高效液相色谱法测定复方红景天口服液中红景天苷含量

目的测定复方红景天口服液中红景天苷的含量。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent HC—C18柱，流动相为乙腈-水（8：92），检测波长为275nm，流速为1．0mL／min，柱温为20℃。结果红景天苷质量浓度在10．9～196．2μg／mL范围内与峰面积线性关系良好，r=0．9999（n=6），平均回收率为100．5％，RSD=0．01％（n=6）。结论该方法灵敏、准确、重现性好，可用于复方红景天口服液中红景天苷的含量测定。     

肝豆状核变性患者Wilson病蛋白及其基因的改变

目的探讨肝豆状核变性(WD)发病的分子生物学机制.方法通过肝活检获得WD患者的肝标本,利用体外胶原酶温育分离并培养肝细胞,对WD患者肝细胞WD蛋白进行Western-blot蛋白印迹检测;同时采用荧光PCR技术筛查其WD基因突变,并进行直接DNA测序.结果肝细胞蛋白印迹可见特异WD蛋白(Mr155 000条带)的表达.3例WD患者中WD1的Mr155000条带密度无明显变化,WD2,WD3的特异条带密度降低,仅有对照组的36%,提示其WD基因肝内表达异常;荧光PCR筛查发现一例患者存在exon8 Arg778Leu突变,DNA直接测序证实为2333 G→T杂合突变.结论 WD基因在WD患者肝细胞的表达存在异常,这可能与WD基因Arg778Leu位点突变有关,直接检测WD基因产物有助于研究WD的病理机制.     

WilSon病蛋白及其基因在肝豆状核变性患者中的改变

目的探讨肝豆状核变性(WD)发病的分子生物学机制.方法通过外科手术获得3例WD患者、2例对照者的肝活检标本,利用胶原酶温育消化法分离肝细胞,并进行体外原代培养;肝细胞裂解离心后,使用6%聚丙烯酰胺凝胶行SDS-PAGE电泳,分离WD蛋白;以抗人WD蛋白抗体为第一抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为第二抗体,对肝细胞WD蛋白进行Westem-blot印迹检测,观察特异性条带数目、密度深浅和分子量大小;同时采用荧光PCR技术,筛查所有研究对象WD基因8号外显子(exon 8)的突变情况,对异常者进行DNA直接测序结果 WD患者及对照者肝细胞WD蛋白Westem-blot检测均表现为特异的155kDa条带,3例WD患者中1例无明显变化,另2例出现155kDa条带密度降低,仅有对照组密度的1/3～1/2,提示这两例患者的WD蛋白在肝内表达异常;荧光PCR筛查发现1例患者存在exon 8 Arg778 Leu突变,DNA直接测序证实为2273G→TG杂合突变.结论 WD基因蛋白产物在WD患者肝细胞的表达存在异常,这可能与WD基因Arg778Leu位点突变有关,直接检测WD基因蛋白产物有助于研究WD的发病机制.     

骨髓干细胞移植后Western blot免疫印迹分析鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化

目的:Western blot免疫印迹分析骨髓干细胞移植后mdx鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化。方法:实验于2004-09/12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成。①选取7～8周龄mdx鼠25只,随机数字表法分为骨髓移植4,8,12,16周组、空白对照组,5只/组。另选取4～6周龄C57鼠20只作为供体鼠,10周龄C57鼠5只作为阳性对照组。②各组在移植前均给予照射剂量为7Gy的放疗预处理。放疗完毕后,骨髓移植4,8,12,16周组均进行尾静脉细胞移植,移植细胞数为2×107/只,0.3～0.5mL;空白对照组、阳性对照组尾静脉输入0.3mL磷酸盐缓冲液。③骨髓移植4,8,12,16周组分别于对应时间点处死,取其腓肠肌,制备抗肌萎缩蛋白样品,进行抗肌萎缩蛋白Western blot免疫印迹分析,以GAPDH作为内参。结果:25只7～8周龄mdx鼠、5只10周龄C57鼠全部进入结果分析。骨髓干细胞移植后抗肌萎缩蛋白Western Blot免疫印迹分析结果:空白对照组无抗肌萎缩蛋白的表达;骨髓移植4周组仅可见抗肌萎缩蛋白的微弱表达,dystrophin/GAPDH灰度比值约为0.095±0.267;骨髓移植12周组约为0.218±0.338;随骨髓移植时间的延长抗肌萎缩蛋白表达量逐渐增加,移植后16周的表达量较移植后8周明显增加(0.393±0.385,0.173±0.284;t=6.062,P<0.05),但仍明显低于阳性对照组1.172±0.328(t=3.14,P<0.05)。结论:骨髓干细胞移植mdx鼠后应用WesternBlot免疫印迹分析可于不同时间检测到抗肌萎缩蛋白的表达,且随移植时间延长表达量增多,提示骨髓干细胞移植可长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌病理及Dystrophin的表达变化

【目的】研究骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌组织病理变化及dystrophin的动态表达变化。【方法】7～9周mdx鼠20只平均分为4组,放疗后移植1.2×107个/只同种异基因全骨髓干细胞,于移植后4周、8周、12周及16周应用HE染色观察细胞形态及核中心移位(CNF),免疫组化及Westernblot方法检测dystrophin表达变化,C57鼠和未治疗mdx鼠各5只作阳性和阴性对照。【结果】C57鼠腓肠肌横切面可见肌细胞大小形态基本一致,无核中移现象。各细胞移植治疗组和对照组mdx鼠均有大量的炎细胞浸润,核中心移位明显。未治疗mdx鼠CNF最高,可达70%左右,移植后4周、12周和16周,CNF比例分别为55%、50%和44%。免疫荧光结果C57鼠肌膜呈完整的网状绿色荧光,mdx鼠肌膜基本未见绿色荧光;移植后4周肌膜dystrophin阳性纤维数大约占细胞总数的1%,随时间延长表达渐渐增多,8周、12周和16周时阳性细胞数分别占细胞总数的5%、10%和15%。Westernblot结果mdx鼠无dystrophin的表达,野生型C57鼠表达量最多,移植后4周mdx鼠仅见微弱表达,随时间延长表达量渐增,移植后16周表达量较移植8周明显增加。【结论】骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌CNF随移植时间延长逐渐减少,dystrophin的表达随时间延长增多,提示骨髓干细胞移植后长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

HPLC法测定复方天麻丹参口服液中天麻素的含量

目的测定复方天麻丹参口服液中天麻素的含量。方法采用高效液相色谱法（HPLC）,AgilentHC—Cts为色谱柱,流动相为乙腈-水（3：97）,检测波长为274nm,流速1．0ml·min^-1柱温：20℃,进样量10μl。结果天麻素在0．0535～1．07g·L^-1。范围呈线性关系,其回归方程为：A=1254．3C＋6．1919（r=0．9999）,平均回收率为100．8％,RSD=1．9％。结论本法测定天麻素的含量灵敏、准确、重现性好,可用于复方天麻丹参口服液中天麻素的含量测定。     

时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析

目的 用电化学发光法作为标准,探讨时间分辨免疫荧光法在检测HBsAg上的应用.方法 对临床348份血清标本、一份HBsAg高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光法和时问分辨免疫荧光法分别检测,比较两种方法检测结果的阴阳性符合率、灵敏性、特异性、准确性、线性范围以及阳性标本的定量相关性等.结果 对临床348份血清检测结果阴阳性符合率为98.26%;阳性标本的定量相关性为γ=0.9641(P＜0.001);两种方法的线性范围,时间分辨免疫荧光分析法约为1:2～1:2048 (0.21～223.07ng/ml),电化学发光约为1:2～1:4096(0.15～223ng/ml).结论 时间分辨免疫荧光法与电化学发光法在HBsAg的定量检测上的灵敏性、准确性和线性范围都基本相当.     

时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析

目的用电化学发光法作为标准,探讨时间分辨免疫荧光法在检测HBsAg上的应用。方法对临床348份血清标本、一份HBsAg高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光法和时间分辨免疫荧光法分别检测,比较两种方法检测结果的阴阳性符合率、灵敏性、特异性、准确性、线性范围以及阳性标本的定量相关性等。结果对临床348份血清检测结果阴阳性符合率为98.26%;阳性标本的定量相关性为γ=0.9641(P<0.001);两种方法的线性范围,时间分辨免疫荧光分析法约为1:2～1:2048(0.21～223.07ng/ml),电化学发光约为1:2～1:4096(0.15～223ng/ml)。结论时间分辨免疫荧光法与电化学发光法在HBsAg的定量检测上的灵敏性、准确性和线性范围都基本相当。     

Wilson病基因产物在人肝细胞内存在和定位的研究

目的证实Wilson病铜转运P型ATP酶(WD蛋白)在人肝内的存在,并初步研究其在肝细胞内的具体定位.方法应用Western-blot蛋白印迹技术对离体培养正常人肝细胞内蛋白进行分离;通过高浓度铜及P型ATP酶阻滞剂矾酸钠、激动剂长春新碱孵育培养,差速离心分离肝细胞胞浆、溶酶体、线粒体和微粒体,对各亚细胞铜含量分别对照分析.结果人肝细胞内分离出155 kDa的WD蛋白特异性条带;在人肝细胞质膜、微粒体内存在有铜转运P型ATP酶,其阻滞剂及激动剂对肝细胞铜转运有显著影响.结论证实正常人肝细胞存在WD蛋白,其存在部分可能在肝细胞质膜、内质网和高尔基器.     

紫外分光光度法测定呋喃西林氧化锌搽剂中主药的含量

目的:建立呋喃西林氧化锌搽剂中呋喃西林含量测定的方法。方法:采用紫外分光光度法,以水为溶剂,测定波长为375nm。结果:呋喃西林的线性范围为1.05～12.6μg·mL-1(r=0.9998),平均回收率为101.0%(RSD=0.07%)。结论:本方法灵敏、准确、可靠,重现性好,可用于该制剂的质量控制。