巨噬细胞甘露糖受体与配体亲和力检测方法的建立与应用

目的研究适用于巨噬细胞甘露糖受体(mannosereceptor,MR)与配体亲和力检测的方法,并用以检测魔芋葡甘露聚糖与MR亲和力的大小。方法采用腹腔冲洗法获得腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ),经纯化、鉴定后与异硫氰酸荧光标记的甘露糖基化的牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)孵育20min,分别加入D-甘露糖、提取、纯化的不同浓度的魔芋葡甘露聚糖以及ConA,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测Mφ表面甘露糖受体与配体的结合情况。结果①流式细胞仪辅以荧光显微镜能很好的对MR与配体的亲和力进行定性和定量检测;②MR与配体结合后可被甘露糖、魔芋葡甘露聚糖、ConA抑制,且魔芋葡甘露聚糖对其抑制能力最强。结论流式细胞仪辅以荧光显微镜是一种简便、快捷、准确的检测MR与配体亲和力的方法;魔芋葡甘露聚糖与MR的亲和力强于甘露糖和ConA,可能靶向作用于MR调节机体免疫功能。     

实验用猕猴CD3、CD4、CD8、CD20细胞阳性率的测定

CD3、CD4、CD8、CD20是重要的白细胞分化抗原,对于T细胞、B细胞的识别、黏附、分化具有重要作用.CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD20^＋细胞阳性率是基础免疫学和临床免疫学研究的重要指标.     

大鼠肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体与配体的亲和力比较

目的:探讨来源于不同组织肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体(macrophagemannosereceptor,MMR)与配体的亲和力差异。方法:采用支气管肺泡灌洗和腹腔冲洗法获得肺泡和腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ),经纯化、鉴定后与异硫氰酸荧光标记的甘露糖基化牛血清白蛋白(MFITCBSA)孵育20min,分别加入D甘露糖、D半乳糖、EDTA,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测甘露糖受体(mannosereceptor,MR)与配体的结合情况。结果:Mφ上存在MR,MR与配体的结合属于Ca2 依赖性,其结合可被D甘露糖、EDTA抑制,而不受D半乳糖的抑制;腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR。结论:腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR。