纹带棒状杆菌多位点序列分型及应用

目的 建立纹带棒状杆菌的多位点序列分型（MLST）方法,探讨临床分离纹带棒状杆菌的种群结构和遗传进化关系。方法 筛选出7个管家基因（gyrA、gyrB、hsp65、sodA、secA1、rpoB、16S rRNA）,设计引物并进行PCR扩增和测序,测序所得序列通过SeqMan软件进行拼接。采用DnaSP 5.10.01软件、Splits tree 4.14.2软件对管家基因的多样性及基因重组特征进行评价;采用MEGA 7.0.14软件基于序列型别（ST）采用M-L法构建系统发育树,采用BioNumerics软件基于ST特征值构建最小生成树,并用eBURST软件分析ST间遗传进化关系。结果 所选的7个位点在所有试验菌株中均获得了预期的扩增产物;Splits tree表明所有纹带棒状杆菌的聚类一致,提示基因重组是推动纹带棒状杆菌进化的潜在动力;MLST将344株纹带棒状杆菌分成72个STs,85.7%的菌株形成克隆复合体（CC）结构,CC19形成了优势克隆复合体,但包含菌株数最多的ST为该克隆复合体中的ST16。ST具有一定的地域聚集性且与分离年份具有一定的相关性。结论 我国纹带棒状杆菌呈现高度的遗传多样性,CC19为优势克隆复合体。本研究建立的MLST分型方案可用于纹带棒状杆菌的分型,但尚需优化改进。     

自噬相关蛋白ATG16L1在肠上皮细胞炎症因子表达中的作用

背景:自噬相关基因ATG16L1单核苷酸多态性(SNP)与克罗恩病(CD)发病风险密切相关。目的:探讨ATG16L1在肠上皮细胞炎症因子表达中的作用。方法:利用人结肠腺癌细胞株Caco-2构建体外肠上皮细胞模型,予ATG16L1 siRNA干预,并以白细胞介素-1β(IL-1β)诱导炎症因子表达。采用real-time PCR和蛋白质印迹法验证ATG16L1 siRNA转染的有效性,real-time PCR和ELISA法检测Caco-2细胞IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达。结果:研究使用的siRNA能有效抑制ATG16L1表达。IL-1β可诱导Caco-2细胞IL-6、IL-8、MCP-1 mRNA和蛋白表达上调(P0.05),沉默ATG16L1可使IL-1β诱导的上述炎症因子表达进一步增高(P0.05)。结论:在肠上皮细胞中,ATG16L1可负性调控IL-1β诱导的炎症因子表达,在维持肠黏膜免疫系统稳态中发挥重要作用。     

中国El Tor生物型霍乱弧菌流行株中非溶血变异菌株分布及进化特征

目的分析第7次霍乱大流行期间中国O1群El Tor型霍乱弧菌流行菌株中非溶血变异菌株的流行分布特征以及进化特征。方法选择1961年以来不同霍乱流行期的O1群El Tor型产毒菌株,测定溶血表型并分析其时间分布特点。 比较菌株溶血素基因hlyA的序列变异及不同序列型的分布,构建这些菌株的核心基因组进化树,分析非溶血株在进化分支中的分布及克隆化特征。结果在第7次霍乱大流行的中国霍乱流行中,溶血素基因hlyA在第1次流行高峰期后,出现了明显的序列型转换。 非溶血株主要出现在始于20世纪70年代的第2次流行中,并成为多见的变异型。 非溶血菌株分布在不同流行期和流行克隆中,没有形成单一的克隆化。 但部分非溶血菌株克隆引起数年的流行扩散。结论O1群El Tor型菌株的非溶血变异独立于基因组逐年累积的克隆进化,很可能是一种随机性较强的变异。     

小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶基因多态性及尿素酶活性分析

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶基因的多态性以及不同致病力菌株尿素酶活性之间的关联性。方法 选取43株不同致病能力的小肠结肠炎耶尔森菌用PCR扩增尿素酶基因并进行序列测定。连同4株NCBI上尿素酶基因参考序列一起进行比对和构建聚类树。同时选取8株不同致病力的小肠结肠炎耶尔森菌进行尿素酶活性实验。 结果 在低致病性小肠结肠炎耶尔森菌中,全部的18株O∶3血清型菌株的尿素酶基因7个开放读码框(ureABCEFGD)的基因序列完全一致;在全部17株O∶9血清型菌株中,尿素酶基因7个开放读码框(ureABCEFGD)的基因序列完全一致的有16株,仅1株2/O∶9(NX1997-IE419)与其他血清型菌株的尿素酶基因序列不同;高致病性的O∶8血清型小肠结肠炎耶尔森菌以及非致病菌的尿素酶基因序列与低致病性O∶3、O∶9血清型菌株的尿素酶基因序列不同且各菌株之间基因序列差异也较大。尿素酶活性实验显示不同致病能力的小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶活性存在多样性,无明显的规律发现。结论 低致病性O∶3、O∶9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶基因分别表现出高度的保守性,NX1997-IE419的尿素酶基因可能是由O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶基因演变而来。高致病性的1B/O∶8小肠结肠炎耶尔森菌及非致病性小肠结肠炎的尿素酶基因相对不保守。尿素酶活性试验提示我们小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶活性大小与其致病性的强弱可能无关联。     

2014—2021年山东省某医院血流感染铜绿假单胞菌的耐药及分子流行病学特征

目的探讨引起血流感染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa)的耐药性、毒力基因携带情况以及多位点序列分型(MLST)的型别。方法回顾性收集2014年11月至2021年12月山东第一医科大学第一附属医院引起血流感染的铜绿假单胞菌94株。使用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪对铜绿假单胞菌进行菌种鉴定, 使用Vitek 2 Compact 全自动细菌药敏分析系统对铜绿假单胞菌进行抗菌药物敏感性实验。应用聚合酶链式反应(PCR)方法对18种常见毒力基因的携带情况进行检测。应用MLST对分离菌株进行分型。采用卡方检验对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌(carbapenem resistantpseudomonas aeruginosa, CRPA)和碳青霉烯类抗生素敏感的铜绿假单胞菌(carbapenem susceptiblepseudomonas aeruginosa, CSPA)菌株的耐药及毒力基因的携带情况进行比较。结果在94株铜绿假单胞菌中, 有19株(20.2%)为多重耐药(MDR)菌株, 其中有17株为碳青霉烯类抗菌药物耐药株...     

血流感染肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析

目的:了解山东第一医科大学第一附属医院血流感染肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药特征,为临床抗感染治疗提供理论依据。方法:收集山东第一医科大学第一附属医院2017年~2019年引发血流感染的肺炎克雷伯菌菌株,使用MALDI-TOF MS进行菌种鉴定,应用纸片法进行药敏试验。结果:共分离到196株肺炎克雷伯菌,ICU病区及60岁以上的老年患者是主要的感染人群,男性患者人数要高于女性患者。除氨苄西林、头孢唑林及头孢噻肟外,其余抗生素的耐药率均在50%以下。但不同抗生素在不同年份表现出不同的变化规律。结论:ICU病区、老年患者及男性患者应该成为血流感染肺炎克雷伯菌的重点关注人群。鉴于本院血流感染肺炎克雷伯菌中多重耐药菌尤其是CRE菌株具有较高的分离率且不同抗生素的耐药率呈现不同变化趋势,临床上需要根据药敏结果合理用药。     

血流感染大肠埃希菌的临床分布及耐药性分析

目的:了解院内大肠埃希菌血液分离株在临床中的分布特征及耐药情况,指导临床医生合理使用抗菌药物。方法:收集山东医科大学第一附属医院2017年~2019年大肠埃希菌血液分离株,使用MALDI-TOF MS(Bruker)进行细菌菌种鉴定,应用纸片法或MIC法进行药敏试验。结果:2017年〜2019年共分离出258株大肠埃希菌血流感染株,其中共检出超广谱0-内酰胺酶的菌株(ESBLs)有148株,检出率为57.36%。药敏结果显示:氨苄西林的耐药率最高,平均耐药率>80%,头孢唑啉、头孢咲辛、头孢噻肟、头孢曲松、复方新诺明、环丙沙星耐药率>50%,庆大霉素、左氧氟沙星、头孢吡肟和氨曲南耐药率>30%,头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁的平均耐药率<20%,亚胺培南、美洛培南和阿米卡星平均耐药率<3%。除哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、阿米卡星、亚胺培南、美洛培南外,ESBLs菌株对其他抗菌药物的耐药率明显高于非ESBLs菌株(P<0.05)。结论:大肠埃希菌血液分离株耐药情况依然严重,临床上需要根据药敏结果合理用药。     

足踝外科领域患者报告结局的研究进展

患者报告结局(patient-reportedoutcomes, PRO)指直接来自于患者自身健康状态任何方面的信息。足踝外科临床传统的患者报告结局测量工具(patient-reportedoutcomemeasures, PROM)包括美国足踝外科协会系列量表、视觉模拟评分、健康调查简表-36(SF-36)、足踝结局量表和健康调查简表-12(SF-12)等。在使用过程中, 上述PROM因存在受医生的主观影响、只能对特定疾病或一般健康状况有响应、问卷过于冗长引起测试疲劳等问题而不能准确反映患者的感受, 最终影响结果的信度和效度。由美国国立卫生研究院研发的患者报告结局测量信息系统(patient-reportedoutcomemeasurementinformationsystem, PROMIS)的各项量表经验证具有良好的信度、效度和响应度, 其结果真实可靠, 有很高的临床参考意义。PROMIS包含简表、简表合集和计算机自适应测试(computerizedadaptivetest, CAT)等形式, 其中PROMISCAT依靠更科学的项目反应理论建成, 每一题的选择都与受试者的潜在特质...