姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用胆管结扎法诱导大鼠肝纤维化模型,将21大鼠随机分为假手术组(不建模,只给予生理盐水)、肝纤维化模型组(建模后给予生理盐水)和姜黄素给药组(建模后给予姜黄素400 mg·kg^-1),每组7只,给药2周后检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和总胆红素(Tbil) 水平;HE染色观察大鼠肝脏组织病理形态学;Massion染色观察大鼠肝脏组织胶原沉积;Western blotting法检测大鼠肝脏组织中转化生长因子β1 (Tgf-β1)和 α-平滑肌肌动蛋白(α-Sma)表达水平。结果:与假手术组比较,肝纤维化模型组和姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显升高(P<0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显降低 (P<0.05)。肝纤维化模型组大鼠肝脏组织明显破环,大量炎症细胞浸润、胶原沉积及胆管增生,姜黄素给药组大鼠肝纤维病理变化明显减轻。Western blotting 检测,与假手术组比较,肝纤维化模型组大鼠肝脏组织中Tgf-β1和 α-Sma蛋白表达水平升高(P<0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠肝脏组织中Tgf-β1和α-Sma蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:姜黄素有治疗肝纤维化的作用,有望成为预防和治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。     

db/db小鼠肝脏中实时定量逆转录PCR内参照基因及标准化方法的评估与整合（英文）

目的:实时定量逆转录PCR(RT-q PCR)结果的标准化对于保证最终结果的准确性尤其重要。常用的标准化方法包括用加入的核酸量校正(ΔCt法)、用单个内参照基因校正(ΔΔCt法)和用统计学软件计算多个内参照基因的几何平均值进行校正。我们在db/db小鼠肝脏中对各种校正方法进行评估。方法:用ge Norm和NormFinder两种软件评估ACTB、e IF5、GAPDH、HMBS、HPRT1、Polr2A和RPLP0共7个内参照基因,以肝脏脂质合成相关基因Thrsp、SCD、SREBP1c和FAS作为目的基因。结果:应用ΔCt法,db/db小鼠肝脏中所有目的基因及GAPDH的表达显著升高(P0.05)。ge Norm计算认为ACTB和HMBS最稳定。Norm Finder计算认为ACTB最稳定,而GAPDH和RPLP0为最佳组合。以单个基因ACTB或RPLP0,以及ACTB与HMBS,或GAPDH与RPLP0的几何平均值进行校正,db/db小鼠肝脏中除SREBP1c以外,Thrsp、SCD1和FAS的表达均升高(P0.05)。结论:用ΔCt法校正RTq PCR的结果稳定并具有生物学意义。统计学软件ge Norm或Norm Finder应与ΔCt法整合使用。     

缺血后处理减轻大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤的实验研究

摘要： 目的 观察缺血后处理 （I-postC） 对大鼠肢体缺血再灌注 （LIR） 后肺损伤的影响, 探讨缺血后处理的器官保护作用及可能机制。方法 Wistar 大鼠 24 只随机分为 3 组 （n=8）, 对照组 （Control 组）、 缺血再灌注组 （IR 组） 和缺血后处理组 （I-postC 组）。结扎大鼠双后肢根部以阻断血流 4 h, 后再恢复血流灌注 4 h, 制作大鼠 LIR 动物模型。 Control 组橡皮带松弛环绕双后肢不阻断血流, I-postC 组在血流再灌注前, 行重复 3 次的缺血 5 min-再灌注 5 min,再恢复 4 h 的血流再灌注。留取血液及肺组织标本, 测定各组动物动脉血气指标氧分压[p （O2 ） ]和二氧化碳分压 [p （CO2 ） ], 检测血浆及肺组织的丙二醛 （MDA） 含量及黄嘌呤氧化酶 （XOD） 和超氧化物歧化酶 （SOD） 水平, 光镜及电镜下观察肺组织的病理形态学改变。结果 LIR 后 p （O2 ） 和 p （CO2 ） 明显降低, 血浆和肺组织中 SOD 活性明显降低,而 XOD、 MDA 明显增加 （P < 0.05）; 镜下可见肺间质内血管扩张充血, 中性粒细胞浸润, 血管周围间隙增大, 肺泡间隔增宽, 肺泡腔内有渗出液等损伤表现。与 IR 组比较, I-postC 组 p （O2 ） 和 p （CO2 ） 明显增加, 血浆及肺组织 SOD 活性升高; 而 XOD、 MDA 水平降低 （P < 0.05）; 镜下观察肺组织只可见轻度病理改变。结论 I-postC 可通过抑制脂质过氧化反应减轻大鼠 LIR 后肺损伤的程度。     

塞来昔布联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的协同作用及其机制

目的: 观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法: 将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫杉醇组(含不同浓度紫杉醇的培养基)和塞来昔布联合紫杉醇组(含不同浓度塞来昔布和不同浓度紫杉醇的培养基)。Hoechst 33258染色观察各组MCF-7细胞凋亡形态;MTT法检测各组MCF-7细胞存活率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达量。结果: Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7凋亡细胞数增多,塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7凋亡细胞最多,并随塞来昔布浓度增加而增加。MTT法检测,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7细胞存活率均随药物作用时间的延长而降低;而在相同时间段内,50mg·L^-1塞来昔布与30μg·L^-1紫杉醇联合应用组MCF-7细胞存活率低于单独使用两药时的细胞存活率(P<0.05)。流式细胞术检测,塞来昔布组细胞阻滞于G₀/G₁期,紫杉醇组细胞阻滞于G₂/M期;与空白对照组比较,塞来昔布联合紫杉醇组细胞周期分布改变最明显,在G₀/G₁期及G₂/M期的细胞比例均有明显升高,S期细胞比例下降。AnnexinⅤ/PI双染,药物刺激细胞6h后,塞来昔布组和紫杉醇组细胞早期凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),塞来昔布联合紫杉醇组细胞早期凋亡率高于其他组(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,塞来昔布组、紫杉醇组和塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7细胞中bcl-2蛋白和p-ERK蛋白表达量均下调,塞来昔布联合紫杉醇组下调最明显;而ERK2蛋白表达量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 塞来昔布和紫杉醇在促乳腺癌MCF-7细胞凋亡方面有协同作用,其机制可能与下调bcl-2和p-ERK蛋白表达水平有关。     

赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制

目的: 研究赖氨大黄酸(RHL)对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老和肾脏保护作用,阐明其作用机制,为RHL预防衰老的研究提供依据。方法: 通过腹腔注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,将小鼠随机分为对照组、衰老模型组和低、高剂量RHL组。除对照组外,其余各组小鼠每天腹部皮下注射D-半乳糖100 mg·kg^-1,持续8周,对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水,低和高剂量RHL组小鼠分别每天1次灌胃25和50 mg·kg^-1的RHL。观察各组小鼠一般状况,计算肾脏指数;检测血清和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;HE染色行肾脏组织病理学检查;Western blotting法检测肾脏衰老相关蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏指数降低 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高 (P<0.05);与模型组比较,RHL组小鼠肾脏指数升高 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05)。肾脏病理组织学检查,与衰老模型组小鼠比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞水肿减轻,且存在剂量依赖性。Western blotting法检测,与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平降低(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平升高(P<0.05);与衰老模型组比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: RHL通过抑制氧化应激、肾小管上皮细胞水肿和调控衰老相关基因的表达来发挥对衰老小鼠肾脏的保护作用。     

牛磺酸保护心肌缺血-再灌注损伤的研究进展

缺血-再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion Injury,IRI)主要由细胞内高渗肿胀、Ca2+超载和氧化应激引起。牛磺酸是体内一种含量丰富的β-氨基酸,可从多个方面保护心肌细胞。作为渗透因子,牛磺酸的外流有利于细胞内的渗透压下降,维持细胞容量。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)家族的多个信号通路参与Ca2+超载诱导的心肌细胞凋亡,补充牛磺酸可抑制上述凋亡信号。牛磺酸通过修饰线粒体tRNA可促进线粒体编码蛋白质的合成,改善线粒体功能和细胞能量代谢,减少自由基形成,保护缺血-再灌注心肌。总之,牛磺酸对缺血-再灌注心肌的保护具有重要的临床意义,但剂量和时间需要精细调控。     

肿瘤治疗电场在胶质母细胞瘤治疗中的研究进展

胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)是一种侵袭性脑恶性肿瘤,预后不良。目前的治疗方法仍然是以外科手术、放疗和化疗为主的综合治疗。但即使采用最佳治疗方案,患者的5年生存率也很低,而且不良反应较大。肿瘤治疗电场(tumor treating fields, TTFields)是一种低强度交变电场,可通过抑制细胞有丝分裂发挥抗肿瘤作用。最早是美国食品和药品监督管理局(FDA)批准的一种适用于新诊断或复发性胶质母细胞瘤的新型治疗方法。在我国《脑胶质瘤诊疗规范(2018年)》中,肿瘤电场治疗也被推荐用于新发胶质母细胞瘤(1级证据)和复发高级别脑胶质瘤(2级证据)。目前TTFields抗癌技术在国内尚未开展,仅在美国、日本、以色列等少数国家开展,还有许多相关研究仍处在试验阶段。本文仅就TTFields在GBM治疗中的研究进展做一综述。     

力达霉素诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡和周期阻滞

目的研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制。方法处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量。结果细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性。不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase(PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P0.05)。结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究。     

缺血后处理对大鼠肢体缺血再灌注后肾细胞凋亡的抑制作用

目的：观察缺血后处理对大鼠肢体缺血再灌注（LIR）后肾组织细胞凋亡的影响,探讨其可能机制。方法：30只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理加再灌注组（I-postC组）,每组10只。建立大鼠肢体缺血再灌注（LIR）模型,即橡皮带环绕大鼠双后肢根部阻断血流4h再恢复血流灌注4h。对照组大鼠仅松弛环绕橡皮带不阻断血流,I-postC组大鼠则在再灌注前附加反复3次缺血5 min-再灌注5 min操作,即缺血后处理。全自动生化分析仪测各组大鼠血浆肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和C反应蛋白（CRP）水平;免疫组织化学法检测大鼠肾组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,采用自动图像分析系统统计其定量结果并计算Bcl-2/Bax比值;TUNEL染色后在激光共聚焦显微镜下观察肾组织细胞凋亡情况,电镜下观察肾组织超微结构。结果：与对照组比较,IR组和I-postC组大鼠血浆Cr、BUN和CRP水平均明显增高（P<0.01）;与IR组比较,I-postC组大鼠血浆Cr、BUN和CRP水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,IR组和I-postC组大鼠肾组织中Bax和Bcl-2表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中Bax表达水平降低（P<0.05）,Bcl-2表达水平升高（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值升高（P<0.05）。激光共聚焦显微镜下观察,与对照组比较,IR组大鼠肾组织中凋亡细胞明显增多;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中凋亡细胞明显减少。透射电镜下观察,对照组大鼠肾组织细胞结构清晰完整;IR组大鼠肾组织中肾近曲小管上皮细胞核固缩,溶酶体和致密颗粒沉积增多,线粒体数目减少,部分线粒体嵴断裂或模糊,肾小球足突细胞突起不规则、融合,有空泡现象,粗面内质网扩张;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中肾小管上皮细胞及肾小球损伤有一定程度改善。结论：LIR可诱发大鼠肾组织细胞凋亡,缺血后处理可抑制肢体缺血再灌注后的肾细胞凋亡,对改善大鼠肾功能有一定作用。     

缺血后处理对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤的保护作用及其机制

目的: 观察缺血后处理(I-postC)对大鼠肢体缺血再灌注(LIR)后肺损伤的影响,探讨I-postC的器官保护作用及可能机制。方法: 24只Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组(IR组)和I-postC组(n=8)。橡皮带结扎动物双后肢根部4h后松解橡皮带恢复血流灌注4h,制作大鼠肢体缺血再灌注动物模型。对照组橡皮带松弛环绕大鼠双后肢根部,不阻断血流。I-postC组大鼠在血流再灌注前,行缺血5 min-再灌注5 min,重复3次,再恢复血流灌注4h。实验结束留取血液及肺组织标本,测定各组大鼠血液中性粒细胞CD18阳性细胞百分率、血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)和P-选择素(P-selectin)水平以及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和P-selectin水平,测定各组大鼠动脉血气指标氧分压(PaO₂)和二氧化碳分压(PaCO₂),光镜及电镜下观察各组大鼠肺组织的形态学改变。结果: 与对照组比较,IR组大鼠外周血中CD18阳性细胞百分率明显升高(P<0.01);血浆和肺组织中sICAM-1及P-selectin水平均升高(P<0.01);肺组织中MPO活性升高(P<0.01);PaO₂和PaCO₂明显降低(P<0.01)。IR组大鼠肺组织镜下可见肺间质内血管扩张、充血,中性粒细胞浸润,血管周间隙增大,肺泡间隔增宽,肺泡腔内有渗出液,支气管上皮细胞脱落坏死。与IR组比较,I-postC组上述生化指标检测值明显降低(P<0.01),PaO₂和PaCO₂明显升高(P<0.01);血浆及肺组织炎性因子活性降低(P<0.01);镜下可见肺组织损伤减轻。结论: I-postC可通过抑制炎症反应减轻大鼠LIR后的肺损伤。