细胞因子对T细胞生长激素基因表达的影响

目的 探讨各种细胞因子对T细胞生长激素（GH）基因表达的影响。方法 构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒pGL2-GH-luc，然后转染入T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞中，在培养液中分别加入各种细胞因子。结果 生理浓度的IL－1β，TNF－β和IFN－γ，对Jurkat细胞中荧光素酶的表达具有抑制作用（P＜0．05）。结论 细胞因子参与了调节淋巴细胞GH基因的表达。     

4例口服复方避孕药致假性库欣综合征病例分析

目的：研究我院收治的4例口服复方避孕药（oral contraceptive pills,OCPs）后致假性库欣综合征病例的临床特征以及复习OCPs影响皮质醇测定的相关文献。方法：回顾性分析4例因月经稀发服用OCPs的育龄期女性患者的临床特点。应用等倍稀释的方法测定OCPs与血总皮质醇之间的交叉反应,并复习相关文献。结果：4例患者在服用OCPs期间均发现血总皮质醇的升高。3例患者均在停用OCPs之后血总皮质醇降至正常。予等倍稀释的方法,在OCPs溶液中测定血总皮质醇,交叉反应小。文献中报道OCPs可能从以下两方面导致假性库欣综合征：OCPs中的雌激素增加皮质醇结合球蛋白的合成而引起血总皮质醇的升高;OCPs可能通过直接刺激下丘脑-垂体-肾上腺轴使血总皮质醇生成增多。结论：OCPs可通过多种机制导致假性库欣综合征,临床上需结合患者的临床表现、体格检查以及其他的实验室结果与库欣综合征进行鉴别,以免误诊、误治。     

670例以矮小为主诉的患儿及其家长对生长迟缓认知状况的调查

目的了解以矮小为主诉的患儿及家长对生长迟缓的认知情况。方法对670例患儿及其家长进行专人负责的问卷调查。结果670例患儿中男女比例为471：191,就诊平均年龄（12．6±5．2）岁,身高＜第3百分位者占61-8%,≥第3百分位者占38．2%,身高＞第10百分位则占10．5%;仅有20%家长经常过问孩子身高并记录,75%家长无法提供孩子目前的身高,30%家长认为孩子属于“晚长”。为了增高,10%家长让孩子吃过所谓的增高药物（具体成分均不详）,2．5%左右孩子曾接受器械增高,10．5%的孩子曾穿过增高鞋,但几乎无效。结论目前有相当多家长缺乏正常的儿童生长发育知识。临床实践中要进一步完善对患者教育宣传机制,加强医患交流,避免“增高”误区。     

可乐宁与运动兴奋生长激素筛查试验之比较

兴奋人生长激素(hGH)筛查试验已有多种应用于临床.国内主要应用运动试验和深睡眠试验,本文应用口服可乐宁做兴奋 hGH 筛查试验,并与运动试验作一比较分析.材料和方法一、对象的选择自1987年10月～1989年10月因身材矮小来门诊检查的266人,年龄25～17岁,平均9.5±45岁.男性141人,女性125人,经全面体检、胸透、肝     

锌α2糖蛋白真核表达载体的构建和体外表达鉴定

目的 构建小鼠锌α2糖蛋白(mZAG)真核表达载体,在体外培养细胞中鉴定其mRNA和蛋白水平表达.方法 提取小鼠肝组织总RNA,采用RT-PCR法扩增mZAG全基因表达序列,酶切法将mZAG cDNA全序列插入表达质粒载体pcDNA3.1(-)中构建pcDNA3.1(-)-mZAG真核表达质粒.采用阳离子脂质体转染法将不同浓度mZAG表达质粒(0、0.4、0.8、1.6ug)pcDNA3.1(-)-mZAG和4对mZAG小干扰RNA(siRNA)序列转染到3T3-Ll前脂肪细胞中,实时荧光定量RT-PCR测定mZAG mRNA表达水平,Western blot检测mZAG蛋白表达情况.结果 测序鉴定证实成功构建mZAG真核表达质粒pcDNA3.1(-)-mZAG.实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,0.4、0.8、1.6μg mZAG转染组3T3-Ll细胞中的mZAGmRNA表达水平分别是0μg mZAG转染组的2.58(P=0.002)、3.67(P=0.000)、5.19倍(P=0.001);mZAG-siRNA1组和mZAG-siRNA4组小鼠3T3-L1细胞中的mZAG mRNA表达水平显著减少,分别是不转染mZAG siRNA干扰序列对照组的49%(P=0.002)和41%(P=0.000).Western blot检测结果显示,0.8μg mZAG质粒转染组的体外mZAG蛋白表达水平是不转染mZAG质粒对照组的2.75倍(P=0.017);mZAG-siRNA1和mZAG-siRNA4干扰序列转染组的体外mZAG蛋白表达水平仅为对照组的55%(P=0.004)和62%(P=0.025).结论 成功构建mZAG真核表达载体,该载体能够在体外细胞中良好表达.筛选出能够显著抑制mZAG表达的siRNA1和siRNA4,为今后进一步深入研究ZAG提供了有用工具.     

重组人生长激素治疗骨龄13～17岁的特发性生长激素缺乏性矮小症

目的　探讨重组人生长激素(rhGH)对骨龄13~17岁的特发性生长激素缺乏性(IGHD)矮小症患者的促身高增长疗效。方法　21例骨龄13~17岁的IGHD患者被分为两组, A组(骨龄13. 0 ~14. 9岁)和B组(骨龄15. 0~17. 0岁)。A组11例(男8,女3),B组10例(男6,女4),年龄分别为(17. 9±3. 2)岁, (18. 7±2. 1)岁;骨龄分别为(13. 5±0. 6)岁, (15. 2±0. 4)岁,其身高标准差计分分别为-4. 6±1. 6, -3. 3±0. 8,而治疗前生长速度分别为(2. 6±1. 1)和(2. 3±0. 9)cm /年。每晚睡前皮下注射rhGH0. 1IU/kg共6个月。结果　A,B两组IGHD患者的身高分别由治疗前(140. 3±9. 2)和(147. 5±5. 3)cm增至(145. 5±8. 6)和(151. 9±5. 9)cm,两组患儿治疗1~3个月时的生长速度明显增加,但B组治疗4~6个月时的生长速度明显减缓,并明显低于A组患儿4~6个月时生长速度(P<0. 05);而两组患儿的体重和骨龄均没有明显的变化。在骨龄为15~17岁的IGHD患者中,血清胰岛素样生长因子Ⅰ和骨钙素水平明显升高(均P<0. 05)。结论　rhGH治疗对骨龄为13~17岁的IGHD患儿身高的增长仍有促进作用。     

单次及多次GHRH兴奋试验对鉴别下丘脑性和垂体性生长激素缺乏的价值评估

50例特发性生长激素缺乏症(IGHD)患者在一次静脉注射GHRH后,其中36％病例GH反应阳性(GH峰值≥5μg/L);用GHRH_(1-44)引发5日后,41％的GH反应阴性患者GH细胞转为有反应,使GH反应阳性率增至62％;继续用GHRH_(1-44)引发至10日未能再增加阳性反应率。结果提示,许多下丘脑性IGHD患者的垂体GH细胞,由于长期缺乏内源性GHRH兴奋,分泌功能低下,致对单次静脉注射GHRH无反应;但连续用外源性GHRH兴奋5日后,垂体GH细胞分泌功能逐渐恢复而有阳性反应。因此,5日GHRH兴奋试验对下丘脑性和垂体性IGHD已具有鉴别诊断意义。     

细胞因子调节垂体MtT/S细胞中人生长激素基因启动子的活性

目的:探讨细胞因子白介素-11(IL-11)、睫状神经营养因子(CNTF)和转化生长因子(TGF-β)对大鼠垂体MtT/S细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit-1蛋白的关系。方法:采用荧光素酶报告基因的方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化MtT/S细胞系,然后用细胞因子刺激,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,反映它们对GH分泌和合成的影响;检测MtT/S细胞内荧光素酶的变化,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit-1蛋白表达质粒(pcDNA-pit-1-cDNA)单独转染或与Pit-1反义寡核苷酸(Pit-1OND)共转染于稳定转化的MtT/S细胞中,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化,探讨细胞因子的作用与Pit-1蛋白的关系。结果:IL-11(20 nmol/L)、CNTF(10 nmol/L)能刺激大鼠垂体MtT/S细胞中GH的分泌和合成,增强MtT/S细胞中荧光素酶的表达,分别增加到对照组的134%、122%。TGF-β(5 nmol/L)能减少GH的分泌和合成,抑制荧光素酶的表达到对照组的72%。Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。结论:IL-11、CNTF和TGF-β通过调节大鼠垂体MtT/S细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成,Pit-1蛋白可能不参与这一调节作用。     

人生长激素的生物素—新和素放大酶联免疫法的建立

为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素 (hGH)酶联免疫分析法 (BA ELISA) ,以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠 ,利用杂交瘤技术制备出 2 9株分泌抗hGH单克隆抗体 (MCA)的杂交瘤株。选择最佳配对MCA ,利用亲和素与生物素高亲和力的特性 ,建立了血清hGH双位点的BA ELISA法。我们的MCA滴度为 (0 5～ 5 0 0 )× 10 4,亲和常数Ka =(0 13～ 1 40 )× 10 10 L/mol。血清hGH的ELISA的灵敏度为 0 0 4± 0 0 1μg/L ;在血清中分别加入 1,2 5 ,5 μg/L的hGH ,其回收率为 90 7%～ 10 7 6 % (平均为 10 1 2 0 %± 0 0 3 % ) ;hGH含量为 2 8、10 0、2 9 8μg/L的血清批内、批间变异系数分别为 4 9%、3 8%、7 9%和 6 2 %、3 5 %、9 5 % ;用本法测定了正常儿童、生长激素缺乏症 (GHD)患儿和活动性肢端肥大症患者空腹血清hGH水平 ,分别为 1 87± 3 0、0 30± 0 42和 8 71± 6 95 μg/L。上述结果表明 ,本ELISA方法灵敏、特异、稳定、准确 ,能确切反映hGH分泌功能 ,在诸多方面均优于RIA。     

基因重组人生长激素治疗青春期前特发性生长激素缺乏症临床试验

目的:评价基因重组人生长激素(rhGH)治疗青春期前特发性生长激素缺乏症(IGHD)患儿6个月的疗效和安全性。方法:对49例IGHD患儿进行rhGH治疗,每晚睡前皮下注射0．5IU·kg~(-1),每周分5次注射,共26周。评价治疗前后身高、生长速度、身高标准差计数(SDS)等指标。结果:在rhGH治疗期间,46例患儿生长速度由每年(2．5±1．0)cm提高到(11．5±2．5)cm(P＜0．005)。身高SDS由治疗前(-4．2±1．8)增为(-3．7±1．8)。同时患儿13和26周血清胰岛素样生长因子(IGF-1)和IGF结合蛋白(IGFBP,)水平均较治疗前明显升高(P＜0．05)。其体重与骨龄无明显变化。治疗后共有15．7%患儿出现甲状腺功能降低,抗hGH抗体阳性率为21．7%,但所有这些现象均未影响患者体格的线性增长。在治疗期间所有患者肝肾功能、血尿常规和代谢性指标(如血糖和血脂水平)等均保持在正常范围。结论:rhGH是治疗IGHD安全有效的药物。