稳定敲低MYH10基因细胞株的建立

目的 构建稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株。方法 在293TX细胞中进行病毒的包装,用获得的高效价慢病毒感染COS-7细胞,通过免疫印迹和荧光显微镜,检测病毒感染后COS-7细胞MYH10蛋白表达的变化。结果 在构建的两种重组质粒中,MYH10-lentiviral shRNA-2在转染后表现出明显的干扰作用,感染后能明显下调COS-7细胞的MYH10蛋白表达。结论 病毒感染的COS-7细胞可明显抑制COS-7细胞内源MYH10的表达,说明了稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株的建立,为进一步研究MYH10在相关疾病中的功能奠定了基础。     

V2受体抑制剂：常染色体显性多囊肾病的新选择

常染色体显性多囊肾病（autosomal dominant polycystic kid-ney disease，ADPKD）是最常见的遗传性肾病（发病率1：1000），特征表现为双侧肾脏多发囊肿。超过50%的 ADP-KD 患者呈现缓慢进展至终末期肾病（ESRD），ESRD 通常发生在60岁以后。ADPKD 患者患 ESRD 的风险显著高于正常人群，占需要肾脏替代治疗患者总数的4%-10%，因此，早期对 ADPKD 患者肾脏囊泡生长进行干预对预防 ESRD 的发生具有重要的临床意义。     

常染色体显性多囊肾病的诊断、监测及治疗

正常染色体显性多囊肾病(ADPKD)患病率约为1‰~2‰,是最常见的遗传性肾病~([1])。ADPKD是西方导致终末期肾病(ESRD)的第4大病因,约占透析人数的5%~10%,约半数ADPKD患者于60岁前进入ESRD,主要依靠肾脏替代治疗维持生命~([2])。我国约有150万例ADPKD患者~([3])。ADPKD致病基因主要有两个,PKD1和PKD2。     

慢性肾衰竭小鼠模型的建立及生物学特征

目的：通过制备小鼠慢性肾衰竭（CRF）模型,观察小鼠的生物学特征,有助于研究CRF的发病机制,预防终末期肾病的发生.方法：30只6-8周龄C57雄性小鼠适应性饲养1周后,5/6肾切除法（5/6 NX）切除模型组左肾上下极,1周后切除右肾,6周后处死.动态观察小鼠一般情况、血清常规和生化指标、测量体重和血压变化,检测肾脏组织病理学的变化.结果：与假手术组和正常对照组相比,模型组小鼠6周后出现体重减低、血清高尿素氮、高肌酐、高磷、贫血、血压升高和尿量增多（均P〈0.05）.肾脏病理发现残肾单位代偿性肥大,系膜基质增生,胶原沉积增多.结论：5/6 NX是理想的CRF小鼠模型制作方法,CRF小鼠具有营养不良,高血压和钙磷代谢紊乱等特征.     

常染色体显性多囊肾病的预后评估及治疗

常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease, ADPKD)患病率为1‰~2‰, 属于罕见病, 临床主要表现为双侧肾囊肿且逐渐发展, 肾脏体积进行性增大, 肾功能逐步降低。PKD1基因突变约占81%, PKD2基因突变约占10.5%~22%。血管加压素(arginine vasopressin, AVP)和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)信号通路在ADPKD囊肿发展过程中发挥重要作用。近年来发表的梅奥风险评估模型和PROPKD(predicting renal outcome in polycystic kidney disease)评分是ADPKD较好的预后评估模型, 已成为临床医生决策的重要依据。通过拮抗AVP受体, 抑制cAMP通路的托伐普坦已成为ADPKD首个特异治疗药物, 可有效抑制总肾脏体积的增长和保护肾功能。药物的长期安全性仍需进一步研究。     

川芎嗪对人间皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的:研究川芎嗪注射液不同干预方法对人间皮细胞水通道蛋白-1表达的影响。方法:采用两种干预方式对人间皮细胞进行培养:含药血清培养组和直接加药培养组,分别加入不同浓度的葡萄糖乳酸盐腹透液及高低剂量的含药血清,进行细胞培养。采用R-T PCR法和Western blot法检测人间皮细胞水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP-1)的表达。结果:(1)与正常对照组相比较,经腹膜透析液刺激后,人间皮细胞AQP-1表达水平明显增加(P 0. 05),且葡萄糖浓度越高AQP-1表达量越显著(P 0. 05)。(2)运用PCR检测表明,予川芎嗪含药血清干预24 h后,高糖PDS+低浓度含药血清组和高糖PDS+高浓度含药血清组与高糖PDS组比较,AQP-1表达量均呈显著性下降(P 0. 05)。含药血清和直接加药两种不同药物干预方式间比较,高糖PDS+高浓度药物两组中,直接给药组较含药血清组AQP-1表达量下降更显著(P 0. 05)。(3) Western blot检测人间皮细胞AQP-1蛋白结果显示,在给予川芎嗪含药血清或直接加入2μg/ml和10μg/ml川芎嗪注射液培养24 h后,各药物干预组人间皮细胞AQP-1表达量均较1. 5%和4. 25%葡萄糖乳酸盐腹膜透析液组有所下降。而在含药血清和直接加药两种不同药物干预方式间比较发现,低糖PDS+低浓度药物两组中,直接加药组较含药血清组AQP-1表达量下降更显著(P 0. 05)。结论:含糖腹透液可刺激人间皮细胞内AQP-1的表达增加,川芎嗪具有拮抗含糖乳酸盐透析液刺激人间皮细胞AQP-1高表达的作用,且高剂量川芎嗪的作用优于低剂量。     

用于转化生长因子ββ/Smad信号转导通路抑制剂筛选的慢病毒报告载体的构建

目的 构建由转化生长因子β(TGF-β)诱导的含有Smad响应元件（Smad RE）和红色荧光蛋白mCherry或荧光素酶报告基因序列的慢病毒报告载体，为筛选TGF-β/Smad信号转导通路抑制剂提供有效工具。方法 合成UAS-Smad RE-Pmin-Gal4VP64-mCherry和UAS-Smad RE-Pmin-Gal4VP64-luciferase报告基因序列，分别将其插入经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后的pCDH-GFP-Puro-noCMV慢病毒质粒载体，获得响应TGF-β的含有Smad RE和mCherry或荧光素酶报告基因序列的慢病毒报告载体，分别命名为pCDH-USPG-mCherry和pCDH-USPG-luciferase。利用慢病毒三质粒包装系统在293FT细胞中分别包装出慢病毒并感染A549细胞（分别命名为USPG-mCherry A549和USPG-luciferase A549细胞），在倒置荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达，鉴定A549细胞是否被感染成功。用TGF-β(10μg·L-1)及其受体拮抗剂LY2109761(5μmol·...     

3例多囊肾病合并原发性IgA肾病病例分析

目的常染色体显性遗传多囊肾病（autosomal dominant polycystic kidney disease,AD-PKD）发病率为1／1000-1／400,是主要由PKD1或PKD2基因突变而引起的遗传性肾病。ADPKD合并IgA肾病（IgAnephropathy,IgAN）的病例临床上较为少见,可伴有肾病综合征。本研究旨在探讨ADPKD合并原发性IgAN的病理特点和治疗方案。方法对3例ADPKD并IgAN患者的临床表现、ADPKD家族史、实验室检查、病理诊断及预后进行回顾性分析。结果3例患者发病年龄31-53岁,均以少尿、水肿、大量蛋白尿为主要症状,肾穿刺活检术后诊断为1例HassII型IgAN和2例HassI型IgAN。病例1给予泼尼松联合环磷酰胺治疗,病例2给予泼尼松联合吗替麦考酚酯治疗,病例3单用泼尼松治疗。经过免疫抑制治疗后,患者大量蛋白尿和血尿均得到缓解。虽然患者随访时总肾脏体积仍出现增长,但长期肾功能保持良好。结论ADPKD伴大量蛋白尿根据囊泡位置尽可能开展肾活检。ADPKD并IgAN的患者应根据分型给予循证支持的免疫抑制治疗,可以减少蛋白尿,有助于预防肾衰竭的发生。