构建玻片蛋白质芯片的实验研究

目的:探讨玻片蛋白质芯片的构建方法及其中间操作条件的选择与优化。方法:利用生物芯片点样仪将超微量蛋白质点到经特殊处理的玻璃片表面,然后选用不同的化学试剂对玻片背景进行封闭;再用荧光素标记的蛋白质与点样蛋白杂交;最后用生物芯片分析仪扫描成像并进行分析,比较不同条件下芯片的显示效果。结果:蛋白质样品与片基稳定结合,并保持原活性状态;封闭试剂选用酪蛋白或明胶效果较佳;点样探针与其特异蛋白质抗体可稳定结合,结合效果与点样蛋白浓度在一定范围内呈正相关;在1.6 cm×1.6 cm的玻璃片面积上,构建了36×36=1269点的蛋白质芯片。结论:本实验条件下,蛋白质抗原或抗体可以稳定地固定于经过处理的玻璃片表面.制成免疫型蛋白芯片,并可通过随后的抗原抗体反应与荧光素标记的相应抗体或抗原结合,用生物芯片分析仪可对其荧光信号进行检测分析。     

细胞膜表面糖识别芯片的制备及其初步应用

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯片上各个凝集素位点捕获细胞情况和该点凝集素的特异性获得细胞膜表面糖谱,并在光镜下对细胞数量形态进行观察。芯片的重复性和稳定性较好。结论该凝集素芯片可以对细胞进行自动捕获,对细胞膜表面糖链进行总体、即时的观察,对细胞膜糖链特征有一个总体的认识,建立各种细胞膜表面糖谱,为细胞膜表面糖链特征检测提供一个新的分析方法。     

多层螺旋CT脑血管造影成像技术探讨

目的:探讨多层螺旋CT[SmartPrep]跟踪技术在脑血管成像中的应用价值,以及不同注射速率和对比剂剂量与螺距的选择的最优化方案。方法:对头颅CTA资料进行回顾性分析,追踪触发的优点:15例患者,患者首先进行以常规经验进行采集图像,后同时进行了追踪触发扫描,回顾性分析作60例患者,根据注射速率分为三组,常规剂量100 ml,随机抽取45例做量化分析。每组15例,A1组:R=2.5,A2组:R=3.5,A3组:R=4.5。回顾性分析45例患者,按剂量总量不同分为三组,每组15例,B1组:100 ml,B2组:75 ml,B3组:55 ml。准直和螺距的选择:回顾性分析40例患者,男25例,女15例,年龄25岁～70岁,平均年龄51岁,随机分C1、C2、C3三组,准直为1.25,螺距C1:0.562:1,C2:0.938:1,C3:1.375:1。结果:用SmartPrep跟踪技术能够在脑血管内对比剂充盈达高峰期时进行采集原始图像,脑血管主干及其1级～3级分支显示率为100%,大脑中动脉4级～5级分支显示率为92%。发现动脉瘤并清晰显示了瘤体,载瘤动脉及其详细关系,分析A1、A2、A3,三组A2组图像对大脑中动脉,额项升动脉等分支显示结果优于A1、A2。分析B1、B2、B3三组大脑前中后动脉等各支,三组差异无显著性。分析C1、C2、C3三组脑动脉各分支,评分结果C2组优于其余两组。结论。跟踪技术能更好的显示靶血管,使用3.5 ml/s,低剂量对比剂的使用减少的对比剂的剂量,减少患者的花费。应用0.938:1的螺距可以减少患者所受辐射的剂量,减少扫描时间,图像质量优于大螺距,可以更好的显示脑动脉血管各级分支。     

胃癌中脆性组氨酸三联体基因转录本的缺失

我国是胃癌高发国家 ,居全国恶性肿瘤死亡率之首。本研究拟采用ＲＴ ＰＣＲ(巢式 )方法 ,对胃癌及癌旁组织脆性组氨酸三联体 (ＦＨＩＴ)基因的表达进行分析 ,探讨ＦＨＩＴ基因在我国胃癌发生中的作用 ,了解其与胃癌发生的关联 ,为基因诊治提供新的途径。一、材料与方法1.临床标本 :癌组织及癌旁 5ｃｍ以上的正常组织 ,均取自中国医科大学第一医院 ,术后迅速置液氮内 ,- 70°Ｃ冰箱内储存。胃癌 2 0例 ,男 13例 ,女 7例 ;胃溃疡胃大部切除术后良性病变黏膜组织 5例 ,男 1例 ,女 4例。所有组织标本均经病理组织学证实。2 .总ＲＮＡ提取 :用Ｔ…     

16层螺旋CT下肢血管成像技术在诊断糖尿病足中的价值

目的 探讨16层螺旋CT下肢血管成像技术在诊断糖尿病足中的应用价值.方法 对30例临床拟诊糖尿病患者进行16层螺旋CT下肢血管成像检查,利用Smart prep跟踪技术,其中有5例进行DSA检查.结果 全部CTA检查均获得成功,其中28例优良,2例因为本身条件,图像有运动性伪影.共60支下肢动脉血管均存在股动脉以下不同程度的狭窄或闭塞,1级20支,2级15支,3级12支,4级9支,5级4支. 结论16层螺旋CT下肢血管成像技术可以直观、全面地诊断糖尿病足下肢多发性动脉疾病.     

应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞膜表面糖链表达

目的 应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞系A549和H460细胞膜表面糖链表达类型.方法 用胶原酶Ⅱ消化非小细胞肺癌细胞系,对提取的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖链表达.结果 腺癌A549和大细胞肺癌H460除LTL和DBA这两个凝集素位点没有捕获到细胞外,其余各点均捕获到细胞.结论 根据凝集素的亲和特异性表明,非小细胞肺癌细胞膜表面糖链类型主要有:唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链,为建立癌症细胞膜表面糖链表达谱和寻找肺癌分子靶向治疗的药物作用位点提供理论依据.     

应用凝集素芯片检测胃正常黏膜上皮细胞与胃癌细胞膜表面糖链表达

目的 应用凝集素芯片检测胃正常黏膜上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系SGC7901、MKN45细胞膜表面糖链表达,并对芯片上捕获的细胞进行初步的免疫荧光研究.方法 用胶原酶Ⅱ消化细胞系,利用芯片上的凝集素位点对糖链的亲和特异性捕获荧光标记的细胞,激光共聚焦扫描仪扫描检测细胞膜表面糖链表达.结果 在大多数凝集素位点上,这几种细胞均显示出荧光信号;在凝集素位点WBA、EEL、MAH-Ⅱ上均未显示荧光信号;其中,与GES-1相比,胃癌细胞系SGC7901和MKN45在LTL、HHL位点上基本没有荧光信号.结论 根据凝集素的亲和特异性说明,这几种细胞系膜表面共同表达的糖链包括:唾液酸、乙酰葡萄糖/葡萄糖、乙酰半乳糖/半乳糖、甘露糖等糖链.其中,胃癌细胞系SGC7901和MKN45可能较少表达岩藻糖.     

丙型肝炎病毒基因分型及其临床意义

为了探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的基因型及其临床意义，本文对沈阳地区６１例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性血清的聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物，用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析进行基因分型，结果为：ＨＣＶⅡ型感染占７０．５％（４３／６１），ＨＣＶⅢ型感染占２７．９％（１７／６１），ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染占１．６％（１／６１）。初步证明沈阳地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主。对９１例肝癌病人中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的２７例血清基因分型，Ⅱ型占７４％（２０／２７），其余为Ⅲ型。可见ＨＣＶⅡ型感染与肝癌发生有密切关系。     

血清肌酸激酶MM同工酶亚型和丙酮酸激酸对急性心肌梗塞早期诊断的意义

用普通琼脂糖快速电泳法和２，４—二硝基苯肼法分别测定２１例ＡＭＩ患者血清ＣＫ－ＭＭ亚型和ＰＫ的活力，动态观察ＡＭＩ发病后不同时间ＣＫ－ＭＭ亚型和ＰＫ的变化，对比ＣＫ和ＣＫ－ＭＢ，以评价各指标在ＡＭＩ后不同时间的诊断价值。结果：ＡＭＩ发病５ｈ内首次血清ＣＫ－ＭＭ３％高于心绞痛组和对照组，ＭＭ３／ＭＭ１比值高于心绞痛组和对照组（Ｐ＜０．０１）。而同时限测定的ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ和ＰＫ与心绞痛组和对照组比较无差异（Ｐ＞０．０５）；梗塞后６ｈ内ＭＭ３／ＭＭ１诊断阳性半天高１９～２４ｈ内ＰＫ和ＣＫ－ＭＢ诊断阳性率最高；３６～７２ｈＣＫ诊断阳性率最高。血清ＣＫ－ＭＭ亚型，尤其是ＭＭ３／ＭＭ１是ＡＭＩ最早、最敏感的生化指标。     

寡核苷酸醛基芯片点样条件的优化

对点样探针的浓度、探针缓冲液的浓度及pH值对醛基玻片探针固定效果的影响进行了探讨,实验结果表明:pH=9、探针浓度为200mmol/L时,探针固定效果较好,所制备的芯片的灵敏度高.