定基础。