表皮细胞培养及其临床应用

目的:对表皮细胞的培养方法、临床应用进展方面的研究成果进行综述,展望其发展趋势。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1970-01/2006-08相关表皮细胞的文献,检索词“keratinocytes,culture,skin grafting”,同时检索中国期刊网2000-01/2006-08期间的相关文献,检索词为“表皮细胞,培养,皮肤移植”。资料选择:对资料进行初审,选取相关文献查找全文。纳入标准:①表皮细胞的培养。②表皮细胞的移植。排除标准:综述文献、重复研究类文章。资料提炼:共收集到30篇符合标准的文献,英文文献26篇,中文文献4篇,其中与培养相关的文献19篇,与移植相关的文献11篇。资料综合:自1975年以来,表皮细胞从最初的有血清、有滋养层培养,到无血清、无滋养层培养,再到后来的自动化培养。其培养方法有了较大的发展。这些发展促进了其临床应用,从细胞悬液移植到自、异体细胞膜片移植,再到表皮细胞-生物材料复合物移植。培养和移植方法的发展使人们在治疗大面积皮肤缺损方面看到了希望。结论:目前在表皮细胞培养及其临床应用上还有不少问题需要解决,但随着表皮细胞培养方法和技术的进一步完善,特别是与纳米科学、材料科学等学科的交叉,定能在不远的将来获得理想的永久性皮肤替代物。     

纳米金/壳聚糖仿生功能支架对角质形成细胞贴壁及增殖的影响******★

背景：许多研究发现三维结构的纳米材料能促进细胞增殖。 目的：构建一种新型纳米金/壳聚糖仿生功能支架，观察角质形成细胞在支架上的贴壁、增殖情况。 设计、时间及地点：细胞观察性实验，于2006-05/2007-04在南通大学公共卫生学院进行。 材料：1.0~2.0 d龄SD大鼠由南通大学实验动物中心提供，壳聚糖（脱乙酰度>90%）由浙江省玉环县化工厂提供，氯金酸由上海试剂一厂提供。 方法：用化学还原法制备纳米金胶，通过自组装技术将纳米金胶组装到壳聚糖膜表面，得到纳米金/壳聚糖膜仿生功能支架。将SD大鼠皮肤用2.5 g/L胰酶消化得到角质形成细胞。将角质形成细胞分别接种在纳米金/壳聚糖仿生功能支架、壳聚糖膜、空白培养板上，计算培养6，12，24 h后的贴壁率，用免疫组织化学和透射电子显微镜等手段对培养的角质形成细胞进行鉴定。 主要观察指标：角质形成细胞在纳米金/壳聚糖膜上的的贴壁率；纳米金/壳聚糖膜上的角质形成细胞形态。 结果：① 6，12，24 h角质形成细胞在纳米金/壳聚糖仿生功能支架上的贴壁率分别为25.52％，40.34％，58.72％，12，24 h贴壁率明显高于其他两组。②免疫组织化学检测结果显示培养的细胞绝大部分为角质形成细胞。③透射电子显微镜观察可以看到角质形成细胞呈圆形，核大，异染色质较多，胞浆内富含线粒体，细胞活力强。 结论：纳米金/壳聚糖仿生功能支架能显著提高角质形成细胞的贴壁、生长。     

纳米银猪脱细胞真皮敷料的细胞毒性评估

背景：传统的猪皮敷料具有保护创面的作用,但不具有主动抗感染功能。 目的：评估自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的体外细胞毒性,评价其作为新型敷料的可行性。 方法：用四甲基偶氮唑盐比色法检测自制纳米银猪脱细胞真皮敷料100%和50%的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)相对增殖率的影响,并评价其细胞毒性。倒置显微镜观察各组细胞形态变化,培养2,4,7d后用酶联免疫检测仪测定溶液吸光度值来评估细胞毒性。 结果与结论：L-929细胞在自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的浸提液中增殖良好,其细胞毒性实验显示细胞毒级为1级,实验组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义( P >0.05)。说明自制纳米银猪脱细胞敷料无细胞毒性,作为新敷料具有可行性。 关键词：猪脱细胞真皮基质;敷料;纳米银;细胞毒性;MTT doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.012     

异烟肼在电化学预处理玻碳电极上的电化学行为及其痕量测定

目的:研究异烟肼在电化学预处理玻碳电极上的电化学响应。方法:采用三电极系统,以电化学预处理玻碳电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,用循环伏安法研究异烟肼的电化学行为。结果:异烟肼在预处理的玻碳电极上产生两个不可逆的还原峰,电位分别为-0.80V和-0.90V,其过程是一个表面吸附过程。发现在-0.90V出现的还原峰的峰电流与异烟肼的浓度在1.2×10-10~1.3×10-3mol/L的范围内成线性关系。异烟肼的检测限低达1.2×10-11mol/L(ta=40 s,S/N=3),平行8次测定1.2×10-6mol/L异烟肼的相对标准偏差为4.5%。在B ritton-Rob inson(B-R)缓冲溶液和在模拟尿样中的回收率分别为(101.7±3.8)%和(96.3±3.3)%。结论:该方法可灵敏测定微量异烟肼,可用于临床结核病患者药物浓度的监测。     

建立可吸收医用膜细菌内毒素检查的新方法

[目的]检验粘克^TM可吸收医用膜是否符合生物材料的热原要求,建立粘克^TM可吸收医用膜的细菌内毒素检查方法。[方法]按《中华人民共和国药典》2005年版附录及GB/16175-1996规定,同时采用热原检查法和细菌内毒素检查法对粘克^TM可吸收医用膜72h的浸提液样品进行检测。[结果]该浸提液对细菌内毒检测不产生干扰,细菌内毒素试验结果为阴性。同时受试家兔体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃。[结论]粘克^TM可吸收医用膜不含引起机体发热的内毒素或致热原,符合医用生物材料的使用标准。用细菌内毒素检查法替代家兔热原法对该可吸收膜进行热原检查是可行的。     

电化学预处理银电极对微量白蛋白的电化学响应

目的：研究微量白蛋白在电化学预处理银电极上的电化学响应。方法：采用三电极系统，以电化学预处理银电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为对电极，在-0．1～ 0．3V电位范围内用循环伏安法研究白蛋白的电化学行为。结果：电化学预处理银电极上的白蛋白的循环伏安图出现一对氧化还原峰，还原峰电流与白蛋白浓度在一定范围间呈良好的线性关系。结论：该方法可灵敏测定微量白蛋白，有望用于临床检验及早期诊断糖尿病肾病。     

纳米金/壳聚糖仿生功能支架对角质形成细胞贴壁及增殖的影响

背景：许多研究发现三维结构的纳米材料能促进细胞增殖。目的：构建一种新型纳米金/壳聚糖仿生功能支架,观察角质形成细胞在支架上的贴壁、增殖情况。设计、时间及地点：细胞观察性实验,于2006-05/2007-04在南通大学公共卫生学院进行。材料：1.0～2.0d龄SD大鼠由南通大学实验动物中心提供,壳聚糖（脱乙酰度〉90%）由浙江省玉环县化工厂提供,氯金酸由上海试剂一厂提供。方法：用化学还原法制备纳米金胶,通过自组装技术将纳米金胶组装到壳聚糖膜表面,得到纳米金/壳聚糖膜仿生功能支架。将SD大鼠皮肤用2.5g/L胰酶消化得到角质形成细胞。将角质形成细胞分别接种在纳米金/壳聚糖仿生功能支架、壳聚糖膜、空白培养板上,计算培养6,12,24h后的贴壁率,用免疫组织化学和透射电子显微镜等手段对培养的角质形成细胞进行鉴定。主要观察指标：角质形成细胞在纳米金/壳聚糖膜上的的贴壁率;纳米金/壳聚糖膜上的角质形成细胞形态。结果：①6,12,24h角质形成细胞在纳米金/壳聚糖仿生功能支架上的贴壁率分别为25.52%,40.34%,58.72%,12,24h贴壁率明显高于其他两组。②免疫组织化学检测结果显示培养的细胞绝大部分为角质形成细胞。③透射电子显微镜观察可以看到角质形成细胞呈圆形,核大,异染色质较多,胞浆内富含线粒体,细胞活力强。结论：纳米金/壳聚糖仿生功能支架能显著提高角质形成细胞的贴壁、生长。     

纳米银/猪皮基质医用敷料抑菌效果评价

<正>纳米银具有良好的抗菌性能,有助于创面的恢复,近年来在医学生物学领域得到广泛应用〔1-2〕。猪皮由于理化特性和结构与人皮肤类似,具有来源广、成本低等优点,作为医用敷料被广泛应用〔3〕,但其不具有主动抗感染能力。为探讨使用纳米银与猪皮基质组合制成医用敷料的抑菌效果和稳定性,     

表皮细胞培养及典临床应用

目的：对表皮细胞的培养方法、临床应用进展方面的研究成果进行综述。展望其发展趋势。资料来源：应用计算机检索PubMed数据库1970—01／2006—08相关表皮细胞的文献，检索词“keratinocytes，culture，skin grafting”，同时检索中国期刊网2000—01/2006-08期间的相关文献。检索词为“表皮细胞。培养，皮肤移植”。资料选择：对资料进行初审。选取相关文献查找全文。纳入标准：①表皮细胞的培养。②表皮细胞的移植。排除标准：综述文献、重复研究类文章。资料提炼：共收集到30篇符合标准的文献。英文文献26篇，中文文献4篇，其中与培养相关的文献19篇，与移植相关的文献11篇。资料综合：自1975年以来，表皮细胞从最初的有血清、有滋养层培养，到无血清、无滋养层培养，再到后来的自动化培养。其培养方法有了较大的发展。这些发展促进了其临床应用。从细胞悬液移植到自、异体细胞膜片移植，再到表皮细胞．生物材料复合物移植。培养和移植方法的发展使人们在治疗大面积皮肤缺损方面看到了希望。结论：目前在表皮细胞培养及其临床应用上还有不少问题需要解决，但随着表皮细胞培养方法和技术的进一步完善，特别是与纳米科学、材料科学等学科的交叉。定能在不远的将来获得理想的永久性皮肤替代物。     

纳米银仿生敷料研制及使用效果评价

目的 研制纳米银仿生敷料并观察治疗SD大鼠深II度切割伤的效果及其安全性.方法 将42只清洁级SD大鼠用取皮刀在其背部造成10%～13%总体表面积的深II度切割伤,并随机分为3组:纳米银仿生敷料组、磺胺嘧啶银暴露保痂组及壳聚糖膜组,观察各组愈合情况.并于术后2,4,5,7,13,16 d眼眶采血,测定各组血银的含量.术后45 d处死鼠,取肝、脑、肾组织消化测定银含量.结果 自制纳米银仿生敷料组术后10 d和13 d愈合率分别为88.50%和98.98%,明显高于其他2组,差异有统计学意义(P<0.01).纳米银仿生敷料组大鼠不同组织中银含量均低于磺胺嘧啶银对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且该组中血银含量较磺胺嘧啶银暴露保痂组较快恢复至正常水平.结论 自制纳米银仿生敷料具有促进创面愈合的作用,且与磺胺嘧啶银比较,减少了银中毒的可能性,为该敷料进一步应用于临床提供了安全性依据.