DNA探针的高效标记和哺乳动物细胞转化子的检测

本实验采用随机引物法标记探针DNA.探针DNA加热变性成单链,以单链DNA为模板,六聚脱氧核苷酸为引物,在DNA多聚酶I大片段的作用下进行放射性标记.标记探针的比放射性达10~8cpm/μg DNA以上.放射性底物的掺入率为60%.用该方法标记的人高度重复顺序探针,可以检出微微克水平的阳性分子.与人HeLa S_3细胞DNA转化的小鼠LTK~+细胞DNA打点杂交呈阳性,与未经转化的小鼠LTK~-细胞DNA杂交为阴性,证明小鼠转化细胞中存在HeLa细胞DNA,DNA转化是成功的.     

阿德福韦二吡呋酯在猕猴体内的药代动力学及在大鼠体内的组织分布

目的　研究了新型抗病毒药物阿德福韦二吡呋酯 (ADV)po给药后在动物体内的吸收、分布、代谢和消除过程。方法　采用液相色谱质谱联用方法测定样品中的药物浓度。结果　猕猴po或iv给药ADV后 ,血液中只检测到活性代谢物阿德福韦(ADF) ,因此用ADF的血药浓度 时间曲线来估算药代动力学参数。猕猴poADV后 ,tmax为 0 .99～ 1.70h ,t1/ 2 为 1.6 4～ 5 .4 3h ,Cl为 9.14～ 13.91L·h- 1·kg- 1,绝对生物利用度为 19.9%。连续 7dpo给药(每日 1次 )后未发现药物累积现象。肾脏和肝脏中ADF的含量仅次于胃肠内容物。ADF主要经肾脏排出体外。结论　在给药量范围内表现为线性动力学 ,在靶器官肝脏中分布较多 ,主要从尿液中排出。     

用大豆磷脂激活Nitchmann沉淀B中凝血酶

凝血酶在人体凝血机制中起着重要作用,以纤维蛋白原及凝血酶作为主要成分的纤维蛋白止血胶在国外已被广泛用于局部和手术中的止血和做粘合剂[1].制备凝血酶的方法是采用先将凝血酶原复合物激活,从中分离纯化凝血酶.激活用的凝血活酶多数采用兔、牛等动物脑磷脂,一旦动物脑磷脂进入人体有可能引起种间病毒的传播,本实验室应用大豆磷脂代替动物脑磷脂激活Nitchmann沉淀B中凝血酶,获得较好的激活效果,这种方法既经济,又避免了种间病毒的传播.     

用大豆磷脂激活Nitchmann沉淀B中凝血酶

凝血酶在人体凝血机制中起着重要作用,以纤维蛋白原及凝血酶作为主要成分的纤维蛋白止血胶在国外已被广泛用于局部和手术中的止血和做粘合剂[1].制备凝血酶的方法是采用先将凝血酶原复合物激活,从中分离纯化凝血酶.激活用的凝血活酶多数采用兔、牛等动物脑磷脂,一旦动物脑磷脂进入人体有可能引起种间病毒的传播,本实验室应用大豆磷脂代替动物脑磷脂激活Nitchmann沉淀B中凝血酶,获得较好的激活效果,这种方法既经济,又避免了种间病毒的传播.     

西格列他钠的体外代谢

目的研究拟治疗2型糖尿病的创新化合物西格列他钠(chiglitazar)的体外代谢速率、代谢酶和代谢转化,为临床应用提供参考。方法采用高效液相-紫外检测(HPLC-UV)的方法测定肝微粒体孵育液中西格列他钠的浓度,用特异性抑制剂的方法分析化合物的代谢酶,用大鼠肝微粒体体外研究西格列他钠可能的代谢产物和代谢途径。结果建立了可靠的测定大鼠肝微粒体中西格列他钠的HPLC分析方法;体外半衰期方法求得西格列他钠的t1/2为27.2min,固有清除率(Clint)为50.9mL.min-1.g-1蛋白;代谢酶研究表明,西格列他钠主要被P450酶中的CYP3A亚型代谢;西格列他钠在大鼠肝微粒体中的代谢主要为羟基化和O-脱烷基化,采用LC/MSn分析共发现了8个代谢物。结论西格列他钠是代谢活跃的化合物,有必要研究代谢产物的活性及临床注意药物相互作用。     

重组人生长激素在猕猴体内相对生物利用度研究

目的评价重组人生长激素（rhGH）冻干粉针剂受试制剂与参比制剂在猕猴体内的相对生物利用度。方法猕猴随机分成两组，运用交叉设计方法，先后接受皮下注射受试制剂或参比制剂0．5IU·kg^-1，测定不同时间点生长激素血药浓度，并进行相关药动学参数分析。结果受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数Tmax分别为（3．0±1．4）、（2．3±1．8）h；Cmax分别为（173．2±79．0）、（159．0±41．3）μg·L^-1；AUC（0-12h）分别为（1139±258）、（1108±390）μg·h·L^-1；结论受试制剂的相对生物利用度为（107±16）％。     

自组装肽的止血应用

分子自组装作为一种普遍存在于生命体系中的现象,已成为化学、生物学、材料学和医学等多学科研究的交汇点。近年来,肽分子自组装技术的快速发展,使其在组织工程、药物缓释、仿生医学、美容领域、光学和电子产品开发等方面均显示出巨大的应用潜力,尤其自组装肽在脏器、神经与脑部出血创伤救治上的显著疗效,极大地推进行了其在材料科学和临床医学领域的应用。本文将对自组装肽在不同出血创伤模型中的止血效果与性能特点、作用机制、优缺点及其发展趋势做一综述。     

比格犬口服西格列羧的毒代动力学

目的研究治疗糖尿病新药西格列羧长期毒性剂量下,原形药物在比格犬体内的毒代动力学,以评价西格列羧的全身暴露水平,确定暴露水平与给药剂量和性别的相互关系。方法采用高效液相色谱-紫外检测的方法分析比格犬血浆中的药物浓度。结果比格犬每天给药1次(6,18和54 mg.kg-1)连续14 d,d 1给药后雌性比格犬的平均AUC(0-T)值为3.4,8.4和33.0 mg.h.L-1,雄性比格犬的平均AUC(0-T)值为4.2,5.9和32.3 mg.h.L-1,d 14给药后雌性比格犬的平均AUC(0-T)值为2.5,13.9和16.0 mg.h.L-1,雄性比格犬的平均AUC(0-T)值为2.0,18.6和15.5 mg.h.L-1,对所有的剂量水平和两种性别平均AUC(0-T)值大部分与剂量相关。平均cmax值大部分也与剂量相关增高,第1次给药后雌性比格犬的平均cmax值为0.45,1.59和4.93 mg.L-1,雄性比格犬的平均cmax值为0.94,1.43和8.69mg.L-1,d 14给药后雌性比格犬的平均cmax值为0.40,2.97和3.49 mg.L-1,雄性比格犬的平均cmax值为0.39,4.16和4.01 mg.L-1。平均tmax值为2~8 h,表明吸收比较缓慢。消除半衰期t1/2在1.6~5.7 h之间,大部分为2~3 h。结论西格列羧原形药物的全身暴露水平与给药剂量的相关性为:单次给药后正相关,连续14 d给药后中高剂量组的相关性不明显。     

低剂量γ射线诱导小鼠细胞不同辐射敏感株对基因突变适应性反应

作者用低剂量γ射线预照射同源但辐射敏感性不同的小鼠乳癌细胞ＳＫ－１和ＳＸ－９，观察其对随后较大剂量照射所引起ｈｐｒｔ基因突变的影响．结果，具有辐射抗性的ＳＲ－１细胞经５ｍＧｙ或１ｃＧｙ低剂量顶照射后，能显著降低随后３Ｇｙ照射诱发的ｈｐｒｔ基因突变频率．而ＤＮＡ双链断裂修复能力缺陷的电离辐射敏感细胞ＳＸ－９，经相同处理后，并不减轻随后的较大剂量照射所诱发的基因突变率．表明ＤＮＡ双链断裂修复缺陷的细胞，对低剂量辐射诱导的适应性反应能力差．     

老年人外周血淋巴细胞的DNA期外合成

在人体衰老过程中,机体各系统不断地发生变化,其中免疫系统的变化较为明显。淋巴细胞是免疫系统的主要细胞,研究其功能变化对研究衰老及抗衰老都具有重要意义。为此,我们选用外周血淋巴细胞为实验对象,用紫外线照射,造成细胞DNA损伤,在加入羟基脲抑制DNA半保留复制合成的前提下,通过~3H-TdR参入率测定人淋巴细胞DNA期外合成(un-scheduled DNA synthesis,UDS)的变化,以此来观察和比较不同年龄的人淋巴细胞DNA对损伤的修复能力。 1材料与方法 1.1细胞老年人无肿瘤和内分泌病病史,青年人为献血者,取出的静脉血肝素抗凝,然后用淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)分离出淋巴细胞。将细胞加到含植物血凝素(PHA)的1640培养液中,培养3天后测定