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无环鸟苷亲脂性前体药物脂质体的制备及体外抗病毒活性(英文) 总被引:2,自引:0,他引:2
本文通过将无环鸟苷(acyclovir,简称ACV)2’位羟基分别与月桂酰氯或棕榈酰氯进行酯化反应,制得亲脂性前体药物无环鸟苷月桂酸酯和无环鸟苷棕榈酸酯(分别简称为C12-ACV和C16-ACV),使脂质体包封率从ACV的29.9%提高到C12-ACV的95.6%和C16-ACV的97.1%;漏泄实验表明在4℃透析60h后,一半以上的ACV从脂质体中漏泄,而C12-ACV和C16-ACV的滞留率分别为70%和80%;体外抗疱疹病毒的试验中,在最低试验浓度0.044μmol/L时,ACV不显示抗病毒活性,而C16-ACV脂质体抑制细胞病变率达75%,说明前体药物通过与脂质体脂膜的结合增加了药物的进入细胞能力,从而提高了ACV的抗病毒能力。 相似文献
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人重组C3片段通过IL-2自分泌效应对CTLL-2细胞产生促增殖作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究补体C3片段的体外生物学活性及其作用机理,进一步探讨C3片段与免疫细胞的关联。方法利用重组DNA技术表达纯化C3活性片段(命名为C33),观察其对IL-2依赖性的小鼠杀伤性T细胞株CTLL-2细胞的促增殖效应,并通过抗体封闭途径和分子杂交技术研究C33作用的机理。结果发现C33蛋白对CTLL-2细胞具有明显的促增殖作用,并呈剂量依赖关系;这一作用能够部分地被抗小鼠CD11b抗体所封闭,能够完全被抗小鼠IL-2抗体所封闭;分子杂交显示C33蛋白能够明显刺激CTLL-2细胞的IL-2mRNA表达。结论人重组C3片段C33可通过IL-2的自分泌效应对CTLL细胞产生促增殖作用,补体受体CR3参与这一作用。 相似文献
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目的:了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法.方法:采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化.结果:定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型.定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同.结论:该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术. 相似文献
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抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用抑制性底物杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH),以BXSB狼疮小鼠为模型,研究系统性红斑狼(SLE)发病相关基因。方法:分离BXSB和C57-BL-6小鼠骨髓细胞,mRNA,反转录构建cDNA文库,利用技术研究BXSB小鼠差异表达基因。结果:获得了12个阳性克隆,其中有3个克隆编码TCR、MHCⅡ类分子及逆转录病毒基因表达产物,均 相似文献
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人重组IL-8在小鼠骨髓瘤细胞的表达和鉴定北京医科大学免疫学系周宝宏,马大龙,袁勇,宋泉声,狄春辉,张颖妹IL-8是一种重要的细胞因子,属于趋化素(Chemokine)家族,可趋化粒细胞和T细胞,促进炎症反应。有报道局部注射人重组IL-8可促进肿瘤浸... 相似文献
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目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达. 相似文献
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无环鸟苷亲脂性前体药物脂质体的制备及体外抗病毒活性(英文) 总被引:5,自引:0,他引:5
本文通过将无环鸟苷(acyclovir,简称ACV)2’位羟基分别与月桂酰氯或棕榈酰氯进行酯化反应,制得亲脂性前体药物无环鸟苷月桂酸酯和无环鸟苷棕榈酸酯(分别简称为C_(12)-ACV和C_(16)-ACV),使脂质体包封率从ACV的29.9%提高到C_(12)-ACV的95.6%和C_(16)-ACV的97.1%;漏泄实验表明在4℃透析60h后,一半以上的ACV从脂质体中漏泄,而C_(12)-ACV和C_(16)-ACV的滞留率分别为70%和80%;体外抗疱疹病毒的试验中,在最低试验浓度0.044μmol/L时,ACV不显示抗病毒活性,而C_(16)-ACV脂质体抑制细胞病变率达75%,说明前体药物通过与脂质体脂膜的结合增加了药物的进入细胞能力,从而提高了ACV的抗病毒能力。 相似文献
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白细胞介素-2-乙肝病毒前S抗原融合蛋白在真核细胞中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
为了协同人白细胞介素-2(IL-2)与乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)前S抗原(preSAg)的生物学功能,探索能打破持续性感染者对HBV表面抗原(HBsAg)的免疫耐受,诱导机体对HB-sAg和preSAg产生体液和细胞免疫应答的基因免疫与治疗药物,用基因重组方法构建了IL-2和HBV完整preSAg的真核表达嵌合基因及表达质粒pCWIIP。pCWIIP转染的Cos-7细胞能分泌表达IL-2-preS融合蛋白,其表达效率与pCIIL-2转染的细胞表达IL-2一致,细胞上清中IL-2活性单位大于3×103u/ml,并用酶免疫实验法(EIA)检测了preSAg,而其细胞裂解液中IL-2活性很低,preSAg未检测到。本文结果说明preSAg2~19位氨基酸序列的滞留效应是可以克服的。该发现不仅为构建带完整preSAg的新型乙肝疫苗和特异性免疫治疗剂提供了理论与实验依据,而且对蛋白质分泌表达调控的研究也有一定意义。 相似文献
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目的:了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法。方法:采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化。结果:定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型。定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同。结论:该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术。 相似文献
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目的:CMTM1-v17是我室克隆的人类新基因,为进一步研究CMTM1-v17的功能,需制备高纯度的CMTM1-v17的抗体。方法:根据生物信息学分析的结果,用PCR法扩增人CMTM1-v17分子C端的cDNA片段(编码118~149位氨基酸),亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX-4T-2上。将重组质粒pGST-CMTM1-v17导入大肠杆菌BL21,诱导表达GST-CMTM1-v17 C端融合蛋白,经GST亲合层析、凝血酶切割后获得CMTM1-v17 C蛋白作为抗原免疫家兔制备抗血清。抗血清经抗原亲合层析后用Western blot和免疫组化方法进行鉴定。结果:通过重组表达获得抗原蛋白,免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗CMTM1-v17抗体,该抗体能检测到CMTM1-v17超表达和细胞内源性的蛋白。结论:成功制备了抗CMTM1-v17的多克隆抗体,对进一步研究CMTM1-v17的功能提供了一个有用的工具。 相似文献