94例缺血性脑卒中患者HLA基因表达分析

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)基因遗传与缺血性脑卒中发病的关联.方法 采用聚合酶链反应-直接测序分型技术(PCR-SBT)对广东医学院附属南山医院2008年收治的94例缺血性脑卒中患者和同期122例正常对照者进行HLA-A、B、DRB1位点的等位基因分型.结果 缺血性脑卒中患者表达HLA-A位点16个等位基因,HLA-B位点32个等位基因,HLA-DRB1位点25个等位基因.患者组HLA-A*1102基因频率较对照组明显降低,HLA-A*1102与缺血性脑卒中呈负相关(RR=0.06,P=0.019).结论 JLA-A*1102与缺血性脑卒中呈易感负相关,提示HLA等位基因与缺血性脑卒中的发生存在遗传免疫关联,对该病具有临床预测意义.

Abstract：

Objective To discuss the relationship between human leukocyte antigen (HLA) gene heredity and morbidity of cerebral infarction by a random survey on the allele expression of HLA-A, B and DRB1 seats of patients with cerebral infarction. Methods The genotypes of HLA-A, B and DRB1 alleles in 94 patients with cerebral infarction and 122 healthy blood donors were detected by polymerase chain reaction-sequencing based typing (PCR-SBT) method. Results Sixteen alleles in HLA -A locus,32 alleles in HLA -B locus and 25 alleles in HLA -DRB1 locus expressed themselves in these patients with cerebral infarction. The gene frequency of HLA -A*1102 in patients was lower than that in healthy controls, and negative association was found between HLA -A* 1102 allele and cerebral infarction (RR=0.06,P=0.019). Conclusion The research reveals susceptibility association of HLA -A*1102 with patients having cerebral infarction, displaying close genetic immunity correlation between HLA alleles and pathogenesis of cerebral infarction. So, the research in this paper is useful in the clinical prediction of this disease.     

胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析

目的 探讨胸腺成熟树突状细胞(mDC)数量与分布的改变与重症肌无力(MG)发生的关系.方法 选取胸腺切除前未行免疫抑制治疗的MG患者39例为研究组,同期因心脏病手术需行胸腺部分切除的患者19例为对照组.性别和年龄在两组中的分布差异无统计学意义(P>0.05).以DC-LAMP作为胸腺mDC的标志物,用免疫酶组织化学方法显示mDC在胸腺的表达情况,图像分析软件辅助分析.结果 (1)对照组mDC严格地限定在胸腺體质区和皮髓交界区;MG组mDC分布不规则,在髓质、皮质和间质均能见到.(2)对照组mDC大致呈均匀分布在髓质区.MG组则较多地见到成簇分布,尤其在生发中心周围往往出现mDC密集包绕表现.(3)mDC阳性区平均视野细胞相对比例和绝对数MG组(10.9%±2.2%,50±9)均高于对照组(8.5%±1.5%,41±7)(P<0.05).结论 MG患者胸腺组织存在mDC数量的增多及分布的异常.这种异常提示mDC可能积极地参与了MG的发病过程.     

小鼠羊水来源干细胞原代培养及向神经元的诱导分化

目的 研究小鼠羊水来源干细胞(mAFSC)的原代培养及向神经元的诱导分化. 方法 机械手段抽取孕中期小鼠羊水,体外培养扩增,观察细胞生长特性;流式细胞仪检测mAPSC表面抗原表达;锥虫蓝检测P3、P8、P13代mAFSC细胞活性.体外用神经元诱导液诱导mAFSC分化为神经元,并用免疫荧光检测神经元特异性表面标志β-tubulin. 结果 原代mAFSC培养7～10 d可以贴壁生长至80%以上,细胞数达3.5×105～4.0×105个.经3次以上传代以后,mAFSC呈现较均一的梭形细胞,并呈栅栏样排列.mAFSC在体外活性及增殖能力较强,经90 d以上的体外培养,P17代的细胞才出现细胞形态变化及增殖能力明显下降.流式细胞仪检测结果显示,表面抗原Sca-1、CD29阳性;CD11b、CD34及CD45为阴性.mAFSC经神经元诱导液诱导3 d之后,可于体外形成神经样细胞,同时部分细胞表达β-tubulin. 结论 mAFSC在体外具有很好的活性及增殖能力,且拥有定向分化的潜能,为今后的小鼠动物实验细胞治疗研究提供了一种新的干细胞.     

SF-36量表测定重症肌无力患者生活质量分析

目的 探讨 SF-36 量表测定重症肌无力患者的生活质量,以寻找良好的疾病严重度评估标准.方法 采用SF-36量表对重症肌无力患者和健康对照人群进行面对面问卷调查,比较重症肌无力患者与健康对照人群组间,眼肌型与全身型患者之间在躯体功能、社会功能等8 个维度方面的区别.结果 (1)重症肌无力患者SF-36 量表各维度Cronbach's α系数均大于或接近0.7; 健康对照人群组除活力(VT)和社会功能(SF)维度外,其他维度Cronbach's α系数均大于0.7.(2)健康对照人群组躯体角色(RP)、情绪角色(RE)、活力(VT)、社会功能(SF)、躯体功能(PF)、维度得分显著高于重症肌无力患者.(3)眼肌型患者与全身型患者的生活质量比较差异无统计学意义.结论 SF-36 测定中国重症肌无力患者中使用具有较好的信度,可作为疾病严重程度的评估标准.     

非缺失型女性Duchenne型肌营养不良症患者短串联重复序列多态性分析

目的 检测1例女性Duchenne型肌营养不良症(DMD)患者Dystrophin基因的突变情况及其短串联重复序列多态性。以探讨其发病机制。方法用多重PCR方法检测l例女性DMD患者的Dystrophin基因，并用PCR结合基因扫描的方法连锁分析该患者及其家系的5个微卫星DNA位点(STR-44、45、49、40、5’DysⅡ)多态性。结果 该患者和其儿子均为非缺失型DMD。短串联重复序列多态单倍型连锁分析发现女性DMD患者STR单倍型有两种情况：(1)和其患病的儿子Ⅳ-1具有一样的单倍型，该单倍型来自其未患病的母亲Ⅱ-1；(2)因该女性DMD患者儿子的第45内含子缺失。该患者的母亲有可能是嵌合体，该女性DMD患者只遗传了父亲的等位基因，则她的单倍型与其母亲及患病的儿子都不同。结论该女性患者由Dystrophin基因突变引起的可能性较小，她和患病的儿子的单倍型可能相同或不相同，说明其发病与短串联重复序列多态性关系不密切。     

青年女性反复四肢肌无力并吞咽困难——视神经脊髓炎谱系疾病伴发重症肌无力

1临床资料患者,女,27岁,因“反复四肢无力2年,再发并吞咽困难4个月”于2019年7月1日第二次就诊于中山大学附属第一医院神经科。患者于2017年7月下旬无明显诱因出现右侧颈肩部持续性皮肤瘙痒伴刺痛,随后局部皮肤出现散在疱疹,当时无畏寒、发热等症状,当地医院考虑“带状疱疹”予“伐昔洛韦”抗病毒治疗,疱疹逐渐结痂但瘙痒及刺痛持续存在。8月下旬逐渐出现肢体麻木、无力,初始表现为右上肢麻木及不能上举,症状逐渐发展并累及四肢,表现为双上肢不能上举及双下肢行走费力,伴双上肢及腹部以下皮肤麻木,感觉减退,低头时可诱发背部自上而下的闪电样刺痛。同时患者出现小便费力,大便秘结,遂于2017年9月1日至中山大学附属第一医院神经科第一次住院治疗。     

骨髓干细胞移植后Western blot免疫印迹分析鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化

目的:Western blot免疫印迹分析骨髓干细胞移植后mdx鼠抗肌萎缩蛋白表达的变化。方法:实验于2004-09/12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成。①选取7～8周龄mdx鼠25只,随机数字表法分为骨髓移植4,8,12,16周组、空白对照组,5只/组。另选取4～6周龄C57鼠20只作为供体鼠,10周龄C57鼠5只作为阳性对照组。②各组在移植前均给予照射剂量为7Gy的放疗预处理。放疗完毕后,骨髓移植4,8,12,16周组均进行尾静脉细胞移植,移植细胞数为2×107/只,0.3～0.5mL;空白对照组、阳性对照组尾静脉输入0.3mL磷酸盐缓冲液。③骨髓移植4,8,12,16周组分别于对应时间点处死,取其腓肠肌,制备抗肌萎缩蛋白样品,进行抗肌萎缩蛋白Western blot免疫印迹分析,以GAPDH作为内参。结果:25只7～8周龄mdx鼠、5只10周龄C57鼠全部进入结果分析。骨髓干细胞移植后抗肌萎缩蛋白Western Blot免疫印迹分析结果:空白对照组无抗肌萎缩蛋白的表达;骨髓移植4周组仅可见抗肌萎缩蛋白的微弱表达,dystrophin/GAPDH灰度比值约为0.095±0.267;骨髓移植12周组约为0.218±0.338;随骨髓移植时间的延长抗肌萎缩蛋白表达量逐渐增加,移植后16周的表达量较移植后8周明显增加(0.393±0.385,0.173±0.284;t=6.062,P<0.05),但仍明显低于阳性对照组1.172±0.328(t=3.14,P<0.05)。结论:骨髓干细胞移植mdx鼠后应用WesternBlot免疫印迹分析可于不同时间检测到抗肌萎缩蛋白的表达,且随移植时间延长表达量增多,提示骨髓干细胞移植可长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

丁酸钠和维甲酸可上调肌肉特异性基因的表达

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)抑制剂丁酸钠和维甲酸体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSC)分化为肌样细胞的作用.方法 分离、培养、增殖rMSC,用HDAC抑制剂丁酸钠和维甲酸诱导rMSC分化为肌样细胞,免疫细胞化学方法 检测诱导前后细胞肌肉特异性蛋白desmin和a-sarcomerie actin的表达,RT-PCR方法 检测诱导前后骨骼肌特异性转录因子MyoD、myogenin、MRF 4和肌肉特异性肌酸磷酸激酶(muscle specific creatine kinase,MCK)mRNA的表达.结果 rMSC诱导后可见多核肌管样细胞,且肌肉特异性蛋白desmin和a-sarcomeric actin的表达呈阳性.MyoD基因mRNA在诱导前后均有表达,但诱导1 d后表达上调,差异有统计学意义(P＜0.05);myogenin和MRF 4基因mRNA在诱导前无表达,诱导1 d后开始表达,MCK基因mRNA在诱导7 d后开始表达.结论 HDAC抑制剂丁酸钠和维甲酸可诱导rMSC分化成肌样细胞,并上调骨骼肌特异性转录因子和肌肉特异性肌酸磷酸激酶的表达.