荜茇酰胺抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨荜茇酰胺对破骨细胞分化的影响及机制。方法通过CCK-8法评估荜茇酰胺对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞（BMMs）增殖活性的影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评估其对BMMs破骨分化的影响,利用OsteoAssaySurface骨细胞表面培养板研究其对破骨细胞骨吸收能力的影响,并采用qRT-PCR法验证荜茇酰胺处理下BMMs破骨分化过程中核心转录因子活化T-细胞核因子1（NFATc1）和相关破骨特征基因在转录水平的变化。结果2μmol/L及以下浓度的荜茇酰胺对BMMs增殖无明显毒性反应,并且荜茇酰胺可浓度依赖性地抑制BMMs破骨分化过程,在1μmol/L荜茇酰胺干预下几乎无成熟破骨细胞生成。与此同时,荜茇酰胺可显著抑制破骨细胞的骨吸收功能。在机制上,荜茇酰胺可通过抑制NF-κB受体活化因子配体（RANKL）刺激BMMs破骨分化过程中核心转录因子NFATc1的表达,从而下调下游耐酒石酸酸性磷酸酶（ACP5）、破骨细胞相关受体（OSCAR）、组织蛋白酶K（CTSK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）等破骨特征基因的转录,抑制破骨分化过程。结论荜茇酰胺可通过下调RANKL刺激BMMs破骨分化过程中NFATc1的表达,抑制BMMs破骨分化过程及破骨细胞的骨吸收能力。     

关节镜下直接松解后行肩袖修复术治疗老年冻结肩合并肩袖损伤的临床疗效研究分析

目的研究分析肩关节镜直接松解法联合肩袖修复术治疗老年冻结肩合并肩袖损伤的临床疗效。方法选取2015年1月至2017年1月本院收治的肩袖损伤伴合并冻结肩老年患者106例,治疗医师按照治疗方法不同将患者平分为两组:其中A组行肩关节镜下直接松解、肩袖修复术治疗;B组行手法松解、肩关节镜肩袖修复术治疗。观察A组、B组患者治疗前、治疗后1、3、6个月的VAS评分,ASES评分,Constant-Muley肩关节功能评分。记录并比较A、B两组患者手术时间、术中出血量、住院时间、术后疾病减轻时间。结果 A组与B组在术后1个月、术后6个月的VAS评分无显著差异(P0.05);A组在术后3个月的VAS评分略高于B组,差异具有统计学意义(P0.05);A组在治疗后3个月、6个月的ASES评分略低于B组,差异具有统计学意义(P0.05);A组患者术后3个月、6个月的Constant-Muley肩关节功能评分略低于B组患者、差异具有统计学意义(P0.05)。结论本研究两种方法治疗老年冻结肩合并肩袖损伤均可获得比较满意的临床效果,关节镜下直接松解联合肩袖修复术对患者的创伤度更小,术后恢复速度更快,适合应用于手术后关节功能预期要求尚可,且需要完全微创治疗的老年患者。     

糖皮质激素受体在3种人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS中表达及差异

目的 研究糖皮质激素受体（glucocorticoid receptors,GR）在人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS的表达及差异.方法 人成骨肉瘤细胞株MG63、U2-OS及HOS购买于ATCC,常规方法培养细胞.待细胞株生长良好时,检测3种细胞株的细胞骨架、黏附力等细胞特性,通过realtime RT-PCR和Western blot法检测GR表达情况.结果 3种人成骨肉瘤细胞株有不同细胞特性,GR在3种人成骨肉瘤细胞株中表达存在差异.结论 GR在不同功能的人成骨肉瘤细胞株中表达不同.     

刺槐素调控NF-κB/NFATc1信号轴抑制破骨细胞分化的机制研究

目的 探讨刺槐素对破骨细胞分化的影响及机制。方法 通过细胞计数试剂盒-8法评估刺槐素对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞（BMMs）增殖活性的影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评估刺槐素对BMMs破骨分化诱导的影响,采用破骨细胞伪足小体免疫荧光染色研究刺槐素对破骨分化过程中伪足小体形成的影响,并采用qRT-PCR法验证刺槐素处理下BMMs破骨分化过程中核心转录因子活化T-细胞核因子1(NFATc1)和相关特征基因在转录水平的变化。最后通过Western blot法检测刺槐素对NF-κB受体活化因子配体（RANKL）刺激下NF-κB活性及破骨分化过程中NFATc1表达的影响。结果 2μmol/L及以下浓度刺槐素对BMMs无明显毒性。刺槐素可浓度依赖性地抑制BMMs在RANKL刺激下破骨分化过程,在2μmol/L刺槐素干预下几乎无成熟破骨细胞生成。与此同时,刺槐素可显著抑制破骨细胞分化过程中伪足小体的形成。刺槐素可抑制破骨细胞分化过程中下游耐酒石酸酸性磷酸酶（ACP5）、破骨细胞相关受体（OSCAR）、组织蛋白酶K(CTSK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)等特征基因的转录。在机制上,刺槐...     

冬凌草甲素抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨冬凌草甲素抑制破骨细胞分化的作用及其机制。方法通过体外培养原代骨髓巨噬细胞（BMMs）,观察不同浓度冬凌草甲素对BMMs增殖的抑制作用和破骨细胞分化的影响;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞数目和铺展率;qRT-PCR法检测破骨细胞降钙素受体（CTR）、组织蛋白酶K（CTSK）、活性T细胞核因子c1（NFATc1）mRNA表达水平。结果与对照组相比,经冬凌草甲素处理48、72h后,6.4滋M以上的冬凌草甲素对BMMs的增殖有明显抑制作用,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;经冬凌草甲素处理96h后,3.2滋M以上的冬凌草甲素对BMMs的增殖有明显抑制作用,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;在NF-资B受体活化因子配体诱导下,与对照组相比,0.4、0.8滋M冬凌草甲素可明显减少破骨细胞分化数目和铺展率（均P＜0.01）,且其CTR、CTSK、NFATc1mRNA表达水平均下调（均P＜0.01）。结论冬凌草甲素通过下调破骨细胞分化转录调控因子NFATc1的表达抑制破骨细胞的分化。     

经皮微创椎弓根钉技术治疗胸腰椎骨折168例疗效及安全性评价

目的探究经皮微创椎弓根钉技术治疗胸腰椎骨折的疗效及安全性。方法选取我院2014年1月~2017年1月期间收治的确诊为胸腰椎骨折的336例患者为研究对象,采用随机数表法分组,对照组(n=168)采用切开复位内固定术,观察组(n=168)采用经皮微创椎弓根钉技术。比较两组的围手术期相关指标、矫形效果、疼痛情况的差异,评估两组疗效,观察并发症。结果两组的手术时间无明显差异(P0.05);与对照组比,观察组的术中出血量少、住院时间短、手术切口小,差异均有统计学意义(P0.05);与术前比,在术后的1、6、12个月两组的椎体前缘高度比、Cobb角均有明显改善(P0.05),观察组术后1个月的椎体前缘高度比小于对照组(P0.05);观察组在术后第1个月的VAS疼痛评分低于对照组(P0.05);观察组治疗总效率明显高于对照组(P0.05);观察组和对照组分别出现8例(4.76%)、11例(6.55%)切口愈合不良的病例,两组均未出现严重并发症,差异无统计学意义(P0.05)。结论经皮微创椎弓根钉技术治疗胸腰椎骨折的效果与传统切开复位术相当,且其具有创伤小、减少出血量、减轻术后疼痛的优势,促进患者术后康复。     

嘌吗啡胺靶向激活Hedgehog信号 通路调控骨髓来源间充质干细胞 成骨-成脂分化平衡的机制研究

目的 探讨小分子药物嘌吗啡胺（PM）靶向激活 Hedgehog（Hh）信号通路后对骨髓来源间充质干细胞（BMSCs）成骨-成脂分化平衡的影响及其机制。 方法 通过细胞计数试剂盒-8 法评估 PM 对 BMSCs 增殖的细胞毒性,并通过检测 不同浓度 PM 处理下 BMSCs 细胞内 Gli1 转录水平,选择合适的 PM 处理浓度。随后通过诱导 BMSCs 成骨、成脂分化,检测 ALP 表达（ALP 染色）、钙结节（Von Kossa 矿化结节染色法）评估 PM 对 BMSCs 成骨诱导的影响,采用油红 O 染色检测 PM 对 BMSCs 成脂诱导的影响。最后通过 qRT-PCR 法验证 PM 干预下 BMSCs 成骨-成脂分化过程中相关核心转录因子、特征基因的变 化。 结果 10 μmol/L 及以下浓度的 PM 对 BMSCs 增殖无明显毒性反应,并且 2 μmol/L PM 即可显著激活 BMSCs 细胞内 Hh 信 号通路（P＜0.01）。在 2 μmol/L PM 干预下,BMSCs 成骨分化诱导时 ALP 表达、钙结节形成较对照组显著增强,而成脂分化诱 导时脂滴的形成受到了明显的抑制。在此基础之上,qRT-PCR 结果提示 2 μmol/L PM 可明显促进 BMSCs 成骨分化过程中核 心转录因子 Sp7 以及特征性基因 ALP、整合素结合唾液酸蛋白（Ibsp）的转录,并抑制成脂分化过程中核心转录因子过氧化物酶 体增殖物激活受体 γ（Pparg）、CCAAT 增强子结合蛋白 α（Cebpa）以及特征基因围脂滴蛋白 1（Plin1）、脂联素（Adipoq）、脂肪 酸转位酶（Cd36）的转录。 结论 PM 可通过激活 Hh 信号通路,调控成骨-成脂分化相关核心转录因子,促进 BMSCs 成骨分化 并抑制其成脂分化。     

上皮细胞间质转化和骨肉瘤侵袭转移相关性研究进展

骨肉瘤是最常见成骨的恶性肿瘤,约占骨恶性肿瘤的20％左右,其特点是恶性程度高、易复发、易转移、预后差。骨肉瘤细胞易发生转移侵袭是造成预后差的主要原因之一,而骨肉瘤细胞的侵袭及转移与细胞黏附分子及细胞骨架等方面有关。上皮性钙黏蛋白（E—eadherin）是一种重要的细胞间黏附分子,维持组织结构形态和结构,抑制细胞游走和迁徙。     

草乌甲素抑制破骨细胞分化的作用及其机制研究

目的探讨草乌甲素抑制破骨细胞分化的作用及其机制。方法采用CCK-8法检测草乌甲素对小鼠骨髓来源单核/巨噬细胞（BMMs）存活率的影响。随后基于BMMs体外破骨细胞诱导分化培养体系,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测草乌甲素对破骨细胞分化的影响,采用OsteoAssay无机结晶涂层细胞培养板检测草乌甲素对破骨细胞骨吸收能力的影响,采用qRT-PCR法检测草乌甲素对活化T细胞核因子1（NFATc1）、耐酒石酸酸性磷酸酶（ACP5）、破骨细胞关联受体（OSCAR）、组织蛋白酶K（CTSK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达水平的影响。结果与对照组相比,经不同浓度草乌甲素处理48、72、96h后,80滋M及以下的草乌甲素对BMMs存活率均无明显抑制作用（均P＞0.05）。与对照组比较,5滋M草乌甲素处理组和10滋M草乌甲素处理组破骨细胞数目、破骨细胞相对大小、相对骨吸收面积均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;与对照组比较,5滋M草乌甲素处理组破骨细胞NFATc1、ACP5、OSCAR、CTSKmRNA表达水平均下降,10滋M草乌甲素处理组NFATc1、ACP5、OSCAR、CTSK、MMP-9mRNA表达水平均下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论草乌甲素可通过下调BMMs破骨细胞分化过程中NFATc1的转录,抑制破骨细胞分化及其介导的骨吸收过程。