从赤魟组织中分离到的福安肽的抗血管生成作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安肽(FAT)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成和小鼠肝癌组织血管生成的影响。方法用CAM法检测FAT对CAM血管生成和CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成的影响;用免疫组化法检查FAT对小鼠肝癌组织内微血管密度(MVD)的影响。结果FAT显著抑制CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×3时,其抑制率分别为30.8%,50.1%,64.0%;CNE-2Z细胞明显诱导CAM血管生成,当CNE-2Z细胞的接种量为1.9×106细胞/胚时,其血管生成诱导率为30.1%;FAT明显抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×4时,其抑制率分别为35.8%,43.1%,51.3%。FAT明显降低小鼠肝癌组织的MVD,FAT平均微血管数为(8.2±1.3)与对照组的(21.3±2.8)相比,差异显著(P<0.05)。结论FAT有显著的抗血管生成作用,这可能是其抑制小鼠肿瘤生长的重要原因。     

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。     

表皮生长因子受体检测方法

表皮生长因子受体(EGFR)是一种受体型酪氨酸激酶,在多种肿瘤中都有过表达,并与肿瘤的发生、浸润、转移、预后及患者生存期密切相关.多种方法可用于检测组织、血液、细胞中EGFR蛋白表达及其酪氨酸激酶活性,EGFR的检测将有助于肿瘤的靶向治疗.     

重组福安泰-03融合蛋白表达条件的优化及其生物学活性检测

福安泰-03(FAT-03)是从赤魟组织中分离得到,具有强抗血管生成活性的蛋白。本研究通过DNA重组技术获得了重组福安泰-03(rFAT-03)融合蛋白,运用响应面试验设计法优化表达条件,采用GST亲和柱分离纯化表达蛋白,比较分析不同培养时间、诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对可溶性融合蛋白表达量的影响。结果表明,当培养时间为6.13h、诱导温度为19.71℃、诱导剂(IPTG)浓度为0.36mmol/L、诱导时间为13.60h条件下可获得较好的表达效果,可溶性目的蛋白GST-rFAT-03的得率为7.57mg/L。对获得的rFAT-03生物活性检测显示,rFAT-03能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,且其效果与剂量相关。为后续对该蛋白的分离纯化和生物学功能研究奠定了基础。     

血管生成促进剂SDY-08的促组织修复作用

目的 研究血管生成促进剂SDY-08对组织修复的影响. 方法 MTT法检查SDY-08对ECV-304细胞生长的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检查SDY-08对CAM血管生成的影响,小鼠背部创伤模型检查SDY-08对组织修复的影响;免疫组化法和Western blotting检查SDY-08对血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bcl-2和Bax表达的影响. 结果 SDY-08(终浓度80 μg/m1)作用ECV-304细胞12,24,36 h,其生长促进率为28.1%,115.6%、81.4%;SDY-08(浓度1.6 mg/ml)对CAM血管生成的诱导率为72.1%;SDY-08(浓度0.5 mg/ml)提前2 d使小鼠创面愈合;SDY-08上调创伤组织血管内皮细胞VEGF的表达,上调ECV-304细胞VEGF和抑凋亡基因Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax的表达. 结论 SDY-08有明显的促血管生成和促组织修复作用,与其上调VEGF、Bcl-2的表达及下调Bax的表达密切相关.     

中国枪乌贼墨汁提取物的抗肿瘤作用

目的:研究中国枪乌贼墨汁提取物(以下简称墨汁提取物)的抗肿瘤作用。方法:采用超声波处理、低温离心、过滤等方法制备墨汁提取物;台盼蓝染色法检测墨汁提取物对体外培养的人髓性白血病细胞(HL-60)、人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和人子宫颈癌细胞(HeLa)生长的抑制作用;采用体内肿瘤实验技术研究墨汁提取物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响;用常规方法进行墨汁提取物的急性毒性试验。结果:提取物对HL-60,CNE-2Z和HeLa细胞都有明显的抑制效果,3种细胞中以HL-60细胞最敏感;墨汁提取物腹腔注射1.2g·kg-1和灌胃2.4g·kg-1共15d对S180的抑制率分别为70.8%和69.2%,对H22的抑制率分别为71.0%和58.0%;LD50测不出,最大耐受量>48g·kg-1。结论:中国枪乌贼墨汁提取物在体内外都有显著的抗肿瘤作用,且无明显的急性毒性。     

从赤组织中分离到的福安肽的抗肿瘤活性的初步研究

目的研究从赤组织中分离到的福安肽(Fuantai,FAT)的抗肿瘤活性及对促血管生成因子表达的影响。方法MTT法检测FAT对体外培养的人癌细胞生长的影响;小鼠移植性肝癌(H22)模型用于检查FAT对肿瘤生长的影响;免疫组化法检查福安肽对癌组织促血管生成因子表达的影响。结果FAT对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响;FAT无论腹腔注射还是灌胃都显著抑制小鼠移植性肝癌的生长,且对小鼠体重增长无明显影响。当FAT的用量为50.0 mg/(kg.d)(ip或ig)共21 d对H22的抑制率分别为67.5%和84.0%。免疫组化检测结果显示,FAT明显下调小鼠肝癌组织血管内皮细胞生长因子,碱性成纤维细胞因子和血小板衍生生长因子的表达。结论FAT的抗肿瘤活性可能与其抑制肿瘤血管生成有关。     

福安泰-03对肿瘤血管生成的抑制作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安泰-03(Fuan-tai-03,FAT-03)对肿瘤血管生成的影响。方法鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测FAT-03对人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检查FAT-03对裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(MVD)和血管生成因子表达的影响。结果FAT-03抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为20、40、80、160μg/胚/d×5时,其抑制率分别为22.3%、34.3%、43.3%、46.2%。FAT-03降低小鼠Lewis肺癌组织的MVD,FAT-03组平均微血管数为9.1±1.5(对照组为18.2±3.2,P<0.05)。免疫组化检测结果显示,FAT-03明显下调小鼠Lewis肺癌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)的表达。结论FAT-03有抗肿瘤血管生成作用,其作用与它的下调VEGF、bFGF和PDGF的表达密切相关。     

土贝母苷甲对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的：探讨土贝母苷甲（下称苷甲）对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法：PGCL3细胞经不同剂量苷甲处理24、48、72h，MTF法检测其对PGCL3细胞生长的影响；分别用重组基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Transwell小室趋化运动模型研究苷甲对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响；用酶谱法检测苷甲对PGCL3细胞分泌Ⅳ型胶原酶（MMP-2）能力及活性的影响。结果：苷甲明显抑制PGCL3细胞的生长，且呈剂量依赖关系，作用24、48、72h的IC。分别为15．70、14．20和13．32μmol·L^-1。苷甲1．25、2．50、5．00μmol·L^-1处理PGCL3细胞24h，对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为28．7％、41．0％、57．5％；对PGCL3细胞迁移能力的抑制率分别为21．6％、35．2％、53．7％。苷甲降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性，降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率，且呈一定的剂量依赖关系。结论：苷甲抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力，其对PGCL3细胞的侵袭和粘附的影响可能与其降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性，降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率有关。