星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究

目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用。方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件。结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的最优条件是：凝血酶浓度69.32 U·mL^-1、戊二醛浓度0.18%、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55 %。结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好。     

牡蛎壳粉用于板蓝根水提液的吸附澄清研究

板蓝根(Indigowoad Root),为十字花科植物菘蓝(IsatisindigoticaFort.)的根。目前板蓝根制剂多采用水煎醇沉,上清液回收乙醇后再缩膏干燥的方法。该法存在乙醇用量大,生产周期长,浸膏得率和其主要活性成分得率低,颗粒的色香味俱差等问题[1,2],近年来出现的吸附澄清技术因其使用     

两种反胶束体系的水蛭素萃取效果比较

 目的 比较溴化十六烷基三甲铵（CTAB）-正丁醇-正辛烷反胶束体系及丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠（AOT）-异辛烷反胶束体系的水蛭素萃取效果。方法 以抗凝血酶活性单位（ATU）的萃取率为指标,用凝血酶滴定改进法测定萃取物的活性,正交实验对盐浓度、pH、搅拌时间、表面活性剂浓度等因素进行考察,优化CTAB-正丁醇-正辛烷体系及AOT-异辛烷体系的水蛭素对照品溶液反胶束萃取工艺,并进行水蛭素粗提液的分离纯化实验。结果 水蛭素CTAB反胶束体系最佳萃取工艺为：萃取pH 10.0,反萃取pH 2.0,萃取液NaBr浓度30 mmol·L-1、CTAB浓度85 mmol·L-1,反萃取液NaBr浓度32 mmol·L-1,萃取及反萃取均为30 ℃,萃取及反萃取均搅拌5 min;AOT反胶束体系最佳萃取工艺为：萃取pH 2.0,反萃取pH 9.0,萃取液KCl浓度26.5 mmol·L-1、AOT浓度30 mmol·L-1,反萃取液KCl浓度27.5 mmol·L-1,萃取及反萃取均为30 ℃,萃取搅拌5 min,反萃取搅拌9 min。ATU回收率前者为82.95%,后者为85.53%;水蛭素粗提液分离纯化实验两者的ATU回收率分别为80.70%和82.15%、比活性分别为2 389.54及2 459.98 ATU·mg-1。结论 两种反胶束体系的水蛭素萃取效果都较好,而后者又稍优于前者。     

双水相萃取-凝胶色谱联用法提取菲牛蛭中的水蛭素

 目的 建立水蛭素的双水相萃取-凝胶色谱联用提取法。方法 以抗凝血酶活性单位（ATU）为指标,在优化双水相萃取工艺条件基础上,建立以广西菲牛蛭消化液为原料的聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素新工艺。结果 在所考察的实验范围内,水蛭素对照品双水相萃取最佳工艺条件是：PEG 2000、(NH₄)₂SO₄、NaCl质量分数依次为22%、20%、0.04%,萃取液温度35 ℃、pH 6.0;萃取物经凝胶色谱除杂以后,得到纯度较高的产品。实验建立的提取工艺处理水蛭素对照品ATU回收率达到81.92%,粗提液分离纯化及小规模工艺放大实验ATU回收率分别为80.34%、80.36%。所获产品比活性达到3 210.27 ATU·mg^-1、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果与水蛭素对照品相同。结论 双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素效果较好。
     

黄鳍马面魨肌肉主要营养成分分析与评价

目的分析测定南海海区黄鳍马面魨的肌肉营养成分,对其营养价值进行综合评价。方法采用现时的国家标准方法测定粗蛋白质、粗脂肪、灰分、氨基酸和脂肪酸含量。结果黄鳍马面魨肌肉鲜肉的粗蛋白质含量(17.01±0.12)%;粗脂肪含量(0.67±0.23)%;水分含量(79.81±0.36)%;灰分含量(1.88±0.27)%;18种氨基酸总量为67.70%,其中8种必需氨基酸含量占氨基酸总量的44.43%,必需氨基酸与非必需氨基酸比值79.96%,氨基酸得分(AAS)2435;粗脂肪中含28种脂肪酸,以油酸的含量最高,二十碳五烯酸EPA与二十二碳六烯酸DHA之和占总脂肪酸含量的17.03%;鱼肉富含Ca、Fe、Zn等必需金属元素,有害元素含量均在允许范围之内。结论黄鳍马面魨肌肉蛋白质含量较高,必需氨基酸含量较丰富,粗脂肪含量较低,是营养价值较高的鱼类。     

酪蛋白抗凝血肽的制备及其体外抗凝血、溶栓作用研究

目的研究抗凝血肽的制备、分离方法及其体外抗凝血、溶栓效果。方法用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对酪蛋白进行4酶混合水解制备抗凝血肽,以固定化凝血酶对抗凝血肽进行萃取,用新西兰兔进行体外抗凝血、溶栓实验。结果实验确定的抗凝血肽制备条件为酪蛋白质量浓度15%,水解每克酪蛋白的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶用量分别为1 500、2 400、1 000、1 250 U,水解温度50℃,pH 7.0,水解时间4 h。固定化凝血酶萃取抗凝血肽的初始浓度6 ATU/mL,萃取温度30℃,pH 5.0,萃取时间30 min。反萃取温度30℃,pH 7.6,反萃取时间40 min。抗凝血肽经高效体积排阻色谱分析,主要成分分子大小与马尿酰-组氨酰-亮氨酸相当。体外抗凝血时间超72 h,溶栓时间24 h。结论酪蛋白抗凝血肽主要成分为3肽,体外抗凝血及溶栓实验效果良好。     

以D2EHPA为流动载体的乳状液膜萃取菲牛蛭中的水蛭素实验研究

目的:研究以菲牛蛭为原料,二-(2-乙基已基)磷酸(D2EHPA)作流动载体,脱水山梨醇脂肪酸酯(Span 80)为乳化剂,辛烷与D2EHPA混合构成膜溶液,稀HCl溶液作内水相的水蛭素乳状液膜体系萃取。方法:用正交试验优化膜相、内水相体积比(MIPVR),内、外水相的pH,流动载体浓度等水蛭素对照品萃取条件,然后用水蛭素粗提液进行纯化实验。结果:萃取的最优条件为:MIPVR 10∶3,内水相pH 2.6,外水相pH 3.4,流动载体质量分数2%;当水蛭素初始浓度为1抗凝血酶活力单位(ATU).mL-1时,对照品ATU回收率为83.06%,粗提液达到82.99%,样品比活力为3 289.48 ATU.mg-1,不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果表明纯度与对照品相当。结论:乳状液膜体系萃取水蛭素工艺较简单,实验样品纯度及ATU回收率均较高。     

酪蛋白抗凝血肽的分离纯化及其抗凝血活性测定

本实验通过比较混合酶解和复合酶解酪蛋白的水解液活性,获得抗凝血活性最高的组合,为“菠萝蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶”复合酶解酪蛋白组。然后选择截留分子量为1 kD和3 kD的超滤膜对抗凝血活性最高的组合进行超滤,实验结果表明截留分子量为1 kD的超滤浓缩液抗凝血活性最高。对超滤浓缩液进行抗凝血实验,实验结果表明,兔血︰1 kD浓缩液（V︰V）= 6︰4和兔血︰1kD浓缩液（V︰V）=1:1组合都是48 h后血液没有凝固;体外溶栓实验表明,置于浓缩液中的血栓条24 h后红色褪去,证明1 kD超滤浓缩液具有较好的溶栓和抗凝血作用。对1 kD超滤浓缩液进行脱盐,然后采用凝胶色谱法进行分子量分布测定,由数据分析可知分子量主要集中在500～180、1 000～500、2 000～1 000范围。     

丝素固定化凝血酶的工艺研究

目的:考察家蚕丝素对凝血酶的固定化作用。方法:以家蚕丝素为载体,戊二醛为交联剂制备固定化凝血酶。以固定化凝血酶的活力回收率（AR）为考察指标,采用正交试验确定丝素固定化凝血酶的最佳工艺条件。结果:丝素固定化凝血酶的最佳工艺条件为:固定时间为6 h,加酶量为2 400 NIH·g^-1载体,温度为25℃,p H为7.6。固定化凝血酶的回收率（AR）达67.22%。结论:丝素对凝血酶有良好的固定化作用。     

长牡蛎肉三酶水解工艺优化及水解物抗疲劳实验

 目的 优选长牡蛎肉的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶三酶复合水解工艺,通过动物实验研究其水解物的抗疲劳效果。方法 以水解度为考察指标,采用正交实验优选长牡蛎肉三酶复合水解的最佳工艺;水解物用昆明种小鼠试验,观察负重游泳时间、耐缺氧能力,测定抗疲劳相关生化指标,根据实验结果判断抗疲劳效果。结果 影响长牡蛎肉水解效果的主要因素是酶用量(P<0.05;中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶最佳条件分别为：pH 7.0、6.5、7.0;温度55、55、50 ℃;料水比1∶4、1∶4、1∶8;酶用量4 000、4 000、12 000 U·g-1;时间3、3、5 h。不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳结果表明,水解物主要成分相对分子质量(M_r300～1 000。与对照组相比,长牡蛎肉水解物高剂量组小鼠耐缺氧能力明显升高(P<0.01、运动后血乳酸及血清尿素氮含量明显降低(P<0.01、肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD活力明显升高(P<0.01,中、高剂量组小鼠肝糖原含量明显升高(P<0.01、负重游泳时间明显延长(P<0.01、红细胞(HbSOD活力明显升高(P<0.01。结论 长牡蛎肉三酶复合水解物经动物实验证明具有较好的抗疲劳效果。