利用不同DNA源进行基因多态性研究的可行性分析

探讨不同ＤＮＡ源作基因多态性分析的优缺点,及以血凝块裂解液直接进行ＰＣＲ扩增的可行性 和可靠性。方法：从口腔粘膜细胞、组织切片提取ＤＮＡ,并将临床生化分析遗弃的血凝块制备成裂解液和纯化 ＤＮＡ,取各自样本分别进行ＰＣＲ扩增,并进一步对血凝块纯化ＤＮＡ和血凝块裂解液所作的ＰＣＲ扩增作对照研究。 结果：本研究使用的不同ＤＮＡ源所作的ＰＣＲ扩增均获得满意结果,以血凝块裂解液进行的ＧＳＴＭ１,ＧＳＴＴ１和 ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性分析均获得成功,其结果与纯化ＤＮＡ进行分析观察到的结果完全一致。结论：同组织细胞纯 化的ＤＮＡ一样,血凝块是理想的ＤＮＡ源,用血凝块裂解液直接进行基因多态性分析,方法简明,结果可靠。     

食管癌患者O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性研究

目的　检测中国食管癌高发区居民和高加索居民AGT     

定点突变法确定人体CYP2A6 和 CYP2A13香豆素 代谢的关键氨基酸

  【目的】 通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基, 提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据&#65377; 【方法】 运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6 和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析&#65377; 【结果】 与野生型CYP2A6相比较,其Ile300 → Phe突变体催化效率(Kcat = Vmax / Km)显著下降而Gly301 → Ala 突变体催化效率显著上升(1.64 和8.02 相对于野生型3.56, P < 0.01)&#65377;与之相对应,CYP2A13 的Phe300 → Ile 突变体催化效率则明显上升而Ala301 → Gly 突变体催化效率显著下降(1.03 和0.06 相对于野生型的0.27, P < 0.05)&#65377;这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax 的改变所致&#65377;369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响&#65377; 【结论】 300 和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性&#65377;     

利用不同DNA原进行基因多态性研究的可行性分析

目的 探讨不同ＤＮＡ源作基因多态性分析的优缺点，及以血凝块裂解液直接进行ＰＣＲ扩增的可行性和可靠性。方法 从口腔粘膜细胞、组织切片提取ＤＮＡ，并将临床生化分析遗弃的血凝块制备成裂解液和纯化ＤＮＡ，取各自样本分别进行ＰＣＲ，并进一步对血凝块纯化ＤＮＡ和血凝块裂解液所作的ＰＣＲ扩增作对照研究。结果 本研究使用的不同ＤＮＡ源所作的ＰＣＲ扩增均获得满意结果，以血凝块裂液进行的ＧＳＴＭ１，ＧＳＴＴ１和ＣＹＰ     

CBA小鼠感染约氏疟原虫的血清和细胞的被动免疫转移

已知正常 CBA 小鼠感染疟原虫 P.berg-hei yoelii 15～18天后可自愈,此后便具有免疫力。为了进一步研究产生获得免疫的体液和细胞因素,作者用免疫小鼠血清和细胞被动转移方法进行了一系列实验。实验用雄性 CBA/LAC 小鼠(鼠龄8～15周),凡需去除 T 细胞的,则在生后7周切除胸腺,并经 X 线照射和同系骨髓细胞移植。感染均用约氏鼠疟原虫的17X 株经腹腔途径进行,其具体接种方法以及血中疟原虫数     

长风破浪会有时,直挂云帆济沧海——《环境与职业医学》创办30周年有感

值此《环境与职业医学》创刊30周年之际,我谨向编辑部全体工作人员表示最热烈的祝贺。十分耕耘,一分收获,《环境与职业医学》杂志能有今天的成功,是你们30年不懈努力的结果。借此机会,我也想感谢编辑部多年如一日将每期杂志邮寄给大洋彼岸的我,让我能了解国内环境与职业医学研究的动态和进展。能被邀请为《环境与职业医学》的海外编委,是我的荣耀。     

O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性与肿瘤易感性的关系

[目的]通过比较表达在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中野生型和突变型 O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)对二氯乙基亚硝脲(BCNU)细胞毒性作用的反应差异,探测 AGT错译突变体的功能意义.[方法]将野生型及不同突变型 AGT cDNA 分别转染 CHO细胞,选择稳定表达 AGT的细胞株,用 BCNU 作用细胞,以存活细胞簇的数量作为判断细胞毒性标准.[结果]表达 AGT Leu84Phe和 Leu84Phe/Ile143Val/Lys178Arg突变体的细胞对 BCNU的毒性作用抵抗力显著减弱,与此不同的是,其余突变体 Ile143Val、 Lys178Arg、 Ser184Asn以及 Ile143Val/Lys178Arg对 BCNU毒性作用的抵抗性较野生型 AGT无明显差异.[结论] AGT Leu84Phe突变体在修复 BCNU 造成的 DNA损伤过程中酶活性降低.提示 AGT基因多态性可能与肿瘤易感性有关.     

O^6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性与肿瘤易感性的关系

【目的】通过比较表达在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中野生型和突变型O^6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)对二氯乙基亚硝脲(BCNU)细胞毒性作用的反应差异，探测AGT错译突变体的功能意义。【方法】将野生型及不同突变型AGT cDNA分别转染CHO细胞，选择稳定表达AGT的细胞株，用BCNU作用细胞，以存活细胞簇的数量作为判断细胞毒性标准。【结果】表达AGT Leu84Phe和ku84Phe／Ilel43Val／Lys178Arg突变体的细胞对BCNU的毒性作用抵抗力显著减弱，与此不同的是，其余突变体Ile143Val、Lys178Arg、Ser184Asn以及Ile143Val／Lys178Arg对BCNU毒性作用的抵抗性较野生型AGT无明显差异。【结论】AGT Leu84Phe突变体在修复BCNU造成的DNA损伤过程中酶活性降低。提示AGT基因多态性可能与肿瘤易感性有关。     

用荧光显微镜研究化学致癌物的细胞定位

经体内或体外方法接触致癌物的组织中,用放射自显影和亚细胞组份分离都已发现致癌物可与DNA结合。作者则用荧光显微镜直接证明了动物接受致癌物后,其细胞质和细胞核中有致癌物的存在。作者选用了下列经紫外线激发可产生荧光的致癌物:苯(α)芘(BP)、N-2-芴基乙酰胺(FAA)、黄曲霉毒素B_1(AFB)、5-氧代-5H-苯(c)异氧萘(4,3-b)吲哚(R 47)、苯(c)萘并(1,2-j)甲基-4-吖啶(BNMA)(原文为benzo(c)naphto(1,2-j)methyl-4-acridine,     

定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸

【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据。【方法】运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析。【结果】与野生型CYP2A6相比较,其Ile300→Phe突变体催化效率（Kcat=Vmax/Km）显著下降而Gly301→Ala突变体催化效率显著上升（1.64和8.02相对于野生型3.56,P〈0.01）。与之相对应,CYP2A13的Phe300→Ile突变体催化效率则明显上升而Ala301→Gly突变体催化效率显著下降（1.03和0.06相对于野生型的0.27,P〈0.05）。这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax的改变所致。369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响。【结论】300和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性。