脑脊髓损伤大鼠局部Th1/Th2细胞相关因子的表达及意义

目的 分析大鼠急性脑脊髓性损伤后脑脊髓中Th1和Th2细胞相关因子的表达水平,探讨其在持续性二次损伤中可能的作用.方法 制备SD大鼠急性脑脊髓性损伤模型,随机分为损伤组和脂多糖(LPS)处理组,各组又分别对脑和脊髓进行实验处理.用荧光定量PCR分别检测不同组别大鼠脑脊髓中Th1和Th2细胞相关因子,并进行相关性分析.结果 与对照组相比,损伤和LPS处理的脑组织Th1细胞相关的细胞因子IFN-γ表达明显增高(P＜0.05),而T-bet的表达并无明显改变;在损伤和LPS处理的脊髓中,IFN-γ和转录因子T-bet、HLX的表达均显著升高(P＜0.05).无论是脊髓损伤组还是LPS处理组,细胞因子IL-4和转录因子GATA3均与对照组无异,呈低表达状态.结论 脑脊髓损伤后呈现不同程度的Th1细胞相关因子上调,尤以可溶性的细胞因子IFN-γ为显著,脊髓损伤时出现T-bet与HLX表达上调.     

皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1mRNA表达及意义

目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4 T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4 T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4 T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4 T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果:活动期皮肌炎患者外周血CD4 T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170?P<0.05?。CD4 T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关?r=0.67,P<0.05?。结论:活动性皮肌炎患者外周血CD4 T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。     

皮肌炎患者外周血CD4~+ T细胞中TGF-β_1、IL-10 mRNA的表达及临床意义

目的:检测活动期皮肌炎(DM)患者外周血CD4+T细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的表达以及血清肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1、IL-10在DM发病机制中的作用。方法:收集15例活动期DM患者和15例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4+T细胞,通过逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测出各组TGF-β1、IL-10表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1、IL-10表达与血清CK含量的相关性。结果:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10表达量显著高于健康对照,血清CK含量与CD4+T细胞TGF-β1表达量呈中度正相关。结论:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10 mRNA表达显著升高,可能与DM疾病发生有关。     

人外周血CD8＋T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达

目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础.方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13 F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定.利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG 30%诱导4 h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定.结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1 248 bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致.成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白.     

胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义

目的 检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义.方法 收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析.结果 胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17 mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),且二者呈现明显正相关(P＜0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P＜0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P＜0.01).结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系.     

皮肌炎患者外周血CD+4T细胞IFN-γ和IL-4的表达及意义

采集15例活动期皮肌炎（DM）患者和15例健康对照者外周血,磁珠分离获得CD4＋T细胞,RT-PCR检测其IFN-γ、IL-4 mRNA,观察IFN-γ和IL-4表达与血清肌酸激酶（CK）含量的相关性。结果显示,活动期DM患者的外周血CD4＋T细胞的IFN-γ、IL-4 mRNA分别为0.698&#177;0.468、1.028&#177;0.547,显著高于健康对照者的0.359&#177;0.208、0.628&#177;0.354（P均〈0.05）。活动期DM患者CD4＋T细胞的IL-4 mRNA与血清CK含量呈正相关（r=0.584,P〈0.05）。认为活动期DM患者外周血CD4＋T细胞Th1/Th2细胞因子显著升高,无明显极化现象,CD4＋T细胞Th1/Th2细胞因子异常表达可能与DM的发病机制有关。     

Runx3及其免疫调节作用的研究进展

Runx3作为Runx转录因子家族成员通过对细胞发育、信号转导等生物学作用的调控,参与淋巴细胞、树突状细胞等免疫细胞的分化、增殖和成熟,影响着Th1／Th2的平衡、树突状细胞的迁移和B细胞功能,且对肿瘤细胞具有明显的抑制作用,其作为重要的免疫调节和抑瘤基因正引起人们的广泛关注。     

皮肌炎患者外周血CD4+Th1/Th2细胞因子及转录因子的表达

目的 探讨Th1/Th2细胞分化趋势在活动性皮肌炎(DM)发病机制中的作用.方法 分别采集15例活动性DM患者(DM组)和15例健康人(对照组)外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4 T细胞(Th细胞),逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组Th1、Th2转录因子T-bet、GATA3及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的表达强度.分析T-bet和IFNγ、GATA3和IL-4的相关性;IFN-γ、IL-4表达与血清肌酸激酶(CK)含量的相关性.结果 DM组IFN-γ、GATA3及II-4表达均明显高于对照组(P＜O.05);DM组IL-4与GATA3、血清CK呈正相关(P＜O.05).结论 DM患者Th1/Th2无明显极化现象,Th1/Th2细胞因子表达均增强.     

铜绿假单胞菌B细胞表位-MyD88表达质粒的构建及其相关研究

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白F(OprF)的主动免疫能诱发机体产生特异性体液免疫应答,发挥局部保护作用.然而OprF的完整蛋白对机体具有潜在的危害性.现有研究表明OprF蛋白含有大量的B细胞表位,因此,应用OprF优势抗原表位设计的疫苗,既能诱导机体产生抗Pa的中和抗体,又能克服非抗原决定簇成分潜在的毒副作用.考虑到表位蛋白的免疫原性较弱,不足以引发良好的免疫应答,故利用新型免疫佐剂MyD88来调节机体.     

胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子与相关细胞因子的检测及临床意义

目的 了解胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的转录因子及其相关细胞因子的表达水平,探讨其在胃癌发展进程中的作用.方法 收集57例胃癌患者、31例胃部良性疾病患者和40例健康志愿者的外周血,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)技术,检测外周血单个核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录因子RORγt和FoxP3 mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测胃癌患者血浆中IL-17、IL-23、转化生长因子β(TGF-β)和IL-10的浓度.结果 胃癌组FoxP3和RORγt mRNA的表达水平分别为2.349±0.491和0.794±0.304,明显高于健康对照组和良性疾病组(均P<0.05),FoxP3/RORγt比值也高于健康对照组和良性疾病组(P<0.05),而良性疾病组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05).中晚期胃癌组的FoxP3/RORγt比值明显高于早期胃癌组(P<0.05).胃癌组血浆中IL-17、IL-23、TGF-β和IL-10的水平明显高于健康对照组(P<0.05),中晚期胃癌组TGF-β和IL-10水平明显高于早期胃癌组(P<0.05).结论 胃癌患者存在高Th17和Treg细胞水平,且随着病程的进展Treg细胞仍维持强势,FoxP3/RORγt比值明显增高.监测胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子和相关细胞因子水平,有助于对病程的判断.