检验实训基地的建设和启示

实训基地是高等职业院校建设的重要内容,我校检验实训基地的建设取得了一定的成绩。拥有比较完善的实训场所和设备,但需尚进一步加强内涵建设,不断满足实训需要,还需进一步明确实训基地定位,推进实训课程体系改革,打造专兼结合的专业教学团队,扩大实训基地社会服务功能。     

梅毒螺旋体Tp0136活性肽段的可溶性表达、纯化及鉴定

目的 筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法 通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段(Tp0136B)替代全蛋白.将Tp0136B基因插入到pET22b(+)上,在E.coli BL21中表达.镍离子亲和色谱纯化表达产物,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以重组Tp0136B蛋白为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果 重组工程菌可溶性表达相对分子质量约为28×103的rTp0136B,表达率为21%,制备得到纯度大于98%的rTp0136B.纯化的rTp0136B能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:16.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为85.5%.结论 重组表达的Tp0136活性肽段具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.

Abstract：

Objective To express and purify recombinant Tp0136 epitope fragment, and study the immunity activity. Methods The Tp0136 selective fragment(Tp0136B) gene was devised by the surface property analysis, solvent-accessible suface calculateions, secondary structure function region analysis, and was inserted between the sites of Nde Ⅰ and Not Ⅰ in pET22b ( + ) . The recombinant plasmid was expressed in E. coli BI21. After nickel ion metal affinity chromatography, the antigenic and immune reactivity of rTp0136B was confirmed. Then indirect ELISA with the rTp0136B as coating antigen was performed to detect the anti-Tp0136 antibody in sera from 100 normal human controls and 131 primary syphilis patients. Results The rTp0136B was soluble expressed with a molecular weight of about 28 000 and was obtained with a purity of ＞98% by chromatography. Western blot proved that the rTp0136B could specifically react with anti-Tp0136 polyclonal antibody. Specific humoral response was elicited by the recombinant protein in Japan negative. The positive detection rate in sera from primary syphilis patients was 85.5%. Conclusion This result suggested that the recombinant Tp0136 epitope fragments have a satisfactory immunocompetence,which may have applications in the serodiagnosis of primary syphilis.     

fliC基因在快速分型鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的应用

目的:探讨沙门菌1相鞭毛蛋白抗原fliC基因在快速分型鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的应用。方法:根据伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白fliC-d和fliC-a基因以及菌体抗原rfbS基因的核酸序列,设计针对fliC-d、fliC-a及rfbS基因的3对特异性引物,采用多重PCR法进行检测。结果:实验结果显示,伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌分别在750 bp和329 bp处扩增出2条特异性目的条带,在258 bp处扩增出1条相同条带,非伤寒沙门菌株和甲型副伤寒沙门菌株均为阴性。结论:fliC基因检测可用于伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的分型鉴定,而rfbS基因则无助于分型鉴定。     

甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC-a基因的克隆、原核表达及鉴定

目的:克隆甲型副伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白抗原(H1抗原)fliC-a基因,构建原核表达系统并鉴定重组蛋白的抗原性。方法:PCR方法扩增fliC-a基因,克隆到质粒pET-42a构建原核表达载体pET-fliC-a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白rfliC-a表达,用SDS-PAGE鉴定rfliC-a,Western blot和双向免疫扩散法鉴定rfliC-a的抗原性和免疫原性。结果:成功表达并纯化获得相对分子量为14.4 kDa的重组蛋白rfliC-a,rfliC-a能与兔抗甲型副伤寒沙门菌全菌血清发生特异性结合,免疫家兔获得高效价抗体。结论:成功构建了fliC-a基因原核表达系统,所表达的rfliC-a具有良好的抗原性。     

脱乙酰基利福喷丁抗结核杆菌生长活性的研究

脱乙酰基利福喷丁是药物利福喷丁的衍生物,而利福喷丁目前因其具有良好的疗效及较小的毒副作用而成为一线抗结核病的治疗药物[1].但临床上已发现耐利福喷丁的结核杆菌[2].为了探讨和研究脱乙酰基利福喷丁是否具有与利福喷丁相似或更强的抗结核杆菌生长活性的作用[3],我们采用二倍试管稀释法和小鼠半数存活时间(ST50)检测了脱乙酰基利福喷丁和利福喷丁体内、外抗人型、牛型和草型结核杆菌生长活性的作用.     

女性尿路感染病原菌分布及耐药性监测

目的:了解女性尿路感染病原菌的分布及耐药性,为临床治疗提供可靠的依据。方法:应用回顾性调查分析方法,对2002年1月～2005年1月杭州市某医院住院及门诊女性尿路感染患者尿培养分离出的617株细菌进行鉴定和耐药分析。结果:女性尿路感染菌株以大肠埃希菌为主,占55.91%。其次为肠球菌属、变形菌属、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属及真菌。肠杆菌科细菌除对亚胺培南保持100%敏感外,对其他抗生素耐药率均呈上升趋势。革兰阳性球菌耐药率也相当严重,仅万古霉素对革兰阳性球菌敏感率为100%。结论:女性尿路感染的主要病原菌为肠杆菌科细菌。必须重视女性尿路感染病原菌及其耐药性监测,从而合理使用抗生素。     

中药结核丸对结核分枝杆菌体内外抗菌效果的观察

目的检测中药结核丸的体内外抗结核分枝杆菌效果。方法建立结核分枝杆菌H37RV株小鼠感染模型。以乙胺丁醇为对照药,采用二倍试管稀释法测定中药结核丸对结核分枝杆菌H37RV株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlie株的体外最低抑菌浓度(MIC);以半数存活时间(ST50)为指标,检测各药物对结核分枝杆菌H37RV株感染小鼠的体内抗菌效果。结果中药结核丸对结核分枝杆菌H37RV株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlie株的MIC分别为1024、1024和2048μg/ml,对照药乙胺丁醇MIC则均分别为1μg/ml。小鼠感染对照组ST50为13d。中药结核丸对结核分枝杆菌感染小鼠的ST50分别为16d(32mg/d/mouse)、15d(16或8mg/d/mouse)、14d(4mg/d/mouse)和13d(2或1mg/d/mouse),对照药乙胺丁醇对结核分枝杆菌感染小鼠的ST50分别为大于28d(1～4mg/d/mouse)、24d(0.5mg/d/mouse)和19d(0.25mg/d/mouse)。结论中药结核丸体外抑制结核分枝杆菌的作用较弱,但剂量≥4mg/只小鼠时有明显的体内抗结核分枝杆菌活性。     

中药结核丸对结核分枝杆菌体内外抗菌效果的观察

目的检测中药结核丸的体内外抗结核分枝杆菌效果.方法建立结核分枝杆菌H37Rv株小鼠感染模型.以乙胺丁醇为对照药,采用二倍试管稀释法测定中药结核丸对结核分枝杆菌H37Rv株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlie株的体外最低抑菌浓度(MIC);以半数存活时间(ST50)为指标,检测各药物对结核分枝杆菌H37Rv株感染小鼠的体内抗菌效果.结果中药结核丸对结核分枝杆菌H37Rv株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlie株的MIC分别为1024、1024和2048μg/ml,对照药乙胺丁醇MIC则均分别为1μg/ml.小鼠感染对照组ST50为13d.中药结核丸对结核分枝杆菌感染小鼠的ST50分别为16d(32mg/d/mouse)、15d(16或8mg/d/mouse)、14d(4mg/d/mouse)和13d(2或1mg/d/mouse),对照药乙胺丁醇对结核分枝杆菌感染小鼠的ST50分别为大于28d(1～4mg/d/mouse)、24d(0.5mg/d/mouse)和19d(0.25mg/d/mouse).结论中药结核丸体外抑制结核分枝杆菌的作用较弱,但剂量≥4mg/只小鼠时有明显的体内抗结核分枝杆菌活性.     

食管癌外照射综合高剂量率后装治疗价值的探讨

目的：探讨食管癌外照射加腔内后装治疗的价值及后装治疗合适的每次剂量与总剂量。方法：１９９２年１０月至１９９３年５月１１２例经病理证实的食管癌患者，外照射加腔内照射５２例，单纯外照射６０例，分组比较。并将综合组的剂量分级进行生存率为４１．６％、１８．３％、８．３％。经统计学处理有明显差异。其中病变长度小于或等于５ｃｍ外照射加后装的病便１、３、５年生存率比单纯外照射明显增高，统计学有显著性差异。崦长度     

脱乙酰基利福喷丁抗结核杆菌生长活性的研究

目的　探讨和研究脱乙酰基利福喷丁体内及体外抗结核杆菌生长活性的作用。方法　测定脱乙酰基利福喷丁抗人型、牛型、草型结核杆菌的最低抑菌浓度 (MIC10 0 )及小鼠半数动物存活时间 (ST50 )。并以利福喷丁作为对照药物。结果　脱乙酰基利福喷丁抗人型、牛型、草型结核杆菌的最低抑菌浓度 (MIC10 0 )分别为 2mg/L ,2mg/L及 0 .2 5mg/L(利福喷丁的MIC10 0 分别为 2mg/L ,2mg/L及 0 .5mg/L)。 10～ 4 0mg/kg剂量的利福喷丁组及脱乙酰基利福喷丁组小鼠的ST50 均超过 2 8d ;2 .5mg/kg剂量和 5 .0mg/kg剂量的脱乙酰基利福喷丁组小鼠的ST50 分别为 16d和 2 7d(而同剂量的利福喷丁组的小鼠ST50 分别为 18d和 18d) ;感染对照组小鼠的ST50 为 13d。结论　脱乙酰基利福喷丁与利福喷丁比较 ,具有相似及良好的体内外抗结核杆菌生长活性的作用。