盐酸尼卡地平治疗颅脑肿瘤术后高血压的临床疗效分析

目的探讨盐酸尼卡地平治疗颅脑肿瘤患者术后高血压的疗效。方法选择40例颅脑肿瘤术后高血压患者,使用盐酸尼卡地平静脉注射治疗,初始剂量均为3.0μg/(kg.min),治疗30min后,改为6.0μg/(kg.min)再治疗30min,观察疗效,记录两次用药后30min的血压和心率。结果 38例患者在使用盐酸尼卡地平两种不同剂量治疗后血压均有下降,盐酸尼卡地平在6.0μg/(kg.min)的用药剂量时,治疗的显效率和有效率均高于3.0μg/(kg.min),但在用药剂量达6.0μg/(kg.min)时出现面色潮红3例,心率增快3例(>100次/分),心悸2例,而在3.0μg/(kg.min)时,仅出现面色潮红2例。结论颅脑肿瘤术后高血压患者静脉滴注盐酸尼卡地平可以快速、有效的降低血压,防止术后并发症。     

乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备

目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素（hEPO）转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因（BLG）调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体，应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中，经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因，其中3头为母羊，1头公羊于出生后20d死亡；3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2；Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32kDa；MTT法检测结果表明，在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中，每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×10^2IU、1.90×10^4IU、1.91×10^4IU。结论牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达，为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。     

不同冻存液对人诱导性多能干细胞冻存与复苏效果的影响

目的:探讨不同冻存液对人诱导性多能干细胞(iPSC)冻存复苏后的存活率及诱导分化的影响,筛选出简单有效的冻存与复苏方法。方法:人iPSC培养至第3代后分组冻存:①含有不同配比胎牛血清(FBS)的细胞冻存液分组:A组[80%培养基(DMEM/F12)+10%FBS+10%二甲亚砜(DMSO)];B组(70%DMEM/F12+20%FBS+10%DMSO);C组(40%DMEM/F12+50%FBS+10%DMSO);D组(90%FBS+10%DMSO)。②含有不同配比DMSO的细胞冻存液分组:E组(45%DMEM/F12+50%FBS+5%DMSO);F组(40%DMEM/F12+50%FBS+10%DMSO);G组(35%DMEM/F12+50%FBS+15%DMSO);H组(30%DMEM/F12+50%FBS+20%DMSO)。以相同方法冻存并复苏人iPSC,观察比较不同组细胞在复苏14 d后重新形成典型干细胞集落的数量,并在相同诱导分化体系下,记录复苏人iPSC向神经元和胶质细胞分化的效率。结果:C和F组细胞复苏后形成典型干细胞集落的数量多于其他组(P<0.05),A和B组细胞复苏后分化为神经元的效率略高于其他实验组。结论:以40%DMEM/F12+50%FBS+10%DMSO配比组合成的细胞冻存液作为人iPSC的冻存保护剂,可使人iPSC的冻存复苏效率最优并保持较好的生物学特性。     

锰增强磁共振示踪移植神经干细胞在大脑内的功能

背景：在前期研究中,我们已成功用SPIO标记成人神经干细胞（NSCs）,移植到开放性脑外伤患者脑内,并用MRI观察到其在脑内的迁徙和分布,实现了无创性观察移植NSCs在体内的分布。但是这一方法无法评估移植NSCs是否参与大脑功能活动。在本实验中,我们利用锰增强磁共振（ME-MRI）技术在体观察移植NSCs在动物脑损伤区的功能活动。 方法：40只脑损伤SD大鼠随机分为四组,每组10只大鼠。第1组大鼠脑损伤后不行NSCs移植,然后行ME-MRI扫描。静脉输注MnCl2.4H2O,甘露醇开放一侧血脑屏障,电刺激其对侧前肢,采用3D-SPGR序列ME-MRI扫描。第2组大鼠脑损伤一周后行SPIO标记NSCs立体定向移植,两周后行ME-MRI扫描,方法同前。第3组大鼠脑损伤一周后行SPIO标记NSCs立体定向移植,两周后行ME-MRI扫描,方法同前,但在电刺激阶段静脉注射钙通道阻滞剂地尔硫卓。第4组脑损伤大鼠局部注射PBS,然后行ME-MRI扫描,方法同前。 结果：第2组脑损伤大鼠ME-MRI扫描后发现相应的皮层有高信号,表明局部存在神经细胞电活动,并为ME-MRI所反映。第3组脑损伤大鼠加入地尔硫卓后其相应位置的高信号消失,表明这一电活动是钙通道依赖性的。而第1组和第4组脑损伤大鼠脑损伤区无高信号出现。 结论：我们利用ME-MRI可初步检测到移植NSCs在大脑局部的电活动,为今后进一步研究NSCs在宿主脑内的功能奠定了基础。     

Knockout血清替代品可提高C57BL/6J小鼠胚胎干细胞建系效率

目的:在培养液中添加knockout血清替代品(knockout serum replacement,KSR)代替胎牛血清(FBS)用于建立C57BL/6J小鼠胚胎干细胞(ESC)细胞系,以便消除血清中的不确定因子对ESC增殖的影响。方法:以C57BL/6J小鼠3.5 d的囊胚为材料分离ESC,比较KSR和FBS用于建立小鼠ESC细胞系的效率,并通过体内、外分化验证所分离获得的小鼠ESC的发育潜能。结果:培养液中添加KSR,成功从13个小鼠囊胚中分离获得一个ESC细胞系(MES-1),体外培养传代超过20代仍保持未分化状态,核型为正常XX型,碱性磷酸酶及oct-4基因高表达,悬浮培养可以生成拟胚体,接种到裸鼠皮下可形成畸胎瘤,注射到ICR小鼠3.5 d囊胚中,ESC可以参与胚胎发育并产生嵌合体小鼠。而培养液中添加FBS的对照组未能获得超过3代的ESC细胞系。结论:在培养液中添加KSR代替FBS适合于C57BL/6J小鼠ESC的分离与培养,从而可避免实验前对所用血清的筛选。     

山羊脑挫裂伤模型的建立

目的 建立一种可控性强、易于指标检测的大动物(山羊)脑挫裂伤模型.方法 选取25只健康成年无角山羊,通过外科手术暴露各组羊大脑上薛氏沟周围的运动皮质,以50 g钢球分别自50、75、100及125 cm高度作自由落体加速撞击一次致伤,记录运动诱发电位、头颅MRI扫描图像,以及病理显微观的改变.结果 50.75、100及125 cm高度撞击组羊的存活率分别为100%、100%、80%及40%.头颅MRI扫描和运动诱发电位表明100 cm高度撞击可产生明显脑挫裂伤灶及脑水肿,损伤局部皮层的运动诱发电位变化明显;50、75 cm高度撞击仅产生轻度的脑挫裂伤灶及脑水肿表现;125 cm高度撞击产生广泛的脑挫裂伤灶.结论 对山羊脑上薛氏沟周围运动皮层区使用50 g×100 cm力度作自由落体加速撞击,可产生观察指标明确且存活率高的山羊脑挫裂伤模型,有望广泛用于神经于细胞移植及药物等治疗的实验研究.     

治疗性克隆研究进展

核移植来源的胚胎干细胞 (ES) 细胞在动物疾病模型上的成功治疗作用以及核移植来源的患者特异的ES细胞研究进展有望将这一技术即治疗性克隆应用于人类疾病治疗.本文对治疗性克隆的研究进展、治疗性克隆研究中存在的问题以及治疗性克隆的应用前景作一综述和讨论.     

哺乳动物卵泡发育的调控机制

哺乳动物卵泡发育是一个极为复杂的过程。卵泡主要是由一个生殖细胞及外围众多的颗粒细胞和卵泡膜间质细胞等组成。在促性腺激素等的作用调控下,卵泡中颗粒细胞增殖、分化,产生分化程度不一的颗粒细胞群。颗粒细胞又通过旁分泌和间隙连接的通讯方式控制卵母细胞的生长和成熟,因而卵泡发育是处在一个庞大的调控系统严格控制之下。本文综述了生长期和成熟期调控机制及人工诱导卵泡发育、成熟和卵成熟的一些思路。     

奶牛卵泡超数同步发育及其卵母细胞的发育潜能

目的建立促奶牛卵泡超数同步发育的方法,并利用体细胞核移植和分子技术评价来自这些卵泡的卵母细胞发育潜能。方法用E2-P4对淘汰的高产奶牛进行联合处理后,分别对其实施不同组合的外源促性腺激素处理[FSH12h组,FSH48h组,FSH48h-LH6h组（简称LH6h组）,FSH48h-LH26h组（简称LH26h组）]以促进其卵泡超数同步发育;然后从卵泡中回收COCs进行体外成熟,排放第一极体的卵供作优质种牛的体细胞核转移（nucleartransfer,NT）受体,以评价卵的发育潜能。结果E2-P4能成功地诱导奶牛卵巢中产生一个新的卵泡起始波,并能保证卵泡在外源促性腺激素作用下实现超数同步发育;上述四组不同组合外源促性腺激素处理的卵母细胞衍生的NT重构胚经体内培养7d后,后3组的囊胚发育率显著高于FSH12h组和对照组（P〈0.01）;将这些克隆囊胚移植同步发情的受体牛子宫后,仅LH26h组的卵所获得的克隆胚能实现全程发育（直至克隆小牛出生）。经RT-PCR分析颗粒细胞中FSHr、LHr和连接蛋白43（Connexin43,Cx43）等mRNA含量变化,以及Western印迹分析其Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化,证实该组卵巢提供的同步发育卵泡为早期闭锁卵泡。结论E2-P4-FSH48h-LH26h组合处理可人为调控牛卵泡的同步发育;处于早期闭锁状态卵泡的卵母细胞具备较高的发育潜能。