甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人小细胞肺癌H446细胞的作用研究

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxycytidin,5-Aza-CdR）在小细胞肺癌中发挥抗瘤效应的可能性及可能机制。方法将5-Aza-CdR体外作用于人小细胞肺癌H446细胞,应用光镜、MTT法、流式细胞术、自发光荧光仪等方法观察H446细胞的形态学、增殖能力、细胞周期分布、药物敏感性、caspase-3/7活性及Rh123外排效率等的变化,同时应用甲基化敏感性随机引物PCR（MS-AP-PCR）法检测H446细胞基因组DNA甲基化水平。结果 5-Aza-CdR可明显降低H446细胞的基因组DNA甲基化水平,并抑制其细胞增殖。随着5-Aza-CdR处理时间延长,H446细胞中G1期细胞显著增多[由（56.3±2.5）升至（73.75±2.47）,P〈0.05],G2期细胞显著减少[由（19.1±6.8）降至（9.0±1.5）]。同时,H446细胞增殖能力较对照组显著降低（P〈0.01）,呈浓度依赖性,但对顺铂等化疗药物的敏感性无显著性差异（P〉0.05）。此外,H446细胞的Rh123外排效率显著增加[由（11.5±2.3）升至（23.8±3.0）,P〈0.05],而caspase-3/7活性显著增强[由（257510.5±12861.5）升至（538585.5±10897.2）,P〈0.05]。结论 5-Aza-CdR在体外对人小细胞肺癌H446细胞具有较强的抗癌活性,低甲基化细胞毒作用（包括抑制细胞增殖、G1期阻滞、诱导细胞凋亡）以及恢复抑癌基因表达可能是其主要作用机制。     

支气管肺泡灌洗治疗社区获得性肺炎30例疗效观察

目的:探讨支气管肺泡灌洗术治疗社区获得性肺炎的疗效。方法:将60例社区获得性肺炎随机分为治疗组和对照组。每组各30例,对照组给予常规抗感染、祛痰、体位引流、支持治疗,治疗组在对照组治疗的基础上行经纤支镜肺泡治疗术。观察两组患者的临床症状、体征改善情况以及胸部X线下病变吸收情况。结果:治疗组临床症状缓解快、住院时间缩短、无严重并发症发生。结论:支气管肺泡治疗术治疗社区获得性肺炎疗效较好。     

Autoschizis(胞质自切):一种新的细胞死亡方式

Autoschizis（胞质自切）是近年来文献提到的一种与典型凋亡截然不同的新的细胞死亡方式,主要表现为严重的膜损伤和通过自行切除造成不含细胞器的胞浆进行性丢失。本文拟对其形态学特征、生化改变、信号调控的初步研究进展及其与凋亡的区别进行综述,以利于进一步加深对细胞死亡方式的认识。     

多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP凋亡的研究

目的探讨凋亡在多西紫杉醇对人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP作用中的地位及其机制。方法应用透射电镜、流式细胞术、Annexin V／PI和免疫细胞化学等方法，观察多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞形态学、细胞周期、凋亡以及Fas等蛋白表达的影响。结果多西紫杉醇作用后，A549及A549／CDDP细胞内空泡明显增多，可见少数凋亡小体和脱落的不舍细胞器成分的细胞质，后者还出现大量多微核化细胞。多西紫杉醇具有显著的G2期阻滞作用。可同时诱导细胞凋亡、坏死和胞质自切。并以后两者为主。Fas蛋白在多西紫杉醇作用后表达明显增强。结论多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞均具有显著的G2／M期阻滞作用，能同时诱导其凋亡、坏死和胞质自切。以后两者为主。Fas基因可能在多西紫杉醇抗肿瘤作用中具有重要作用。     

缺氧对人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2表达的影响及其机制探讨

背景与目的:缺氧对DNA错配修复系统(mismatch repair, MMR)活性的调控是肿瘤细胞遗传不稳定的重要原因,但其机制尚不完全清楚.本研究拟观察缺氧状态下人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2的表达变化,初步探讨DNA甲基化在其中的作用.方法:应用RT-PCR、Western blot等方法检测H446细胞在缺氧状态下以及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后MLH1、MSH2基因的表达水平,同时,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态.结果:缺氧状态下,H446细胞MLH1、MSH2基因在转录和翻译水平均显著性降低.同时,随着缺氧时间延长,MLH1基因启动子逐渐由非甲基化状态、部分甲基化状态转变为完全甲基化状态,而MSH2基因启动子则直接由非甲基化状态转变为完全甲基化状态.甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可使MLH1、MSH2基因表达水平有所恢复,但去除5-Aza-CdR后其表达再次下调.结论:启动子甲基化可能是缺氧诱导H446细胞显著性下调MLH1、MSH2基因表达的重要机制,甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可恢复其表达.     

缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响

目的研究缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法体外培养人小细胞肺癌细胞H446,置于缺氧(3%O2)条件下培养,分别于0、12、24、48、72 h后提取细胞基因组DNA,用甲基化敏感性随机引物PCR(MS-AP-PCR)方法检测基因组DNA甲基化状态。结果在缺氧状态下,H446细胞经酶解后的扩增谱带明显增多,且荧光强度较强,以24 h后明显,表明H446细胞基因组DNA甲基化水平在缺氧24 h后即发生明显升高,主要表现为多位点的异常甲基化。结论缺氧可能是造成肿瘤细胞内甲基化失衡的重要原因之一。     

经纤维支气管镜生物胶联合滑石粉治疗COPD并发肺大疱、难治性气胸撤机困难患者一例

临床资料患者男性,64岁。因＂反复咳嗽、咳痰16年,活动后气促9年,双下肢水肿2年,再发3 d＂,于2010年6月10日入院。既往有明确的＂慢性阻塞性肺疾病（COPD）、慢性肺源性心脏病、双肺肺大疱、右侧自发性气胸＂病史。入院查体：体温36.4℃,脉搏130次/min,     

脂多糖结合蛋白与CD14结合位点模拟肽的初步筛选

目的 应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14结合位点的多肽序列.方法 以CD14为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定筛选后的噬菌体克隆与CD14的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合CD14的效力.结果 挑取的20个噬菌体克隆中,16个结合实验鉴定阳性,取6个亲和力最高的克隆测序,得到3条不同编码的12肽序列(FHRWPTWPLPSP、MHRHPPPITLPL和AAFHRAHHLTSP),3条多肽与LBP一级结构同源性低,为模拟肽.6个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率.结论 用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与CD14结合位点的模拟肽.     

DNA错配修复基因甲基化在H446细胞获得性耐药中的作用

目的 探讨DNA错配修复基因MLH1（human MutL homolog 1）、MSH2（human MutS homolog2）甲基化在人小细胞肺癌H446细胞获得性耐药中的作用。方法 RT—PCR及Western blot法检测H446细胞及其多药耐药细胞H446／DDP中MLH1、MSH2基因的mRNA表达和蛋白表达，甲基化特异性PCR（MSP）法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态。结果 H446／DDP细胞中MLH1、MSH2基因的mRNA及蛋白水平均较H446细胞显著降低（P〈0．01），且其启动子甲基化程度明显增强。结论 DNA错配修复基因MLH1、MSH2启动子甲基化诱导其表达下调可能是人小细胞肺癌获得性耐药的重要机制之一。