CONSTRUCTION，EXPRESSION AND BIOLOGICAL ASSESSMENT OF BPI23—Fcγ1 RECOMBINANT PROTEIN PROKARYOTIC EXPRESSION VECTOR

INTRODUCTIONGram－negativesepsis（GNS）andinfectiousshockarechallengestocliniciansbecauseofhighmortality（１）．Routineantibiotictherapydoesnotworkwellbe－causeoftheincreasingoccurrenceofresistantstrainsand（２）．Anti－lipopolysaccharide（LPS）monoclonal     

西罗莫司与未成熟树突状细胞延长小鼠皮肤移植存活时间的协同作用

目的 研究西罗莫司（SRL）对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）分化及成熟的影响，观察西罗莫司与未成熟树突状细胞在延长小鼠皮肤移植存活时间中的协同作用。方法 （1）在诱导C57BL／6小鼠骨髓细胞定向分化为DC时加入SRL，通过流式细胞仪检测CD11c、CD86及MHCⅡ类分子表达情况，经脂多糖（LPS）刺激后，再检测各分子表达的变化。（2）通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）观察经SRL处理的DC刺激同种异基因小鼠T细胞增殖情况。（3）以C57BL／6小鼠为供者，BALB／c小鼠为受者建立皮肤移植模型。观察皮肤移植前7d经尾静脉注射供者未成熟DC及经胃管连续灌注SRL7d的受者移植皮片存活情况及组织学变化。结果 （1）经SRL处理的DC表面CD11c表达仅有轻度降低，但CD86和MHCⅡ类分子表达明显减少。（2）MLR显示经SRL处理的DC刺激同种异基因小鼠T细胞增殖的能力降低。（3）受者皮肤移植术前联合应用供者未成熟DC和SRL，可减轻移植皮片炎症反应并延长其存活时间。结论 SRL对DC分化的影响不明显，但可抑制DC发育成熟。受者术前应用SRL和未成熟DC可延长皮肤移植的存活时间。     

BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其人源抗体的筛选

杀菌／渗透增强蛋白（bactericidal／permeability increasing protein，BPI）是存在于人及哺乳动物多形核白细胞中的一种阳离子抗菌蛋白。研究证实BPI功能性氨基端片段（rBPl2。／rBPl23）具有与天然BPI55，相同的生物学活性，它们不仅能广谱杀伤G^-菌还能有效中和内毒素。     

AAV2-BPI700-Fcγ1700重组病毒的制备及其转染小鼠后的抗感染作用

目的 通过观测BPI700-Fcγ1 7001嵌合基因导入小鼠对最小致死量E．coli感染攻击的抵抗作用，探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性。方法采用RT-PCR检测嵌合基因在转录水平的表达；采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白水平的表达。结果（1）基因导入小鼠中目的嵌合基因得到表达，在注射部位肌肉组织和血清中可检测到目的嵌合蛋白；（2）在最小致死量E．coli感染攻击后，基因导入小鼠的存活率为31．43％，明显高于对照组小鼠的存活率4．62％；与小剂量头孢呋辛钠联合应用其存活率高达65％。结论BPI700-Fcγ1 700嵌合基因导入小鼠对致死量E．coli感染具有较好抵抗作用，提示抗感染基因治疗在细菌感染性疾病，特别是在感染高危人群中具有广阔的临床应用前景。     

人IgG1FccDNA的克隆与鉴定

根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA测序结果与GenBank报道一致。     

提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli中表达水平和复性率的研究

目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli DH 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率.方法:通过降低目的基因5′端序列中GC含量和构建双拷贝重组表达载体pBV220-(synBPI600)2,减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性方法对提纯后的蛋白进行复性.结果:降低目的基因5′端序列中GC含量后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的14.3%;单双拷贝重组表达载体转化E.coli DH 5α后,目的蛋白的表达水平无明显差异;在复性液中加入PEG4000后,目的蛋白产生聚集沉淀较少.结论:减少目的基因中GC含量可显著提高BPI23的表达水平,增加表达载体中目的基因的拷贝数对其表达水平无影响,在蛋白复性液中加入PEG4000可明显抑制蛋白聚集沉淀.     

基因工程抗体的研究进展与现状

本文介绍了基因工程抗体的发展情况,基因工程抗体的分类及各类抗体的构建方法和特性,基因工程抗体的表达体系以及目前基因工程抗体的应用情况。     

免疫调节T细胞的作用途径

免疫系统可以视为一种自身稳定系统.其主要功能是识别"自己"而不是识别"非己".某些与自身抗原相关的外来抗原能使自稳平衡发生紊乱.免疫调节包括一套复杂的调控反应,其功能在于对可能致病的物质产生最大排除作用,对自身组织产生最小的损伤作用.本文只讨论免疫调节T细胞的作用途径,希望能对免疫调节理论认识的统一有所裨益.免疫调节环及其构成免疫应答的调节主要是通过T细胞不同亚群之间的相互作用来完成的.其作用有负(抑制),有正(免疫).每种调节T细