反义端粒酶催化亚单位抑制喉癌细胞生长的离体实验研究

目的：探讨人端粒酶催化亚单位（hTERT)反义寡核苷酸对人喉癌细胞株Hep-2的生长抑制作用。方法；用脂质体包裹hTERT反义寡核苷酸转染体外培养的Hep-2细胞，分别于转染后24、48、72h用MTT法检测细胞增殖活性，转染的72h行HE染色及端粒酶活性测定。结果：转染后细胞增殖活性降低；细胞生长密度下降；端粒酶活性受到抑制。结论：hTERT反义寡核苷酸短期内可以降低端粒酶活性、抑制喉癌细胞的生长。     

近5年国家自然科学基金资助耳鼻咽喉科学研究结题分析及成果简介

This paper reviewed and analyzed the 72 fulfilled projects in the discipline of Otorhinolar-yngology supported in division Ⅱ of basic research of clinical medicine by the National Natural Science Foun-dation of China (NSFC) from year 2002 to 2006, and gave a brief introduction to the part of research a-chievements. The science foundation promotes Otorhinolaryngology to a quick development, and produces some outstanding research achievements with international recognition. Thus, it plays an important role in el-evating the level of discipline and bringing up specialists. According to the retrospection and analysis of the fulfilled projects and their research achievements, we hope it can objective and overall reflect research pro-gress in the field of Otorhinolaryngology, and offer as a reference to the relevant researchers and scientific re-search managers.     

小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达，探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA，其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型，将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内，观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达；以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功，5d后可见皮下肿瘤形成，14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后，共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制，细胞分裂少见，可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较，转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％，P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05），p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长，其机制可能是诱导PCNA下调，促进p53蛋白表达所致。     

靶向PD-1及PD-L1免疫治疗所致肿瘤爆发性进展的研究进展

靶向程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1（programmed cell death1/programmed cell death ligand 1，PD-1/PD-L1）免疫治疗对实体瘤和血液肿瘤疗效明显，但是部分患者反而出现疾病超进展（hyperprogressive disease，HPD）。因此，建立统一的HPD诊断标准、筛选强有效的HPD预测因素、根据患者自身情况开展个体化治疗已然成为免疫治疗亟待解决的重要问题。本文对HPD定义、潜在机制、鉴别诊断、预测因素及临床管理等方面进行综述，旨在为更好地开展肿瘤免疫治疗提供有益借鉴。     

短发夹RNA对人骨髓间充质干细胞生长增殖的影响

目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)生长增殖的影响,探讨靶向hTERT的RNA干扰技术临床应用的安全性。方法:根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂(德国metafectene)和正常培养液处理细胞。24h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况;24h、48h、72h用MTT法检测细胞增殖活性;48h后进行HE染色、RT-PCR及端粒酶活性检测。结果:①共聚焦显微镜下见shRNA1及shRNA2组有大量的细胞表达荧光。②相应时间点各组细胞生长增殖无明显差异(P>0.05);HE染色发现,同等培养条件下,各组细胞生长密度及形态无明显变化。③RT-PCR显示各组细胞均无hTERT mRNA的表达;端粒酶活性为阴性。结论:靶向hTERT mRNA的shRNA对正常hMSCs的生长增殖无明显影响,该方法对不表达hTERT的正常体细胞可能是安全的。     

近5年国家自然科学基金资助耳鼻咽喉科学研究结题分析及成果简介

This paper reviewed and analyzed the 72 fulfilled projects in the discipline of Otorhinolar-yngology supported in division Ⅱ of basic research of clinical medicine by the National Natural Science Foun-dation of China (NSFC) from year 2002 to 2006, and gave a brief introduction to the part of research a-chievements. The science foundation promotes Otorhinolaryngology to a quick development, and produces some outstanding research achievements with international recognition. Thus, it plays an important role in el-evating the level of discipline and bringing up specialists. According to the retrospection and analysis of the fulfilled projects and their research achievements, we hope it can objective and overall reflect research pro-gress in the field of Otorhinolaryngology, and offer as a reference to the relevant researchers and scientific re-search managers.     

早幼粒细胞性白血病基因蛋白在喉癌和鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨早幼粒细胞性白血病基因（PML）蛋白在喉癌和鼻咽癌组织中的表达及意义。方法：运用免疫组织化学SP法检测56例喉癌和34例鼻咽癌患者术后石蜡标本中PML蛋白的表达水平，分析其与肿瘤病理分级和T分级、淋巴结转移的关系。结果：①在不同病理分级的喉癌组织中，PML蛋白表达水平随着肿瘤恶性程度的升高而降低（P〈0．05）；②在不同T分级的喉癌和鼻咽癌组织中，PML蛋白表达水平随着肿瘤的发展而降低（P〈0．05）；③与喉癌组织相比，鼻咽癌组织中PML蛋白表达相对较低（P〈0．05）；④在有无淋巴组织转移的鼻咽癌组织和喉癌组织中PML蛋白表达均差异无统计学意义。结论：PML蛋白与喉癌和鼻咽癌的病理分级和T分级的关系密切，提示PML在抑制肿瘤生长中可起到一定的作用。在肿瘤的转移方面，PML所起作用较小。     

DNA双链断裂修复蛋白RAD51在喉癌中的表达及意义

目的：探讨DNA双链断裂修复蛋白RAD51在喉癌细胞中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测喉癌和声带息肉组织中RAD51的表达情况，并结合肿瘤的临床TNM分期、淋巴结转移及其病理分化程度等分析它在肿瘤发生发展中的作用。结果：①RAD51在喉癌组中的表达明显强于声带息肉组，差异有统计学意义（P〈0.01）；②RAD51在喉癌组3～4期中的表达强于1～2期喉癌，差异有统计学意义（P〈0．01）；③RAD51在低、中分化喉癌中的表达强于高分化喉癌（P〈0．05），差异有统计学意义；④RAD51在有淋巴结转移喉癌中的表达强于无淋巴结转移喉癌，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：RAD51在喉癌的发生、发展中可能起重要作用，它可能成为临床诊断和治疗喉癌的一个潜在靶点，对预测肿瘤的预后有一定的意义。     

Treg细胞亚型在首诊癌症患者外周血中的表达及意义

目的 探讨癌症患者外周血中调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)亚型即1型辅助性T细胞(type 1 helper T cell, Th1)样Treg细胞(T-bet⁺Treg)、Th2样Treg细胞(GATA3⁺Treg)、Th9样Treg细胞(Pu-1⁺Treg)、Th17样Treg细胞(RORγ⁺Treg)及滤泡型辅助性T细胞(follicular helper T cell, Tfh)样Treg细胞(CXCR5⁺Treg)的表达情况及其对应的CD4⁺T细胞子集：Th1、2型辅助性T细胞(type 2 helper T cell, Th2)、9型辅助性T细胞(type 9 helper T cell, Th9)、17型辅助性T细胞(type 17 helper T cell, Th17)、Tfh的表达。方法 将23例癌症患者设为研究组，23例门诊健康体检者设为正常对照组，采用流式细胞术检测患者外周血中T-bet^+...