染料木黄酮对高脂饮食喂养大鼠肝脏脂质代谢和AMPK磷酸化的影响

目的探讨染料木黄酮（Gen）对高脂饮食喂养大鼠肝脂质代谢和肝脏腺苷酸环化酶蛋白激酶（AMPK）磷酸化的影响。方法36只大鼠适应性喂养1周后随机分为4组：正常对照组（正常组）、模型对照组（模型组）、Gen高剂量干预组（Gen高组）和Gen低剂量干预组（Gen低组）。正常组大鼠给予基础饲料D12450B（脂肪供能占10％）喂养,模型组给予D12492高脂饲料（脂肪供能占60％）喂养,Gen高组给予D12492高脂饲料喂养和8mg／kgGen灌胃干预,Gen低组给予D12492高脂饲料喂养和4mg／kgGen灌胃干预。持续喂养12周后,处死所有大鼠。取血和肝组织进行相关指标的检测。全自动生化检测仪检测血清和肝组织匀浆甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）水平,游离脂肪酸（FFA）试剂盒检测血清和肝组织匀浆FFA水平,Westernblot法检测肝组织总AMPK和磷酸化腺苷酸环化酶蛋白激酶（pAMPK）的表达。结果与正常组比,模型组大鼠肝脏血清和肝组织TG、TC、FFA及血清LDL—C明显升高（P〈0．05或P〈0．01）,肝组织pAMPK水平显著降低（P〈0．01）。与模型组相比,Gen低组大鼠血FFA、肝FFA和TG含量明显降低（P〈0．05或P〈0．01）;Gen高组大鼠血TC、TG、LDL—C、FFA和肝TG、FFA含量明显低于模型组大鼠（P〈0．05或P〈0．01）。与模型对照组相比,低、高剂量Gen干预均能显著上调pAMPK水平（P〈0．01和P〈0．05）;但各组大鼠肝组织总AMPK水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论染料木黄酮能够改善12周高脂饮食诱导的大鼠肝脂肪代谢紊乱,减轻肝脏脂质沉积,其作用机制可能与其增加pAMPK水平有关。     

染料木黄酮对油酸诱导脂肪变HepG2细胞糖脂水平和HMG-CoA还原酶的影响

目的研究染料木黄酮（genistein,Gen）对油酸（oleicacid,OA）诱导的脂肪变HepG2细胞内HMG．CoA还原酶水平以及糖、脂水平的影响。方法将HepG2细胞在含有0～50txmol／L的Gen、0．5mmol／L的OA的培养基内培养24h,收集细胞分别用试剂盒测定3．羟基．3．甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）、胆固醇（Tc）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）的含量;同时,收集培养基上清液,用试剂盒测定葡萄糖消耗量。结果Gen可降低细胞内HMG．CoA还原酶的水平和细胞对葡萄糖的消耗。提高细胞内TC和HDL．C含量。结论Gen能改善OA诱导的脂肪变HepG2细胞内的糖脂代谢情况。     

染料木黄酮对脂肪变HepG2细胞甘油三酯水平和Lipin 1表达的影响

目的 研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导的脂肪变HepG2细胞胞核内Lipin1水平以及培养基和胞浆内甘油三酯水平的影响.方法 在HepG2细胞中分别或联合加入0～640μmol/L的Gen,0～2.0 mmol/L的OA干预,用MTT法测定细胞活性,以确定适宜的OA建模和Gen的干预浓度.之后,采用OA建立HepG2细胞脂肪变模型,用Gen干预24h,收集培养基上清和细胞分别测定甘油三酯水平,Western blot检测胞核Lipin1的表达.结果0.5 mmol/L OA为造模最佳干预浓度,可同时提高培养基和细胞中甘油三酯的含量,10～50 μmol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的状态,并且呈现剂量效应关系(P＜0.05),同时,胞核内Lipin1水平增加(P＜0.05).结论 Gen能抑制OA诱导的HepG2细胞脂肪变,并可能与Lipin1的核转移有关.     

染料木黄酮对HepG2细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调控作用

目的探讨染料木黄酮（Gen）对HepG2人肝癌细胞胆固醇代谢和SREBP-2通路的调节作用。方法体外培养HepG2细胞,将HepG2细胞在含有0、0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen的培养液内分别培养24、48、72h后,用MTT法检测细胞增殖活性。用分别含0、0．01、1．00、10．00、50．00μmol／LGen的完全培养液培养HepG2细胞24h,收集细胞,分别进行细胞内总胆固醇（TC）含量检测、实时荧光定量PCR检测细胞低密度脂蛋白受体（ldlr）、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（hmgcr）基因的mRNA表达和蛋白印迹法检测核转录因子SREBP-2的表达。结果0．01、0．10、1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen分别作用于HepG2细胞24h,0．01、0．10、1．00μmol／LGen组细胞增殖率高于溶剂对照组（均P〈0．05）;作用48、72h,1．00、10．00、50．00、100．00μmol／LGen组细胞增殖率均低于溶剂对照组（均P〈0．05）。1.00、10．00、50．00μmoL／LGen与HepG2细胞共同孵育24h,HepG2细胞内TC水平分别为（1．81±0．15）、（2．29±0．17）、（2．88±0．08）mmol／L,均高于对照组[（1．44±0．17）mmol／L],且随着Gen浓度升高,呈增加趋势（R2=0．48,P〈0．01）;各Gen实验组的hmgcr和ldlr基因的mRNA表达水平随着Gen浓度升高而升高（R2分别为0．53、0．79,均P〈0．01）。1．00、10．00、50．00μmol／LGen组蛋白表达灰度值均高于对照组（均P〈0．01）。结论染料木黄酮能够调节细胞内胆固醇的代谢,其作用机制可能与调控SREBP-2通路有关。