人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体.方法:用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,并以ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果:在原核细胞中高效表达和纯化了人CD1d分子胞外区蛋白,用其免疫小鼠,获得了效价高、特异性较好的多克隆抗体,免疫组织化学检测显示该抗体可识别人小肠组织中的天然CD1d分子.结论:成功制备了人CD1d分子胞外区重组蛋白及鼠抗人CD1d分子胞外区抗体,为进一步建立人CD1d分子的免疫学检测方法及其生物学功能的深入研究奠定了基础.     

鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。     

人肥大细胞类糜蛋白酶分泌型真核表达载体的构建

目的构建人肥大细胞类糜蛋白酶（MC—Chy）分泌型真核表达载体。方法以MC-Chy基因的质粒pDEST17／CMA为模板,通过PCR扩增出融合有免疫球蛋白K链信号肽的人MC—Chy基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3．1,通过PCR、酶切和DNA测序鉴定。结果PCR扩增出免疫球蛋白K链融合人MC-Chy基因,DNA序列测定结果显示目的基因片段正确插入真核表达载体pcDNA3．1。结论成功构建了人MC-Chy分泌型真核表达载体,为下一步重组类糜蛋白酶的制备及其功能的深入研究奠定了基础。     

建构主义学习理论应用于检验医学实验课教学改革的尝试

应用和遵循建构主义学习理论和教学设计原则,对检验医学专业<临床免疫学检验>实验教学进行教学改革尝试.实践表明,建构主义学习理论应用于教学实践,能发挥学生学习的主体性,有助于提高学生的自主学习能力和对所学知识的理解;明确合作学习的理念,学会与人合作、沟通;有利于提高学生实际操作能力、分析和解决问题的能力:有助于培养学生的创新思维能力和科研素质.     

对检验医学人才培养模式的思考

国内开办医学检验专业的院校越来越多,目前的培养模式主要是培养技师型医学检验人才,尚不能就临床问题与医生进行良好的沟通。随着社会的发展,加强检验人员与临床医生沟通的呼声越来越高,培养具有高素质的检验医学人才显得尤为重要。本文对检验医学人才的培养模式进行了初步探讨。     

人肥大细胞羧肽酶真核表达重组质粒DNA的免疫原性观察

目的观察人肥大细胞羧肽酶（hMC-CP）真核表达重组质粒DNA的免疫原性。方法以分泌性和非分泌性hMC-CP真核表达重组质粒（pcDNA3.1/S-CP,pcDNA3.1/CP）DNA为免疫原,分别以皮下及肌肉两种途径免疫BALB/c小鼠,间隔免疫时间2周,共免疫3次;末次免疫后第7天,采用ELISA法检测血清中特异性抗体的产生。结果以pcDNA3.1/S-CP、pcDNA3.1/CP DNA免疫小鼠后,都能诱导产生抗hMC-CP抗体,而pcDNA3.1空载体和NS则不能。通过肌注途径,以pcDNA3.1/S-CP免疫小鼠所得血清抗体效价均值为1∶6 400,以pcDNA3.1/CP免疫小鼠所得血清抗体效价均值为1∶3 200,两者比较,P〉0.05;通过皮下注射途径,以pcDNA3.1/S-CP、pcDNA3.1/CP DNA免疫小鼠所得的免疫血清抗体效价均值均为1∶3 200,两者比较,P〉0.05;而同一载体肌肉与皮下免疫,所得血清抗体效价比较,P〉0.05。结论 hMC-CP真核表达重组质粒DNA具有较好的免疫原性,表达质粒是否为分泌性表达不影响其免疫原性,其免疫原性也不受质粒DNA注射途径的影响。     

采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA

目的：建立一套稳定可靠的方法，对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法：在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上，设计简并引物，基于高质量Lǘ草花粉RNA，逆转录合成cDNA。采用Touchdown方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增。同时借助梯度PCR程序，对引物扩增的简并性作进一步强化，并结合RACE技术获取全长cDNA．进而对Lǘ草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。结果：成功地获得3个全长cDNA克隆。序列分析显示．这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79％-85％，初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白(profilin)的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现，这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在4个碱基的差异，提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序．可使引物的简并性得到进一步扩展。结论：简并引物与Touchdown梯度PCR相结合的方法．能够对以Lǘ草为代表的基因组未曾深入研究的物种中的过敏原同源基因进行有效克隆.     

临床免疫学检验实验课PBL教学初探

临床免疫学检验是医学检验专业重要的专业课程之一,实验教学改革是本课程教学改革的重要内容。近年来,我们在对该课程进行综合改革的基础上,将PBL教学法引入到实验课的教学中。实践证明推行PBL教学对培养学生的思维能力、分析问题能力、自主学习能力和创新能力,培养团队精神,提高学生的动手能力起到了重要的促进作用。     

BCG 65KD热休克蛋白的纯化

目的：研究卡介苗（ＢＣＧ）６５ＫＤ热休克蛋白的提纯方法。方法：ＢＣＧ经３７℃恒温振荡培养两周，４２℃热休克处理２ｈ，培养液经离心、抽滤、盐析沉淀、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离、电泳洗脱等步骤纯化。结果：提纯产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，其电泳区带在６５ＫＤ位置，经抑制试验表明具有较高抗原活性。结论：流程方法简单、实用，有助于对ＩＤＤＭ的诊断及其深入研究。     

shRNA抑制NANOG基因表达对肾癌细胞A498侵袭力的影响

目的研究抑制NANOG基因表达对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法以人肾癌细胞系A498细胞为研究对象,转染NANOG短发夹RNA(NANOG-shRNA)抑制A498细胞NANOG基因表达。通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达水平的变化,划痕实验和侵袭实验检测A498细胞侵袭力的变化。结果 qRT-PCR检测结果显示A498细胞转染NANOGshRNA后,其MMP-2与MMP-9基因的表达水平与对照组相比,分别下降了65%和60%,差异均有统计学意义(P0.05),侵袭实验显示A498细胞转染NANOG-shRNA后,细胞的侵袭能力下降,与对照组相比,穿膜细胞数下降62.5%,孔底部细胞数减少48%,差异有统计学意义(P0.05),划痕实验结果显示A498细胞转染NANOG-shRNA后,细胞划痕愈合程度较对照组显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论抑制NANOG基因表达后,A498细胞的侵袭能力下降,可能与MMP-2及MMP-9的表达水平下降有关。