大小承气汤制作大鼠脾虚肝癌模型的比较

目的 探索大小承气汤为基础的多因素大鼠脾虚模型和脾虚肝癌模型的制作方法和成模差别。方法 采用苦寒泻下、寒湿环境、劳累、隔天禁食的方法制作脾虚大鼠模型,其中苦寒泻下因素采用大承气汤和小承气汤分别干预;Walker256大鼠肝癌细胞经裸鼠皮下增殖后移植入大鼠肝脏,制作肝癌模型。大鼠随机分为正常组、空白肝癌组、大承气汤组、小承气汤组,每组15只3周龄Wistar雄性大鼠,脾虚因素干预30天后恢复7天制作肝癌模型并观察35天。实验过程中观察动物脾虚程度、体重变化、成瘤情况、生存时间等。结果 大、小承气汤组动物在脾虚造模过程中相对于对照组,体重增长受到明显抑制P<0.01,脾虚造模前20天大承气汤组动物体重均高于小承气汤组,P<0.05,之后二者无差别P>0.05。大、小承气汤组动物平均脾虚积分高于空白肝癌组,小承气汤组最高,P<0.01。肝癌模型总成瘤率91.1%,空白肝癌组为80%,大、小承气汤组均为93.3%。小承气汤组大鼠平均生存天数小于肝癌组和大承气汤组,P<0.01和0.05。生存分析提示脾虚积分高的肝癌模型和小承气汤组肝癌模型的生存能力明显下降,P<0.05。结论 小承气汤在多因素制作脾虚模型过程中致脾虚作用比大承气汤强,脾虚明显是肝癌模型预后不良的重要因素。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1 mRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达,探讨oatp2b1在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3 h,双号日期令大鼠在冷水（10±1） ℃中游泳7 min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT-PCR、Western Blot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1 mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2b1 mRNA含量高于正常组及劳倦组（P<0.01, P<0.05）;正常组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>大肠>小肠>肾>胃;劳倦组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>大肠>脾>肾>胃>小肠;高脂组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>小肠>肾>大肠>胃。肺组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为劳倦组>正常组>高脂组（P>0.05）。脾组织oatp2b1蛋白表达由高至低为高脂组>正常组>劳倦组（P>0.05）;肾组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>劳倦组>高脂组（P>0.05）;肝组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>高脂组>劳倦组（P>0.05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2b1蛋白表达量极低。正常组oatp2b1蛋白表达由高至低为肺>脾>肝,肾>胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2b1蛋白表达由高至低为：肺>脾>肾>肝>胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾>肺>肾>肝>胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P>0.05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2b1是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对肝移植术后肝动脉血栓形成的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对肝移植术后凝血机制的影响,观察其对肝动脉血栓形成(hepatic artery thrombosis,HAT)的预防作用.方法 将符合入选标准的60例行肝移植手术的患者采用随机数字表法分为2组,每组30例.治疗组于术后血液动力学稳定后静脉滴注丹参酮ⅡA磺酸钠,对照组采用西医常规治疗方案.2组均治疗7 d.采用CA1500血凝仪检测患者凝血功能,采用TEG5000凝血分析仪行血栓弹力图参数(thrombelastography,TEG)分析,采用彩色多普勒超声诊断仪监测肝动脉阻力指数(hepatic artery resistance index,RI),观察并记录患者并发症及不良反应.结果 治疗组术后TEG反应时间[(6.35±1.59)min比(5.21±1.37)min,t=2.453]较对照组延长、最大振幅[(58.07±5.42)mm比(61.67±5.63)mm,t=-2.532]较对照组下降、RI[(0.73±0.11)比(0.62±0.10),t=-2.948]高于对照组(P<0.01).对照组术后发生出凝血相关并发症2例,治疗组未发生.结论 丹参酮ⅡA磺酸钠可影响肝移植患者术后的凝血功能,预防HAT.     

高效液相色谱法测定大鼠组织样品中马兜铃酸A的含量

目的建立用高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠脾虚模型组织与血浆样品中马兜铃酸A含量的方法。方法色谱条件为HypersilODS2柱（4．6mm×250mm,5μm）,柱温30℃,流动相为甲醇：乙腈：水（0．6％冰醋酸,pH=3．60）（30：30：40）,流速为1ml／min,检测波长为250nm,20μl进样。结果空白血浆中马兜铃酸A在0．05～25μg／ml范围内与峰面积线性关系良好（Y=57672X-10065,R^2=0．9994）,提取回收率为83．46％～94．13％,方法回收率为99．67％～106．43％。低、中、高3个浓度的日内精密度RSD分别为6．28％、3．36％、1．88％,日间精密度RSD分别为9．67％、4．27％、4．56％。血浆中马兜铃酸A的最低检测浓度为0．05μg／ml,组织中最低检测浓度为0．31ng／g。结论建立的HPLC法准确、稳定、重复性好、灵敏度高,可应用于大鼠脾虚模型组织和血浆样品中马兜铃酸A的含量测定。     

有机阴离子转运肽oatp4a1与脾主运化本质的关系

目的:通过观察脾虚状下大鼠oatp4a1蛋白表达来探讨oatp4a1与脾主运化本质的关系.方法:36只♂大鼠随机分为空白组、空白AA(AA为马兜铃酸Ⅰ)组、脾虚组、脾虚AA组、高脂饮食组、高脂饮食AA组6组.高脂饮食及利血平造模21 d,造模成功后给予相应组别大鼠AA灌胃3d,末次给AA后1h内采集标本,免疫组化方法检...     

和解方颗粒剂对大鼠的毒性实验研究

目的 观察和解方颗粒剂对大鼠的长期毒性反应,评价该药物临床应用的安全性.方法 将80只Wistar大鼠随机分为和解方高、中、低剂量组和对照组,每组20只,分别给予50、25、12.5g/kg和解方颗粒剂和等容积蒸馏水,给药体积为20ml/(kg·d),每日2次灌服,连续灌服12周.期间测量大鼠体重,观察一般状况.用药1...     

湿证患者外周血TCRVβ亚家族表达及意义探讨

目的通过检测湿证患者和健康人外周血T淋巴细胞受体β链V区(TCRVβ)亚家族的表达,从免疫识别的角度探讨湿邪致病"蒙蔽性"的特点。方法湿证患者组2例,正常组1例。对湿证组采用化湿治疗(藿朴夏苓汤加减)半年,观察湿证组治疗前与治疗取效后患者症状、体征和TCRVβ亚家族表达水平变化。结果 2例湿证患者治疗前较正常对照组TCRVβ表达均低下的亚家族是TCRVβ4、TCRVβ5.1、TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ21.1、TCRVβ21.3、TCRVβ23;2例治疗前较正常对照组TCRVβ表达均偏高的亚家族是TCRVβ3、TCRVβ16、TCRVβ18、TCRVβ24。2例治疗前TCRVβ表达均偏低,经治疗后表达均升高的亚家族是TCRVβ4、TCRVβ14、TCRVβ21.3、TCRVβ23;2例治疗前TCRVβ表达均偏高,经治疗后表达均降低的亚家族是TCRVβ3和TCRVβ18。结论湿证患者TCR Vβ谱系表达紊乱,经化湿治疗后,TCRVβ谱系不同程度上得以调节,提示TCR Vβ的表达异常可能是湿邪的"蒙蔽性"所致。     

健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠TCRVβCDR3基因谱系变化的影响

目的观察健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠模型的抗癌作用与T细胞受体β链超变区第3互补决定区(the third complementary-determining region of the variable region of T cell receptorβ-chain,TCRVβCDR3)基因谱系的关系。方法将大鼠按随机数字法分为空白对照组(正常组,灌胃生理盐水,每日1次),脾虚模型组(脾虚组),肝癌模型组(肝癌组),脾虚肝癌模型组(脾虚肝癌组),健脾解毒方(中药)高、中、低剂量(75.00、37.50、18.75 g/kg灌胃,每日1次)组和胸腺五肽(5 mg/kg,肌肉注射,每周2次)组(西药组),每组8只。采用苦寒泻下法制备脾虚模型,原位移植法制备肝癌模型。基因扫描检测大鼠胸腺、肝、肝癌20个TCRVβCDR3亚家族基因片段谱系。结果中药中、高剂量健脾解毒方可延缓肝癌的体积增长(P0.05),且其肝指数和胸腺指数与正常组相当(P0.05)。正常胸腺组织和肝组织TCRVβCDR3亚家族数量(20、19)、基因片段数量(220、113)、谱系准高斯分布比例(100%、42.1%)、片段荧光峰面积(6 539±2 325、1 238±439)在各组中均处于最高水平。中药中、高剂量组胸腺和肝组织TCRVβCDR3表达接近正常组,西药组、脾虚组和肝癌组居中,脾虚肝癌组最差。西药组肝癌组织TCRVβCDR3表达最佳。结论健脾解毒方对肝癌细胞增殖的抑制作用可能与其增强TCRVβCDR3基因谱系表达有关。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2blmRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2bl基因和蛋白表达,探讨oatp2bl在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3h,双号日期令大鼠在冷水（10±1）℃中游泳7min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT．PCR、WesternBlot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2blmRNA含量高于正常组及劳倦组（P〈0．01,P〈0．05）;正常组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉大肠〉小肠〉肾〉胃;劳倦组oatp2blmR-NA表达量由高至低为肝〉肺〉大肠〉脾〉肾〉胃〉小肠;高脂组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉小肠〉肾〉大肠〉胃。肺组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为劳倦组〉正常组〉高脂组（P〉0．05）。脾组织oatp2bl蛋白表达由高至低为高脂组〉正常组〉劳倦组（P〉0．05）;肾组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉劳倦组〉高脂组（P〉0．05）;肝组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉高脂组〉劳倦组（P〉0．05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2bl蛋白表达量极低。正常组oatp2bl蛋白表达由高至低为肺〉脾〉肝,肾〉胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2bl蛋白表达由高至低为：肺〉脾〉肾〉肝〉胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾〉肺〉肾〉肝〉胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2bl是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

健脾解毒中药延长肝癌裸鼠带瘤生存时间及对PTEN/FAK的影响

目的探讨健脾解毒方提高裸鼠人肝癌模型的"带瘤生存"作用和对PTEN、FAK的影响。方法 40只裸鼠随机分为4组,每组10只,其中3组制作裸鼠人肝癌模型,分别给予健脾解毒方、生理盐水、替加氟(FT-207)灌胃,每天1次,持续71 d;第4组不造模作空白对照,每天给予生理盐水。实验过程中记录裸鼠生存时间和体质量,免疫组化SP法检测各组肝组织和癌组织PTEN、黏附斑激酶(FAK)的表达,IPP6.0分析平均光密度。结果生存分析表明健脾解毒方组裸鼠累积生存率显著高于其余各组(P<0.05或0.01);健脾解毒方组体质量减轻率显著低于其余各组(P<0.05或0.01);累积生存率和体质量减轻率FT-207组最差(P均<0.05);各组肿瘤体积比较无显著性差异(P均>0.05);PTEN在肝组织中的表达水平(平均光密度)显著高于癌组织(P<0.01);肝癌模型肝组织中PTEN表达水平明显低于空白组(P<0.05或0.01);FT-207组肝组织和癌组织中PTEN表达水平明显低于健脾解毒方组和生理盐水组(P<0.05或0.01);FAK在各组肝组织中的表达水平显著高于癌组织(P<0.01);健脾解毒方组肝组织中FAK表达水平显著高于其余各组(P均<0.01),癌组织中FAK表达水平显著低于其余各组(P均<0.01)。结论健脾解毒方能延长荷瘤鼠的带瘤生存时间,延缓体质量下降,其作用可能与健脾解毒方能良性调节PTEN、FAK的表达有关。