掌叶半夏碱甲及其衍生物的合成

腺嘌呤(1a)与6-氯甲基吡啶衍生物(7a～c)在NaH/DMF中反应生成相应的6-氨基-9-(3-取代-6-吡啶)甲基-9H-嘌呤(3b～3d)。3c在酸性甲醇溶液中以Pd/c催化氢解得3a。3a～d的化学结构经光谱分析确证;其中3a为掌叶半夏碱甲。     

气相色谱-质谱法检测黑面神对大鼠肝肾机体代谢的影响

目的通过采用气相色谱-质谱法(GC-MS)结合代谢组学方法以阐明南方"傣族"少数民族治疗慢性支气管炎和炎症的民间药物黑面神(大戟科)对大鼠肝肾机体代谢的影响。方法将大鼠分为对照组、黑面神(2 g/kg)组和10%酒精处理组,连续给药7 d。第8 d,从3组大鼠收集肝脏和肾脏样本,衍生化处理后,进行GC-MS分析。结果根据肝脏和肾脏的代谢组学偏最小二乘法鉴别分析(PLS-DA),结果显示黑面神组与对照组和10%酒精处理组区别开来。在肝组织中,黑面神组与对照组之间没有发现差异,而黑面神组与10%乙醇处理组之间的核糖醇和D-葡萄糖含量差异有统计学意义(P0.05)。在肾组织中,黑面神组相对10%酒精处理组,硬脂酸含量升高(P0.05)。结论 PLS-DA结果表明,黑面神诱导代谢扰动,而10%的酒精也可能诱发代谢扰动。     

细胞色素P450 2C9药物代谢酶体外酶学活性检测新方法的建立

目的 建立一种基于COS-7细胞的细胞色素P450 2C9(CYP2C9)体外酶学活性检测的新方法.方法 以野生型CYP2C9*1基因的全长cDNA为模板,通过定点诱变方法获得突变型CYP2C9*2、*3及*13的cDNA全长,分别与分泌型荧光素酶Gluc内参基因一起导人pIRES载体的A、B多克隆位点,构建成双表达载体pIRES-Gluc-CYP2C9.利用Lipofectamine 2000瞬时转染COS-7细胞,48h后弃培养基,加入含100μmol/L Luciferin-H荧光底物的新鲜培养基,继续培养8h后利用Promega CYP2C9活性试剂盒及NEB Gluc检测试剂盒分别检测CYP2C9各型及内参Gluc的活性,用Western blot检测两种蛋白的表达量.结果 本研究成功构建了pIRES-Gluc-CYP2C9*1及其突变体*2、*3、*13的表达载体,通过检测CYP2C9特异性荧光素底物Luciferin-H的分解产物的荧光信号与分泌型荧光素酶Gluc的内参荧光信号的比值作为CYP2C9的体外酶学活性值,研究结果显示突变体CYP2C9 *2、*3、*13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C9*1的43.12％、8.15％和1.49％.结论 本研究成功建立了一种基于COS-7细胞的CYP2C9体外酶学活性检测的新方法,该方法操作简便、实验周期短,适于新突变体CYP2C9的快速活性检测及其代谢新药物或抑制剂的相关性研究.     

Cocktail法评价敌敌畏对大鼠CYP450亚型酶活性的影响

目的用Cocktail探针药物法评估敌敌畏对大鼠CYP450酶代谢活性的影响。方法将大鼠随机分为敌敌畏组和对照组。敌敌畏组给予腹腔注射12.5 mg/kg敌敌畏,对照组给予等体积生理盐水。然后灌胃给予5种探针药物(安非他酮、美托洛尔、非那西丁、睾酮和甲苯磺丁脲),用超高效液相色谱串联质谱法测定血浆探针浓度;同时分离肝脏,用PCR法测定5种亚型酶mRNA的表达量。结果敌敌畏组CYP1A2、CYP2D1和CYP3A2的AUC明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),而对CYP2B1和CYP2C11的药代动力学无显著影响;CYP2D1和CYP3A2的mRNA表达水平均显著降低(P0.05),CYP1A2的mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而CYP2C11和CYP2B1的mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论结合PCR结果,腹腔注射敌敌畏可以抑制大鼠CYP2D1和CYP3A2的酶活性。