TB-SAT检测支气管肺泡灌洗液诊断肺结核的价值研究

目的探讨结核分枝杆菌RNA恒温扩增荧光实时检测技术(TB-SAT)在肺结核诊断中的临床价值。方法纳入992例临床确诊肺结核患者和159例非结核病患者,采集患者支气管肺泡灌洗液,使用常规抗酸染色镜检(AFS)、Bactec MIGT960结核分枝杆菌液体培养(MIGT960)和TB-SAT三种方法检测结核分枝杆菌,应用ROC曲线比较三种方法的诊断价值。结果 AFS、MIGT960和TB-SAT三种方法诊断肺结核病时的AUC分别为0.635(95%CI:0.606~0.662)、0.681(95%CI:0.654~0.708)和0.758(95%CI:0.733~0.783),诊断价值由高到低依次为TB-SAT、MIGT960和AFS(均P0.05);AFS、MIGT960和TB-SAT三种方法的灵敏度分别为26.92%、36.29%和63.00%,特异度分别为100.00%、100.00%和88.68%。结论 TB-SAT具有快速、简便、准确等优点,可作为肺结核辅助诊断的方法。     

新登记肺结核菌阳患者耐药情况分析

目的分析新登记肺结核患者的初始耐药情况,为进一步控制肺结核的发病和流行提供依据。方法对杭州市红十字会医院2012年新登记的活动性肺结核患者进行痰培养获得768株分枝杆菌菌株,对培养阳性菌株进行菌型鉴定并用比例法进行药物敏感性试验。结果2012年非结核分枝杆菌（NTM）分离率为4．42％,结核分枝杆菌（MTB）初始耐药率13．35％,耐多药率4．50％,耐单药率从高到低为INH（8．31％）、RFP（7．22％）、SM（6．40％）和EMB（2．45％）。耐药率随年龄增长呈下降趋势,16岁～组人群初始耐药率明显高于61岁及以上年龄组。结论青壮年肺结核患者初始耐药率高,应加强对重点人群的管理及随访。     

环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例（肺结核组）和非肺结核患者120例（对照组）。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒（TB- PCR）检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%（111/173）、64.7%（112/173）、78.6%（136/173）。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义（P＜0.01）,抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%（108/122）、82.3%（149/181）、77.1%（108/140）、91.4%（149/163）,LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%（257/303）。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

2010-2011年杭州市636例肺结核患者耐药情况分析

目前，结核病已经成为世界性的公共卫生问题，引起国际社会的极大关注。2007-2008年我国开展了全国结核病耐药基线调查，调查结果显示肺结核患者耐多药率为8.32%，每年新发MDR-TB患者12万例，约占全球每年新发耐多药患者总数（51万例）的1/4，居全球第二位。耐药结核病已经成为我国结核病控制面临的重大挑战，如不能及时控制其流行，将严重削弱我国遏制结核病已取得的成效，阻碍我国控制结核病的进程。近年来，杭州市的结核病流行情况在全国一直处于较为平稳的水平，但随着人口流动的增加，耐药结核病的不断蔓延给结核病控制工作带来了新的威胁与挑战。笔者通过对636株Mtb药敏试验结果进行统计分析，研究杭州市Mtb耐药状况，为耐药结核病的监测和有针对性的治疗结核病患者提供一定的理论依据。     

结核抗体lgG/lgM检测在肺结核和肺外结核中的诊断价值

目的 探讨异种血清抗体检测技术在结核病诊断中的应用价值。方法 采用IgG/IgM抗体试剂盒分别检测102例结核病患者(包括73例肺结核和29例肺外结核)、223例其他肺部疾病患者和100例对照者结核感染情况,以临床诊断为标准评价该方法的敏感度和特异性,同时分别与痰菌培养及痰涂片平行检验的结果作比较,统计学分析采用χ²检验。结果 结核抗体IgG/IgM检测结核病患者的敏感度为74.51%、特异度为91.64%。结核抗体IgG/IgM检测肺结核和肺外结核的敏感度分别为82.19%、55.17%,肺内和肺外结核的敏感度差异有统计学意义(P＜0.05),结核抗体lgG/IgM检测结核患者阳性检出率明显高于痰培养法和痰涂片法(P<0.05)。102例结核病患者年龄段分组分析,少年组和老年组检出率分别为58.33%、36%,远低于青年组和中年组的96.15%和89.74%。不同年龄组间进行卡方比较分析显示,P＜0.05,差异有统计学意义。425例标本中,共发现8例非结核分枝杆菌,其中6例胞内分枝杆菌, 2例脓肿分枝杆菌,lgG/lgM抗体检测均为阴性。结论 IgG/IgM血清抗体检测肺内、外结核具有快速方便、经济和较高的敏感度,适合用于临床结核筛查。     

2014—2018年杭州市肺结核患者的耐药情况及其影响因素分析

目的 分析2014—2018年杭州市肺结核患者对一线抗结核药品的耐药特征及其影响因素,为杭州市防治耐药结核病提供科学依据。方法 收集2014—2018年浙江省中西医结合医院结核病诊疗中心就诊的杭州市全部常住人口中的活动性肺结核患者,共12 851例,纳入结核分枝杆菌培养阳性且对一线抗结核药品药物敏感性试验(简称“药敏试验”)信息全面的3807例患者。通过国家结核病信息管理系统和结核病实验室信息系统(laboratory information system,LIS)收集所有患者的性别、年龄、户籍、职业、治疗分类(初治和复治)、肺部有无空洞、患者来源及现居住地、结核分枝杆菌培养及药敏试验结果。运用单因素和多因素非条件logistic回归分析的方法研究杭州市耐药肺结核患者耐药特征及其影响因素。结果 3807株菌株中,907株(23.82%)对4种一线抗结核药品耐药,耐药顺位依次为异烟肼(18.57%,707例)、链霉素(18.41%,701例)、利福平(12.03%,458例)、乙胺丁醇(6.41%,244例);所有患者的耐多药率和多耐药率分别为11.11%(423/3807)和4.44%(169/3807)。2014—2018年不同年份肺结核患者耐药率分别为22.87%(185/809)、25.55%(198/775)、25.60%(181/707)、23.04%(188/816)、22.14%(155/700),差异无统计学意义($χ^{2}_{趋势}$=4.275,P=0.370);耐多药率分别为11.12%(90/809)、13.16%(102/775)、11.88%(84/707)、11.40%(93/816)、7.71%(54/700),差异有统计学意义($χ^{2}_{趋势}$=11.276,P=0.024)。多因素条件logistic回归分析显示,相对于男性和初治患者,女性和复治肺结核患者是发生耐药的危险因素[OR(95%CI)=1.308(1.111~1.540);OR(95%CI)=4.281(3.498~5.238)];相对于下沙区,居住在其他6个区的结核病患者发生耐药的可能性较大,萧山区和富阳区的风险更高[OR(95%CI)=4.400(2.559~7.565); OR(95%CI)=3.803(2.037~7.098)]。相对于男性、<40岁、初治患者,女性、≥40岁、复治的肺结核患者是产生耐多药的危险因素 [ OR(95%CI)=1.724(1.364~2.178);40~岁组:OR(95%CI)=3.418(1.599~7.305);60~岁组:OR(95%CI)=3.885(1.832~8.239); 复治:OR(95%CI)=7.645(5.984~9.766)]。结论 杭州市应该加强年龄≥40岁、复治、女性、居住在萧山地区、富阳区耐药结核病患者的管理和治疗,是降低杭州市耐药及耐多药结核病产生和传播的关键。     

结核分枝杆菌rHpsX-MPT64融合蛋白的制备与临床应用

目的 构建结核分枝杆菌融合基因hpsX-mpt64原核表达系统,建立基于rHpsX-MPT64为包被抗原酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)并对其用于结核患者血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法 PCR扩增并克隆结核分枝杆菌hpsX和mpt64基因,以连接引物PCR构建hpsX-mpt64人工融合基因,建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白,Western Blot检测其免疫性。分别以rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原,建立相应ELISA检测150例健康人群、73例非结核肺部疾病患者和277例活动性肺结核患者血清标本中抗体。结果 克隆的hpsX和mpt64及构建的hpsX-mpt64融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达量分别为细菌总蛋白的20.3%、28.5%和26.5%,其提纯物电泳后均显示单一条带。基于rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA对涂阳患者血清抗体检出率明显高于涂阴患者(P<0.01),检测活动性结核患者血清抗体的敏感性分别为59.2%、61.4%和74.4%,特异性分别为90.6%、83.9%和91.0%,rHpsX-MPT64为包被抗原敏感性明显高于rHpsX和rMPT64抗原(P<0.01)。结论 基于rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA有较高的敏感性和特异性,重组融合蛋白为抗原有助于进一步提高检测结核病血清学诊断的敏感性。     

BS-400全自动分枝杆菌液体培养系统对分枝杆菌培养的效果评价

目的:评价BS-400全自动分枝杆菌液体培养系统(简称“BS-400培养系统”)在临床标本中培养分枝杆菌的效果。方法:搜集2022年3—5月在浙江大学附属杭州市胸科医院就诊的疑似结核病患者标本427份用于本研究，标本包括除血液和粪便外的331份呼吸道标本(包括痰液和呼吸道灌洗液)和96份非呼吸道标本(包括脑脊液、组织、分泌物、尿液、骨髓和坏死物等)。所有标本同时使用BACTEC MGIT 960液体培养系统(简称“MGIT 960培养系统”)和BS-400培养系统进行培养，培养阳性标本进行细菌分离和菌种鉴定。比较两种培养系统对不同类型标本分枝杆菌培养阳性率、检测时间、污染率及成本差异，并以MGIT 960培养系统培养结果为参照标准，评价BS-400培养系统对不同类型标本分枝杆菌感染的检测效能。结果:BS-400培养系统对呼吸道标本的培养阳性率为32.02%(106/331),污染率为5.14%(17/331);对非呼吸道标本的培养阳性率为17.70%(17/96),污染率为1.04%(1/96),与MGIT 960培养系统[分别为32.93%(109/331)和5.44%(18/331...