| 人外周血CD8＋T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达 |
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| 引用本文： | 李雅贞,王胜军,石燕,戴晓莉,彭素芳,苏兆亮,邵启祥,许化溪.人外周血CD8＋T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(2). |
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| 作者姓名： | 李雅贞 王胜军 石燕 戴晓莉 彭素芳 苏兆亮 邵启祥 许化溪 |
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| 作者单位： | 江苏大学检验医学研究所免疫研究室,江苏,镇江,212013 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏大学大学生科研立项基金 |
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| 摘 要： | 目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础.方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13 F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定.利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG 30%诱导4 h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定.结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1 248 bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致.成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白.
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| 关 键 词： | Runx3基因 cDNA克隆 原核表达 |
Cloning and expression of human Runx3 gene obtained from human pe-ripheral blood CD8+T lymphocyte |
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| LI Ya-zhen,WANG Sheng-jun,SHI Yan,DAI Xiao-li,PENG Su-fang,SU Zhao-liang,SHAO Qi-xiang,XU Hua-xi.Cloning and expression of human Runx3 gene obtained from human pe-ripheral blood CD8+T lymphocyte[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2009,25(2). |
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| Authors: | LI Ya-zhen WANG Sheng-jun SHI Yan DAI Xiao-li PENG Su-fang SU Zhao-liang SHAO Qi-xiang XU Hua-xi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RT-PCR |
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