Ⅲ型中国株HCV E2/NS1基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建

Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建吴朝栋陶其敏杜绍财常锦红（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）Ｅ２／ＮＳ１基因被认为是丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组的结构区基因，具有较大的变异性［１］，而且在不同的...     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶＮＳ３区蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良好的反应性，与ＨＣＶ核心区多肽及乙型肝炎病毒表面抗原和ｅ抗原均无反应。抑制实验表明这４株抗体分别针对ＮＳ３抗原分子上的２个不同的抗原决定簇。     

Murine antibody against E2 can capture hepatitis C virus in vitro

目的　寻找可能存在的抗丙型肝炎病毒 (HCV)感染的中和抗体。方法　构建两个分别含HCVE1和E2抗原基因的真核表达载体 ,用瞬时表达法检测其在哺乳动物细胞中的表达。将构建的载体连同IL 2基因一起经皮下给BalB/c小鼠进行注射 ,然后用ELISA法检测特异性抗体产生情况。最后通过研究抗体和病毒间的相互作用分析基因免疫诱导产生的抗血清在体外与HCV的相互作用情况。结果　经过基因免疫的小鼠分别产生了E 1和E2抗体。其中 ,用含E2基因的质粒载体免疫的小鼠所产生的E2抗血清不仅可以免疫沉淀来源血清中的HCV病毒颗粒 ,而且可以和与来源株非相关的HCV病毒颗粒相互作用。结论　我们的研究表明基因免疫诱导小鼠产生的E2抗体可以和HCV病毒颗粒发生交叉反应 ,这使我们看到了诱导产生具有广泛针对性的E2抗体的希望。     

丙型肝炎研究进展 丙型肝炎病毒分子变异及其临床意义

从1989年Choo等首次克隆丙型肝炎病毒(HCV)cDNA成功以来,世界已对数十株HCV进行了克隆和测序,发现HCV变异较大存在多种亚型,HCV变异对肝炎发病机制、病原学诊断、疫苗研制及疾病治疗诸方面均有重要影响。1993年5月10-14日在日本东京召开第八届国际病毒性肝炎暨肝病研讨会,会上举行了"HCV分子变异及共临床意义”的专题研讨,这足以说明研究HCV变异的重要性,现就这次专题研讨内容综述如下:     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)E2和乙型肝炎病毒(HBV)preS融合蛋白的真核表达载体.方法:用PCR方法扩增HBV preS和HCV E2蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体pcDNA3中,用脂质体转染试剂将其转入COS7细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白.结果:E2-preS融合蛋白基因包括了全长的HBV preS和HCV E2蛋白基因,嵌合基因长度约1.6 kb.表达载体在COS7细胞表达出了E2-preS融合蛋白.结论:构建的E2-preS融合蛋白表达载体能在哺乳动物细胞中表达融合蛋白,为获得真核表达的融合蛋白及研究此蛋白的免疫原性打下基础.     

丙型肝炎病毒NS3蛋白真核表达载体的构建及其基因免疫研究

基因免疫是指将编码特异抗原的目的基因重组表达载体直接接种到宿主组织内,在体内表达基因产物,进而激发宿主产生特异性免疫反应。自１９９０年首次报道发现基因免疫以来,这一新的免疫技术已经在基础免疫学研究和疫苗研制等许多领域得到广泛应用。对许多疾病（如流感）...     

丙型肝炎诊断试剂的研究

本文用分子生物学方法根据中国人HCV基因特点进行多肽合成,研究丙型肝炎C区、E区酶标试剂的临床应用以及与抗C 100-3试剂的比较,并以 RT双 PCR的方法建立了HCV RNA的检测试剂及临床应用。结果发现抗-CP试剂敏感性、特异性均优于抗C100-3,从临床检测结果看,在自然人群中感染率抗-CP为2.8％,抗C100-3为2.1％,特别在输血后肝炎中,抗 CP阳性率高达 71.7％～75.9％。因此提出对HCV的诊断确立与愈后判断各类试剂有各自的作用,不能只根据某一试剂的某一次结果而简单地否定 HCV感染。HCV RNA测定,建立了5’末端非编码区及非结构区(NS 1),采用双PCR观察结果抗-CP阳性者绝大多数为RNA阳性,并提示将有助于抗病毒药物疗效的观察指标。     

82例 HCV RNA 阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

~3H乙肝病毒DNA探针在分子杂交检测血清中乙肝病毒DNA的临床应用

自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制