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EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡及基因和蛋白谱的变化研究 总被引：1，自引：1，他引：0
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的变化规律,以及EGCG作用后SMMC-7721细胞基因及蛋白谱的变化。方法通过MTT法初步筛选EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用浓度,流式细胞Annexin V-FITC/PI法检测EGCG对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用和早期凋亡的诱导效应;运用Af-fymetrix U133A2.0人基因组表达谱芯片检测EGCG作用后SMMC-7721细胞基因表达谱的变化,以及SELDI检测EGCG作用后SMMC-7721细胞蛋白图谱的变化,Real-time PCR验证3个表达差异显著基因。结果EGCG诱导SMMC-7721细胞早期凋亡的最佳作用剂量是218.2μmol·L-1,早期凋亡的作用呈剂量依赖性;SMMC-7721细胞经EGCG作用后,表达差异两倍以上的基因共196个,包括上调基因132个和下调基因64个;EGCG作用后表达差异两倍以上的蛋白共43个,包括23个表达上调蛋白,20个表达下调蛋白。Real-time PCR验证DIO2、Id3基因表达与芯片结果一致。结论EGCG有明显的诱导肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的作用,其诱导凋亡作用涉及多基因和多蛋白变化。 相似文献
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NAP-2(73)的生物信息学分析及其多克隆抗体制备 总被引：1，自引：0，他引：1
目的生物信息学分析NAP-2(73),以及制备其多克隆抗体。方法生物信息学分析预测出NAP-2(73)蛋白质的等电点、亲水性、抗原性等理化特性,以这些分析预测为依据,设计出一段抗原多肽,免疫家兔得到多克隆抗体,并用ELISA、West-ernblot等方法鉴定其滴度和特异性。结果对NAP-2(73)的功能性位点、抗原性和亲水性等进行了预测分析,成功制备了多克隆抗体,其血清中抗NAP-2(73)抗体效价为1:729000,并以此抗体证实了NAP-2(73)在肝癌细胞和组织中的表达。结论利用生物信息学,高效价和特异性强的抗NAP-2(73)抗体被成功制备,为进一步研究奠定了基础。 相似文献
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目的利用SELDI技术筛选肺结核患者血清差异表达蛋白并与同类研究的结果进行比较。方法采用SELDI-TOF-MS筛选30例肺结核患者和30例正常对照血清的差异表达蛋白,建立诊断模型;对105例样本进行盲法验证;与同类研究比较寻找共同差异表达蛋白。结果 SELDI筛选出86个差异有统计学意义的蛋白(P﹤0.05)。从中筛选出了6个最具有诊断价值的潜在标志蛋白建立诊断模型,该诊断模型的ROC曲线下面积为0.983;盲法验证ROC曲线下面积为0.837。与同类研究比较发现,11个差异有统计学意义(P﹤0.001)的差异表达蛋白在本研究中重现。结论肺结核病人与对照的血清蛋白图谱存在差异,两个独立实验共同得到的11个差异表达蛋白与结核病的关系值得深入研究。 相似文献
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目的 建立一种快速、相对定量检测乙酰化蛋白方法,并初步应用其检测药物作用后Jurkat细胞乙酰化总蛋白水平.方法 用不同浓度的曲古菌素A(TSA)诱导Jurkat细胞蛋白高乙酰化后,利用抗乙酰化赖氨酸抗体亲和层析柱富集纯化乙酰化总蛋白,经酸洗脱后固定于酶标板,ELISA法检测乙酰化蛋白相对总量,并用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF)分析验证其成分;同法检测不同浓度的没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A三种药物作用Jurkat细胞后乙酰化总蛋白水平的变化,筛查诱导Jurkat细胞蛋白乙酰化药物.结果 1μmol/L TSA作用于4×105Jurkat细胞24 h,乙酰化总蛋白相对水平最高.MALDI-TOF/TOF分析显示,TSA诱导Jurkat细胞产生的乙酰化蛋白共有22种,其中15种为乙酰化组蛋白.没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A作用Jurkat细胞后所导致的乙酰化程度不同,以1μmol/L浓度TSA为阳性对照组,无药物为空白对照组,35.09 μmol/L和17.54 μmol/L大黄素处理的Jurkat细胞乙酰化蛋白相对水平分别为4.3％和14.2％;1.47 μmol/L和2.94 μmol/L没食子酸处理组乙酰化蛋白相对水平分别为28.7％和11.5％;152.91 μmol/L和30.58 μmoL/L单乙酰化大黄素组分别为22.0％和3.6％;其中1.47 μmol/L没食子酸所诱导的乙酰化蛋白水平最高.结论 初步建立了活细胞基础上纯化富集并检测乙酰化总蛋白水平的方法,该法可快速、简便的筛选以组蛋白去乙酰化酶为靶点的抗癌药物. 相似文献
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